鱼类病毒性疫病核酸检测非致死采样技术规范-地方标准格式审查稿

ICS65.150CCSB5037Technicalspecificationfornon-lethalsamplingofnucleicaciddetectionoffishviralDB37/TXXXX—2026I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由山东省农业农村厅提出并组织实施。本文件由山东省农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：山东省淡水渔业研究院、山东省渔业发展和资源养护总站、济宁市渔业发展和资源养护中心。本文件主要起草人：陈秀丽、倪乐海、徐涛、秦玉广、臧金梁、胡斌、闫家仁、董俊、赵厚钧、吴广州、杨凤香。DB37/TXXXX—20261鱼类病毒性疫病核酸检测非致死采样技术规范本文件规定了海、淡水鱼类病毒性疫病核酸检测非致死采样的基本要求、采样准备、现场采样、样品封存与运输、样品登记与保存的要求，描述了记录等证实方法。本文件适用于具有保活需求的鱼类病毒性疫病的采样。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4基本要求4.1优先选择已发病、具有典型表观症状的鱼类，并及时取样。4.2采样过程宜避免对诊断和病原分析结果有影响的因素发生。4.3采样工具应满足病料采集要求，做到无菌、无毒、洁净、干燥、无污染。4.4采样机构应为水生动物疫病检测单位。4.5采样人员应不少于2人，并经过专门培训，熟知采样程序和方法。5采样准备5.1方案制定应包括采样目的、时间、地点、对象范围、方法类别、采样数量、诊断与检测项目、样品处理、保存与运输等。5.2工具准备确定采样人员，准备采样器具及辅助设施，制备采样记录表格。5.2.1采样器具一次性无菌注射器、采血管或灭菌EP管。5.2.2辅助设施DB37/TXXXX—20262搪瓷托盘、镊子、酒精棉球、深色绒布及水桶（盆）、生理盐水等。5.3方案实施采样人员到达采样点后，向被采样单位亮明身份和来意，严格按照采样方案进行现场样品采集，样品采集后应及时赋予唯一性编号。采样数量应符合SC/T7103的要求。6现场采样6.1麻醉取6cm以上的海、淡水鱼苗或成鱼，用50mg/L～150mg/L的MS222（间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐）浸浴5min～15min进行麻醉。6.2采血6.2.1用无菌注射器沿鱼体中线、臀鳍基部后面的鳞下刺入，推进至血管棘之间，刺破血管弧的动脉或静脉采血，取血后用酒精棉球按压采血部位1min～2min，将鱼放回水中。拔掉针头，将刚抽取的新鲜血液缓慢注入普通采血管或经灭菌生理盐水浸润的灭菌EP管中。6.2.2体长6cm～10cm鱼种，采血0.5mL；体长10cm～15cm鱼种，采血1mL～1.5mL；15cm以上大规格鱼种或成鱼，采血2mL。6.3粘贴标签每个样品管贴标签并写明样品编号、采集地点、鱼类种类、采样人员、采样日期等。样品管较小，无法写具详细信息时可粘贴唯一性简易防水标识。6.4采样记录样品采集时，采样人员应认真填写采样记录，记录内容详见附录A《现场采样记录表》，并由采样人、被采样单位负责人（或业务负责人或其委托人）共同签字确认。采样记录表一式三份，分别留存被采样单位、承检单位和任务下达部门。7样品封存与运输7.1样品封存采样人与被采样单位负责人共同确认样品真实性、代表性和有效性，并在封样包装上签字。封样包装材料和器具应完整、结实、洁净、干燥，且具有抗压抗震防渗漏性能。7.2样品运输将采血后的采血管或灭菌EP管低温静置10min～20min后放入冰盒中，添加柔性填充材料，专人运输，途中避免剧烈震荡，严禁倾覆颠倒。8样品登记与保存8.1样品登记处理DB37/TXXXX—202638.1.1样品核验收录实验室应具备完善的管理体系，对样品规范建档。接到样品后，应立即对现场采样记录表的内容信息和样品状态进行核对，确认后登记，加贴（或标注）唯一性受理编号。必要时，样品及标签可拍照进行电子资料留存。8.1.2血清制备将装有新鲜血液的采血管或EP管置4℃冰箱中过夜，以3500rpm速度离心10min。分离后小心吸取上层血清，转入新的灭菌EP管中，制备成独立样本或混合样本。8.1.3样品收储流转血清样本重新登记完成后，及时进入实验室流转和分样检疫。8.2样品保存样品经分样后，除一部分进入检疫检验流程外，其余部分于－80℃留样冻存。检测报告签发后，血清样品应存储6个月方可作无害化处理。DB37/TXXXX—20264（资料性）现场采样记录表现场采样记录表见表A.1。表A.1现场采样记录表样品信息样品名称样品编号样品数量样品规格样品状态□无病症；□有病症；□濒死病症：采样时环境条件水温℃pH被采样单位单位名称通讯地址