CN106086199B 一种利用不含透明带的囊胚培养液检测胚胎染色体异常的方法 （序康医疗科技（苏州）有限公司）

113.一种利用不含透明带的囊胚培养液检测胚本发明提供了一种利用不含透明带的囊胚发明提供了一种体外非治疗性的利用囊胚培养述胚胎在所述囊胚培养体系中培养3-6天，较佳地，4天后，从所述培养体系中分离出所述培养除IVF和ICSI技术过程中多余精子和母源颗粒细2(iii)分离步骤(ii)中获得的培养液，即为用于鉴定所述胚胎染色体是否异常的培养3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述9.一种制备基因检测样本或染色体检测样本的方法(b)将步骤(a)的不含透明带的胚胎转移到囊胚培养微滴中培养0.5-3天，从而获得含(c)分离步骤(b)中获得的培养液，即为用于鉴定所述胚胎染色体是否异常的培养液，3不能从根本上区分胚胎质量好坏。有研究表明即使是一些形态良好的优质囊胚是非整倍利用囊胚培养液检查胚胎染色体的方法也存在着IVF和ICSI技术过程中多余精子和母源颗[0006]因此，本领域迫切需要开发一种既可去除IVF和ICSI技术过程中多余精子和母源[0007]本发明的目的是提供一种既可去除IVF和ICSI技术过程中多余精子和母源颗粒细[0008]本发明的第一方面提供了一种体外利用囊胚培养液检测4[0013]在另一优选例中，所述步骤(a)中分离出的培养液的体积为所述单胚胎培养体系[0015](i)将所述培养液与裂解液混合，从而获得含有所述培养液与裂解液的第一混合5[0040](ii)将步骤(i)的不含透明带的胚胎转移到囊胚培养微滴中培养0.5-3天(较佳[0041](iii)分离步骤(ii)中获得的培养液，即为用于鉴定所述胚胎染色体是否异常的[0054]图3显示了使用本发明的技术方案对一个正常IVF胚胎进行检测时，因排除了干[0055]图4显示了使用本发明的技术方案对一个异常IVF胚胎进行检测时，因排除了干6[0064]本发明提供了一种对囊胚进行培养后的乏培养液(depletedmedium)(即从所述[0070](i)将所述培养液与裂解液混合，从而获得含有所述囊胚培养液与裂解液的第一7具体去除透明带的方法参见参考文献1(Acomparisonoffourdifferenttechniques[0090](3)将至少3个去除透明带的胚胎分别依次转移到至少3个30微升囊胚培养液微滴(保证一个微滴中只有一个胚胎)，每个微滴轻柔吹吸漂洗2-3次，之后再将胚胎转移至37步骤或放入-20℃或-80℃冷冻保存。8[0101](8)向PCR反应管中加入60微升扩增混合液(所述扩增混合液的成分为10-25mMTritonX-100。优选地，所述扩增混合液的成分为15mMTris-HCl，15mM(NH4)2SO4，20mMDMSO和2％TritonX-100)。9[0114](8)向PCR反应管中加入60微升扩增混合液(所述扩增混合液的成分为10-25mMTritonX-100。优选地，所述扩增混合液的成分为15mMTris-HCl，15mM(NH4)2SO4，20mMDMSO和2％TritonX-100)。[0117](10)将扩增后的DNA产物按常规方法进行二代测序，以鉴定胚胎的染色体状态是[0123](3)将至少3个去除透明带的胚胎分别依次转移到至少3个30微升囊胚培养液微滴(保证一个微滴中只有一个胚胎)，每个微滴轻柔吹吸漂洗2-3次，之后再将胚胎转移至37将其转移至30微升裂解液(pH7.8的30mMTris-Cl,2mMEDTA,20mMKCl,0.2％TritonX-步骤或放入-20℃或-80℃冷冻保存。两个IVF胚胎(样本C和D)分别以囊胚细胞活检检测的方法和囊胚培养液检测的方法评估其[0133]利用常规NICS方法(即仅换液，不去透明带培养)对一个IVF胚胎的囊胚培养液和法(图