《细胞因子诱导的杀伤细胞检验规范》

ICS03.080.99

A00/09

团体标准

P/CIQA-196-2024

细胞因子诱导杀伤细胞检验规范

Specificationsforcytokine-inducedkiIlercelItestingand

inspectionceIIs

xxxxxx发布xxxxxx实施

中国出入境检验检疫协会发布

P/CIOA-196-2024

细胞因子诱导杀伤细胞检验规范

1范围

本文件规定了细胞因子诱导杀伤细胞的一般要求、技术要求、检验方法、检验规则、信息与数据管

理和废弃物处理。

本文件适用于依法通过资质认定的检验、检测机构对细胞因子诱导杀伤细胞的检验。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件,

仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T22576-2018医学实验室质量和能力的要求

GB/T27025-2019检测和校准实验室能力的通用要求

GB/T25068.1-2020信息技术安全技术网络安全

GB/T39729-2020细胞纯度测定通用要求

GB/T42076-2022生物技术细胞计数

GB/T40365-2021细胞无菌险测通则

GB/T42398-2023细胞培养洁净室设计技术规范

GB39707-2020医疗废物处理处置污染控制标准

WS233病原微生物实验室生物安全通用准则

WS/T360-2024流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南

JJF1001-2018通用计量术语及定义技术规范

中华人民共和国药弗（三部）

全国临床检验操作规程（第四版）

TS0/TS20658-2017医学实验室样品采集、运送、接收和处理指南

ISO/IEC导则第1部分

ANSI/ATCCASN-0002-2022Cell.Authentication:StandardizationofShortTandemRepeat

Frofi1ing

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1细胞因子诱导杀伤细胞cytokine-inducedkiIlercells

利用密度梯度离心将患者或健康人外周血中单核细胞分离出来后，通过添加外源性细胞因子如

IFN-y.IL-2,IL-K0KT3（抗CD3的一种单克隆抗体）进行体外诱导扩增。体外扩增2-4周后,培养

基中出现大量具有强抗癌活性的异质细胞群，即为CIK细胞。

3.2效应细胞一靶细胞接触EffectivecelI-targetcelIcontact

P/CIOA-196-2024

通过将CIK细胞上的表面黏附分子白细胞功能相关抗原T(LFAT)与大多数易感肿瘤细胞上表达

的LFA7配体结合，从而导致对肿瘤细胞的细胞毒性。

3.3分泌和免疫调节Secretionandimmuneregulation

CTK细胞兼具T细胞和NK的杀伤活性，同时作为免疫细胞可以分泌多种炎性因子，如IFN-y.

INF-。、IL-2、IL-6和GY-CSF等，直接或间接参与杀伤肿痛细胞,

3.4非MHC限制NonMHOrestrictions

利用M1ICI类和II类抗体不旎阻滞CIK细胞对靶细胞的杀伤作用。

3.5CIK细胞直接细胞毒活性DirectcytotoxicactivityofCIKcells

CIK细胞表面表达某些趋化因子或趋化因子受体，可诱导其定向到达肿瘤细胞，通过细胞表面的受

体和肿瘤细胞表面的配体结合后，CIK细胞被激活丁激活的CIK细胞释放穿孔素和细胞毒颗粒如a-氮-

甲苯碳酰基-左旋-赖氨酸硫甲苯酯，这些颗粒能够直接穿透封闭的夔细胞进行胞吐，从而导致癌细胞的

裂解，整个过程不依赖于T细胞表面受体和Fas受体。

3.6细胞分化抗原clusterofdifferentiation；CD

不同谱系细胞在分化、发育、活化过程中，出现或消失的细胞表而标志。

注1：细胞衣面标志诩常采用对应的单克隆抗体米识别。

注2：己被命名的抗体有指定的CD编号，被特定抗体识别的特定抗原通常具有相同的编号。例如，被“抗CD1抗体”

识别的抗原称为“CD1抗原”。

〔来源：WS/T360—2024］

37细胞存活率cellviability

能够增殖、保持正常代谢活性的细胞占全部细胞的百分比。

注：细胞存活率具有多样性，可通过对•关键的细胞生理指标的标记来进行检测。

3.8检验examination

以确定特性的值或特征为目的的一组操作。

注：实验室检验也常称为检测或试验。

［来源:GB/T22576.1—2018,3.7,有修改］

3.9医学实验室medicallaboratory

以提供人类疾病诊断、管理、预防和治疗或健康评估的相关信息为目的，对来自人体的材料进行生

物学、微生物学、免疫学、化学、血液免疫学、血液学、生物物理学、细胞学、病埋学、遗传学或其他

检验的实验室，该类实验室也可提供涵盖其各方面活动的咨询服务，包括结果解释和进一步的适当检查

的建议。

注：这些检验也包括确定、测珏或北他描述各种物质或微生物存在与否的程序。

［来源:GB/T22576.1—2018,3.11］

3.10偏差deviation

未能遵循适当的政策、过程或程序，或未能满足实验室或适用法律法规的可接受标准。偏差可以是

计划内的，也可以是计划外的。

［来源:JJF1001-2018］

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3.11不符合nonconformity

未满足要求。

注：常用的其他术语包括：事故、不良事件、差错、事件等。

［来源：ISO/IEC导则，第1部分的ISO补充规定］

4缩略语

卜.列缩略语适用于本文件。

ADCC：抗体依赖细胞毒性(Antibody-DependentCellularCytotnxicity)

CFSE：赖基荧光素二乙酸毙拍酷亚胶酷(Carboxyfluoresceinsuccinimidylcsler)

CIK：细胞因子诱导杀伤细胞(cytokine-inducedkillercell)

HLA：人类白细胞抗原(HumanLeukocyteAntigen)

STR：短串联卡复序列(ShorlandemRepeat)

CD：细胞分化抗原(ClusterofDifferentiation)

EBV：人类疱疹病毒(EpsteirrBarrVirus)

HBV：乙型肝炎病毒(HepatitisBVirus)

HCMV：人巨细胞病毒(HumanCytomegalovirus)

HCV；丙型肝炎病毒(Hcpatit.sCVirus)

HIV：人类免疫缺陷病毒(HumanInununodeficiencyVirus)

HTLV：人类嗜T细胞病毒(HunanT-lymphotropicVirus)

HLA-DR：人白细胞抗原一DR(HumanLeukocyteAntigen-DR)

IDO：叼I味胺2,3-双加氧酶(Indolcamine2,3-dioxygenase)

PPV：猪细小病毒检测(PorcineParvovirus)

SOP：标准作业程序(StandardOperationProcedure)

5一般要求

5.1样本接收

5.1.1制定并执行待检细胞样本接收、退回和隔离的标准作业程序。

5.1.2设置专人负责样本接收。

5.1.3样本接收时应有以下记录：

a)送检机构名称：

b)送检单和检测项目；

c)细胞来源(如需，细胞来源应符合相关伦理和法规要求)；

d)细胞样本名称：

e)细胞数量及体积；

f)接收日期和时间：

g)运输记录：

h)样本的保存条件及有效期：

i)接收时外观检查：运输容器的完整性、标识的完整性；

j)接收时温度：容器达到时的温度，包括运输过程中的容器温度：

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k）接收人员：

1）接收、隔离或拒收的标识.

5.2人员

5.2.1检验人员必须具有生物学、化学、药学或医学检验等相关专业本科及以上学历，本科需3年以

上相关工作经验；研究生需1年以上相关工作经验，经培训合格后方可从事相关检验工作。

5.2.2应该建立完善的学习和培训机制，对检验人员进行细胞检验技术、流程以及实验室进出流程、

仪器设备的操作等培训，还应对检验人员进行应急事件疏散训练，培训结束并考核合格后方可上岗。

5.2.3应建立检验人员健康档案，组织定期体检，有明确传染性疾病的技术人员不得上岗操作。在岗

操作人员若患急性感染性疾病，应暂离操作岗位，经治疗确定转阴或治愈后方可继续原岗位工作。

5.2.4明确各岗位职责，不同工作岗位人员未经培训不得擅自换岗操作，对人员进行定期再培训。

5.2.5所有员工应尊重和维护信息的保密，有国家法律、法规或行业要求时，执行国家和行业的法律、

法规和要求。

5.2.6应保存检验人员档案并兀供查阅，包括：

a）教育和专业资质：

b）所有证H或执照副本（适用时）；

c）以往工作经历；

d）岗位描述：

e）新员工入职培训的证据；

f）当前岗位培训的证据；

g）能力评估：

h）继续教育和成果记录；

i）员工表现评估；

j）事故和职业危险暴露的报告。

5.3仪器设备

5.3.1建立并保持用以识别、控制、维护和监督关键设备的标准作业程序。

5.3.2应当控制设备的以下要素：

a）设备规格参数；

b）确认各个设备符合预期用途，包括精密度和准确度；

c）设备具有唯一标识。

5.3.3应校准设备确保精密度，实验室应当具备下列职能：

a）确定设备保持在己校准状态：

b）确定要进行的测量以及所要求的准确度与精密度；

c）规定设备校准的程序，包括设备型号、唯一标识、位置、检直频率、检查方法、验收标准和局

限性等详细信息：

d）设备在使用前按规定的时间间隔进行校准，维修后按要求进行验证（必要时进行校准）：

e）使用经认证符合国家认可测量标准的设备；如没有法定测量标准，应描述和记录校准的依据；

f）保护设备免于不当之调整而使其校正设定失效；

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g）规定程序以应对设备超出校准或规范：当发现设备超出校准或规范时，应评估先前检查和测试

结果的有效性，以及所提供的检测及服务与规范要求的一致性。

5.3.4应对设备实施监测、维护和检修，明确以下方面：

a）规定每台设备的清洁和消毒方法及间隔时间；

b）确保环境条件适合校准、险验、测量和测试：

c）规定当设备出现故障/停用时的应急预案，并有通知工作人员的流程；

d）监控设备以确保维持规定的运行参数；

e）确保设备的操作、维护和存放以保持设备适于使用。

5.3.5应保存设备的使用记录

5.4物料与试剂

5.4.1总则

5.4.1.1应制定标准作业程序规定细胞在检测中所有物料与试剂的验收、储存和使用，关键物料与试

剂应进行标识并可追溯。

5.4.1.2所有关键物料及试剂应使用经评估合格的供应商的产品。

5.4.1.3不同批号或同一试剂盒内的不同组分不应混用，如果混月则加验室应提供混用的方法及确认

程序和结果。

5.4.1.4新批号试剂应与正在使用的批号用适宜检测区间内的供者样品或质控物进行平行检测比对。

用丁•定性检验的试剂，样品或质控物（包含阴性、弱阳性和阳性）进行试剂批号验证；用于定量检验的

试剂，应进行新旧试剂批间差验证。

5.4.2物料与试剂的接收

5.4.2.1物料与试剂接收时应验证符合检验实验要求后才能被使用。

5.4.2.2物料与试剂的接收记录应包括：

a）物料与试剂的名称：

b）制造商名称：

c）批号；

d）接收日期：

e）生产日期和（或）有效期：

f）接收时的目测外观检查结果；

g）接收物料与试剂的人员；

h）接收或拒收的标识：

i）决定接收或拒收物料与试剂的人员的身份：

j）分析报告、制造商说明书或同等文件：

k）数量；

1）接收时温度。

5.4.3物料与试剂的保存与使用

5.4.3.1应按照制造商的书面说明进行储存和使用，并应满足规定的要求。

5.4.3.2物料与试剂应保存在合适环境条件下，保持安全、卫生和整洁的状态，避免混淆或错误使用。

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5.4.3.3应按照规定对非一次性耗材进行清洁和杀菌，清除传染物质。

5.4.3.4避免失效试剂和物料的使用。

5.4.3.5物料与试剂如在未能最终验收前，如在紧急情况使用时.应对其进行标识，以便于相关检测

报告的召回。

5.5设施和环境条件

5.5.1总则

根据GB/T27025-2019《检测和校准实验室能力的通用要求》等相关标准要求，从事生物样本检测

所需要的基础设施和环境条件应符合生物安全的要求，满足质量控制需要的洁净条件并避免微生物污染

和交叉污染。

5.5.2检测机构应拥有独立的检测设备、场所和区域，建议根据样本背景、样本类型设立不同的处理

区域。

5.5.3实验室内所有仪瑞和场所应有明显的标识、标牌，并包括殳备、房间编号、工作状态、警戒标

识和应急通道标识等。

5.5.4工作区域应及时清洁并做好维护，每日、周、月按照制定的卫生、清洁操作规程，严格进行消

毒灭菌等操作。

6技术要求

6.1细胞因子诱导杀伤细胞质■检测项目

细胞因子诱导杀伤细胞质量检测

6.2关键技术要求

6.2.1细胞鉴别

6.2.1.1细胞形态

在倒置显微镜下观察，可见细胞形态均一、大小一致、折光性强的圆形悬浮细胞。

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6.2.1.2染色体核型

正常核型应为464、或46股，无染色体缺失、异位和重排现象。

6.2.1.3短串联重复序列STR

符合人源细胞身份（位点信息），细胞组织来源单一，没有被其他种属细胞污染。

6.2,1,4表型分析

采用流式细胞术的方法，选择合适的单克隆抗体标记以下细胞分化抗原，其中细胞表型需满足下述

标准：

细胞分化抗原比例要求

CD3+>90%

CD3+CD8+275%

CD3+CD56+220%

CD16+CD56+^15%

6.2.2细胞存活率及生长活性

进行细胞计数、细胞倍增时间、细胞周期等检测，从多个维度评估细胞活性。

6.2.2.1细胞数量及存活率

采用显微镜冲数法，利用台盼蓝对细胞进行染色，在显微镜卜.直接进行口微，且可以快速的区分活

细胞和死细胞，其中：

正常培养细胞存活率295$,冻存复苏细胞存活率290$。

6.2,2.2细胞倍增时间

倍增时间参考值为20.0h-50.0ho

6.2.2.3细胞周期

5期和G2/M期比例合计应在40%-50%。

6.2,2.4细胞生长曲线

细胞稳定生长。

6.2.3安全性

6.2.3.1无菌（细菌、真菌）

均应为阴性。

6.2.3.2支原体

应为阴性。

6.2.3.3细菌内毒素

检测值W0.5EU/mLo

6.2.3.4细胞内、外源病毒因子

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HCV、HBV、HIV、EBV\CMV、HTLV、TP、PPV、牛源病毒检测、逆转录病毒检测，均应为阴性。

6.2.3.5成瘤性

应无成瘤性。

6.2.4残留物

6.2.4.1抗生素残留量

应无抗生素残留。

6.2.4.2牛血清蛋白残留量

BSA含量W50ng/mLo

6.2.4.3细胞因子残留量

应无细胞因子残留。

6.2.5生物学效力

具有肿瘤细胞杀伤能力。

7检验方法

7.1细胞鉴别

7.1.1细胞形态

按照《中华人民共和国药典》三部“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制细胞鉴别

试验”，采用显微镜法进行细胞形态鉴别。

7.1.2染色体核型

按照《中华人民共和国药典》三部“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制染色体检

杳及判定标准”进行检验，建议用一定数量（30〜50个）染色体分散良好的分裂细胞进行检验分析。

7.1.3短串联重复序列STR

参照ANS1/ATCCASN-0002-2022^AuthenticationOfHumanCellLines:StandardizationOfShort

landemRepeat（STR）Profiling）进行检验。

7.1.4表型分析

按照《中华人民共和国药典》三部“通则3429免疫化学法流式细胞术”或胎/丁360-2011《流

式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南》进行检验。

7.2细胞存活率及生长活性

7.2.1细胞数量及存活率

按照GB/T42076《生物技术细胞计数》，采用显微镜计数法进行检验。

7.2.2细胞倍增时间

按照GB/T42076《生物技术细胞计数》，采用自动显微技术（细胞荧光分析仪）进行检验。

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7.2.3细胞周期

按照《中华人民共和国药典》三部“通则3429免疫化学法流式细胞术”进行检验。

7.2.4细胞生长曲线

按照《中华人民共和国药典》三部“通则3429免疫化学法流式细胞术”进行检验。

7.3安全性

7.3.1无菌（细菌、真菌）

按照《中华人民共和国药典》三部“通则1101无菌检查法”进行检验。

7.3.2支原体

按照《中华人民共和国药典》三部“通则3301支原体检查法”进行检验。

7.3.3细菌内毒素

按照《中华人民共和国药典》三部“通则1143细菌内毒素检查法”进行检验。

7.3.4细胞内、外源病毒因子

按照《中华人民共和国药皿》三部“生物制品生产检定用动物细胞基质制名及质量控制细胞内、

外源病毒因子检查”进行检验。

7.3.5成瘤性

按照《中华人民共和国药典》三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制“成瘤性检

查”进行检验。

7.4残留物

7.4.1抗生素残留量

按照《中华人民共和国药典》三部“通则3408抗生素残留量检查法”进行检验。

7.4.2牛血清蛋白残留量

按照《中华人民共和国药典》三部“通则3411牛血清白蛋白残留量测定法”进行检验。

7.4.3细胞因子残留量

按照《中华人民共和国药典》三部“通则3429免疫化学法酶联免疫吸附法”进行检验。

7.5生物学效力

按照《中华人民共和国药典》三部“通则3429免疫化学法流式细胞术”检验CIK细胞肿瘤杀伤

能力。

8检验规则

8.1检验程序选择

检验实验室应据规定选择与预期用途相关且经过验证或确认的检验程序。首选的检验程序应至少符

合国家标准、卫生行业标准或中国药典规定的程序。

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8.2检测过程

8.2.1实验室应识别、设计、变更并确认对细胞检测过程及质量有影响的标准作业程序。这些关健要

素应包括：

a）规定测试过程中细胞特性可接受的结果标准；

b）对适宜的过程参数和细胞特性加以监控：

c）使用所需的统计技术来建立、控制和验证过程要求和细胞特性。

8.2.2应完整记录操作过程关键步骤（样本标识、检测方法、数据、使用设备等）的所有细节，包括

但小限于下列内容：

a）细胞编号：

b）细胞名称及属性：

c）关键步骤的操作日期和时间；

（1）操作步骤检验或负责人的姓名；

0）过程中关键物料的名称、制造商、生产批号和有效期；

f）使用试剂的数量：

g）使用设备的标识；

h）最终处置的文件：

i）实验室程序所规定的最终审核。

8.3检测过程改进

实验室应建立、实施、保持纠正和预防措施计划的程序，以解决导致偏差和不符合的根本原因；管

理层应审查所采取的纠正或预防措施的相关信息，为消除实际或潜在不符合的原因而采取的任何纠正或

预防措施应与问题的严重程度和遇到的风险成正比。

8.4检验结果质■保证

8.4.1实验室应在规定条件下遂行检验以保证检验质量并实施适当的检验前和检验后过程。

8.4.2实验室应保证检测结果的真实、准确性及有效性。

8.5检验后过程

8.5.1结果复核

8.5.1.1实验室应建立对结果审核的程序，细胞检测报告应由2名以上相关检验人员核对，经授权签

字人审核后方可签发。

S.5.1.2应有防止数据传输错误的程序文件和记录，并核查实验室信息管理系统内的最终检验报告结

果与原始输入数据是否一致；应定期核查数据在处理及存储过程中定否出现错误，当计算机系统出现变

更时，如LIMS软件升级或者更换数据中心服务器等情况时，应再核查。

8.5.2检测样本保存与处置

实验室应制定样本的保存与处置程序，且应与机构的知情同意程序和适用的法律法规要求相符。

&5.3结果报告

8.5,3.1实验室应建立报告的发布程序，规定报告的格式和介质（即电子或纸质）及其从实验室发出

的方式，并保证结果的准确。

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8.5.3.2检验项目的结果报告应符合相关规范及标准要求，结果报告应有检验者、审核者和授权签字

者的姓名签字及签发日期；检验者由专•业、学历、经验及培训满足相关要求的检验人员负责实验检测：

审核者由指定人员（专业、学历、经验及培训满足相关要求）负责对报告的内容和格式进行审核，授权

签字者负责对报告最后的审核及批准后方可签发。

8.5.3.3报告应包括解释检验结果所必需的信息。

9信息与数据管理

9.1应根据实际情况和现行质量体系建立适当的检测数据管理制度；检验记录的编制、填写、更改、

识别、收集、索引、存档、维护和清理等应当制定并严格遵守相应的程序规范按照适当程序规范进行，

所有工作应实时记录，对电子存储的记录也应采取有效保管措施，避免原始信息和数据的遗失或未经授

权的修改：所有检测数据的原始记录须做到准确、清晰并有电了•备份，电了•备份保存至少30年。

9.2应制定合理的计算和数据转换及处理规定，并有效实施：当利用计算机或自动设备对检测或校准

数据进行采集、处理、记录、报告、存储、检索时，应建立严格执行数据保护的程序；该程序应涵盖数

据输入或采集、数据存储、数据转移和数据处理的完整性及保密性。

10废弃物处理

10.1应建立完善的废弃物管理台账，严格执行管理规范并详细记录每批次废弃物的入库情况，

10.2检验过程中产生的废弃物应被定期转运并储存在指定的废弃物储存间内。

10.3所有产生的废弃物入库都应被记录，以便统计。

10.4废弃物应由专人负责，且必须在上岗前接受废充物处理培训。

10.5盛装废弃物的容耀必须粘贴符合要求的标签，容器及储存条件应符合国家相关标准和规范。

10.6废弃物贮存设施应按要求规定设置醒目的咨示标志。

10.7废弃物的转运和处置应由具有相应资质的机构进行，确保合法、妥善的处理，禁止自行处置。

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附录A

（资料性）

CIK细胞信息表及检测申请单

送检信息表及检测中请单详表A.1。

表A.1CIK细胞送检信息表

送检方信息机构名称_____________部门______送检人_________我系方式____________

取样信息日期与时间_年_月_日_____时一分地点/环境_________取样方式___________

口细胞形态

□短串联重熨序列STR

口染色体核型分析

口细胞表型分析（DCD3DCD8DCD16DCD56□其他______________）

口存活率及生长活性（口细胞数量口细胞存活率口细胞周期□细胞倍增时间口细胞生

长曲线）

项目名称

与口细菌口真菌口支原体口细菌内毒素

检测内容口成痛性

□残留物（口抗三素□牛血清蛋白口细胞因子）

口细胞内、外源病毒因子

口人源病毒因子（DHBV□HCVDHIV1/2DEBVDHCMVDHTLVI/IIDHPV

□HHV6/7口梅毒螺旋体□其他____________________）

口生物学效力

包装状态口完整口其他_________运输方式__________容器__________温度_______

运输信息启运日期与时间_年—月—日—时—分启发地点_______

外观口完整口其他________温度—r明显的污臾迹象口是口否

检查容器的完整性口是□否标识完整性□是□否

接

样本类型与数量ID号_______数量________体积_________备注_____________

收

信附件口伦理批件________份口知情同意书________份

接收入接收日期_________接收入____________

息

申请人申请H期_________申请人____________

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附录B

（资料性）

CIK细胞关键检测项目及检测方法

CIK细胞关键检测项目及检测方法详见表B.1。

表B.1CIK细胞关键检测项目及检测方法

检测项目方法学

细胞形态参见《中华人民共和国药典》三部生物制品生产检定用动物细胞

基质制备及质后控制细胞鉴别试验

参见《中华人民共和国药典》三部生物制品生产检定用动物细胞

染色体核型分析

基质制备及质量控制染色体检杳及判定标准

细胞鉴别

参见ANSI/ATCCASN-D002-2022《AuthenticationOfHumanCell

短串联重复序列STRLines:StandardizationOfShortTandemRepeat(SIR)

Profiling)

表型分析参见《中华人民共和不药典》三部免3429疫化学法流式纤胞术

细胞数量及存活率参见GB/T42076-2022《生物技术细胞计数》显微统计数法

细胞倍增时间参见GB/T42076-2022《生物技术细胞计数》采用自动显微技术

存活率及生长活性

细胞周期参见《中华人民共和国药典》三部3429免疫化学法流式纤胞术

细胞生长曲线参见《中华人民共和国药典》三部3429免疫化学法流式纽胞术

无菌（细菌、真菌）参见《中华人民共和国药典》三部1101无菌检杳法

支原体参见《中华人民共和国药典》三部3301支原体检查法

细菌内毒素参见《中华人民共和国药典》三部1143细菌内毒素检查法

安全性参见《中华人民共和国药典》三部生物制品生产检定用动物细胞

细胞内、外源病毒因子

基质制备及质量控制细胞内、外源病毒因子检查

参见《中华人民共和困药典》三部生物制品生产检定用动物细胞

成相性

基质制备及质量控制成瘤性检查

抗生.素残留量参见《中华人民共和国药典》三部3108抗生素残留量检查法

参见《中华人民共和国药典》三部3411牛血清白蛋白残留量测

残留物牛血清蛋白残留跑

定法

抗生素残留量参见《中华人民共和国药典》三部3249能联免疫吸附法

牛.物学效力肿瘤细胞杀伤能力参见《中华人民共和国药典》三部3429免疫化学法流式到胞术

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附录C

(资料性)

CIK细胞表型分析(流式细胞术)

C.1仪器设备

C.1.1流式细胞仪。

C.1.2离心机。

C.2试剂

C.2.1PBS溶液。

C.2.22%胎牛血清溶液(2%FBS)0

C.2.3抗体。

C.2.4按照相应要求配制流式检测所需的液体：洗涤液、抗体和稀释液。

C.3样品保存

洗涤液和染色后的样品于2-8C保存。相关抗体按说明书保存。

C4检测步骤

C.4.1样品准备和抗体孵育

收集单细胞，300g离心10min。弃上清，加入适量稀释后的抗体进行孵育(按照抗体说明书进

行稀释使用)。

C.4.2流式细胞术分析

用洗涤液重悬细胞，然后通过100州］滤网转移到流式管中，按流式细胞仪应用手册上机检测。

C.4.3圈门设定原则

首先根据前向角散射光信号(FSC)和侧向角散射光信号(SSC)设门圈出目标细胞分群1,排除死细

胞和其他杂细胞，然后根据同型对照组荧光强度，在分群1的基础上标记出阳性细胞群2,排除没有

被荧光抗体标记的阴性细胞。抗体同型对照作为阴性对照。

C.5结果分析

得到的检测结果用软件综合分析，具体参考其软件使用说明。

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P/CIOA-196-2024

附录D

(资料性)

CIK细胞倍增时间检测(自动显微技术)

L1仪器设备

C.1.1细胞荧光分析仪。

C.1.2离心机.

D.2试剂

D.2.1PBS溶液。

D.2.25%胎牛血清溶液(5%FBS)。

I).2.3染色剂。

D.3样品保存

洗涤液和染色后的样品于2-8C保存。

D.4检测步骤

D.4.1样品准备和细胞培养

收集单细胞，300g离心10n:ino弃上清，加入适量5%FBS溶液重悬细胞，将CIK细胞以5000个/

孔(6孔板)的花度接种培养6天。

D.4.2自动显微技术

取适量细胞加入细胞染色剂，孵育完成后用细胞荧光分析仪检测细胞数量。

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