T-SNLT 0003-2025 农用壳寡糖增效剂制备工艺技术规程

ICS65.020.20CCSB05T/SNLT2025-02-25发布石河子农产品流通协会发布 2规范性引用文件 3术语和定义 3.1壳聚糖Chitosan 3.2壳寡糖Chito-oligosaccharide 3.3酶制剂Enzymepreparation 3.4酶解Enzymolysis 4原料准备 4.1壳聚糖 4.2酶制剂 5溶液配置 5.1溶解液 5.2酶制剂溶液 6壳聚糖溶解 7酶解反应 7.1酶的添加 7.2温度控制 7.3pH值调节 37.4反应时间控制 8灭酶处理 8.1灭酶方式 8.2验证灭酶效果 9分离纯化 9.1过滤除杂 9.2浓缩干燥 10成品检测与包装 10.1成品检测 10.2包装操作 本文件按照GB/T1.1-2020给出的规则起草。本文件由阿克苏嘉邦肥业有限公司和石河子大学提出并归口。本文件起草单位：阿克苏嘉邦肥业有限公司、石河子大学。本文件主要起草人：邵长龙、潘旭东、刘俊林、郑伟、王开勇、樊华、王雪静、陆璐、张博骅、刘懂飞。2农用壳寡糖增效剂制备工艺技术规程本文件规定了壳聚糖酶解制取农用壳寡糖增效剂的生产操作流程、生产技术管理等技术规范。确保稳定、高效地获取高质量的酶解产物，保障生产过程符合质量与安全要求。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本使用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB5083生产设备安全卫生设计总则GB/T20370酶制剂分类导则GB/T39030-2020酶制剂生理活性评价技术规范QB/T5503-2020壳寡糖3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1壳聚糖Chitosan指一种天然的含氮多糖类高分子化合物，由N-乙酰-D-葡萄糖胺和D-葡萄糖胺通过β-（1→4）糖苷键连接而成的直链多糖，其外观通常为白色或淡黄色的半透明片状或粉末状固体，无味、无臭，可溶于部分稀酸溶液，具有良好的生物相容性、生物可降解性、抗菌性等诸多优良特性。3.2壳寡糖Chito-oligosaccharide指聚合度在2-20之间的低聚糖.是由N-乙酰-D-葡萄糖胺和（或）D-葡萄糖胺通过β-（1→4）糖苷键连接而成的寡糖链，常为白色或淡黄色的粉末状，易溶于水，具备多种优异的生理活性功能，像能调节机体免疫、抑制肿瘤细胞生长、抗氧化、抗菌等。3.3酶制剂Enzymepreparation指从生物（包括动物、植物、微生物等）中提取出来的，具有特定催化功能的一类生物制品。3.4酶解Enzymolysis指一种利用酶的催化作用，使底物分子发生水解反应的过程。4原料准备4.1壳聚糖选用脱乙酰度≥85%、灰分≤2%、水分≤10%的壳聚糖，外观无结块、霉变等情况。4.2酶制剂采用壳聚糖酶、木瓜蛋白酶、纤维素酶复合酶制剂，酶的活性≥10万u/g，并查验保质期及保存条件是否符合要求。5溶液配置5.1溶解液采用柠檬酸溶液作为溶解液，浓度控制在0.5%-1%（质量分数），按照料液比（壳聚糖质量与溶剂体积比）1:10-1:20进行配置。5.2酶制剂溶液按照底物（壳聚糖）质量的0.5%-2%（质量分数）称取复合酶，用少量缓冲溶液（pH值在4-6的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液）溶解。6壳聚糖溶解在带有搅拌装置的反应釜中，将称取好的粉碎至80-100目的壳聚糖原料缓慢加入到已制备的稀酸溶液中，加料过程中开启搅拌，搅拌速度设定为200-300转/分钟，持续搅拌1-2小时，期间观察壳聚糖溶解情况，确保其完全溶解，得到均匀、澄清的壳聚糖溶液。完全溶解后，测量pH值，并用柠檬酸或氢氧化钠调整溶液pH值为5左右。7酶解反应7.1酶的添加将预先溶解好的酶制剂溶液缓慢加入到已溶解好的壳聚糖溶液中，添加过程中保持搅拌（搅拌速度调整为100-150转/分钟），使酶均匀分布在反应体系内，防止局部酶浓度过高影响反应效果。7.2温度控制通过反应釜的温度控制系统，将反应体系温度调节至40-50℃,并维持在此温度范围内，温度波动控制在±1℃以内，可根据实际情况选择合适的加热或恒温方式（如水浴加热、电加热等）。7.3pH值调节反应开始前，检测反应体系的pH值，将pH值调节并维持在4-6之间，每0.5-1小时检测一次pH值，根据检测结果及时进行微调，确保pH值稳定在设定范围内。7.4反应时间控制4酶解反应持续进行，总反应时间一般设定为3-6小时。在反应过程中，按照每1-2小时的间隔进行取样检测，根据检测的壳寡糖聚合度、还原糖含量等指标来判断反应进程，当产物达到预期的质量要求时，即可结束反应。8灭酶处理8.1灭酶方式酶解反应结束后，需进行灭酶操作以终止酶的活性，调节pH值至强碱（pH值大于10）条件，保持一段时间来灭酶。8.2验证灭酶效果对壳聚糖酶、木瓜蛋白酶、纤维素酶复合酶采取不低于100℃热力灭活，灭酶后，再次取样检测酶活，确保酶活已降低至极低水平，基本无酶解活性，避免后续加工处理过程中酶继续作用影响产品质量。9分离纯化9.1过滤除杂灭酶结束后利用碟式离心机对溶液进行粗过滤，再用袋式过滤器进行精过滤，去除未反应的壳聚糖大颗粒、酶蛋白沉淀等杂质，收集澄清的滤液。9.2浓缩干燥采用喷雾干燥对收集的澄清滤液进行干燥，干燥器的进风温度控制在180-200℃,燥过程中要控制好温度、压力等参数，保证产品质量和性状良好。10成品检测与包装10.1成品检测按照相关质量标准，检测成品壳寡糖的各项指标，如聚合度分布、水分含量（一般要求在1