《地理标志产品 施秉太子参 组织培养与无毒种苗繁育技术规程》编制说明

（征求意见稿）太子参，为石竹科植物孩儿参Pseudostellariaheterophylla

(Miq.)PaxexPaxetHoffm.的干燥块根。施秉县是贵州太子参主产区，常年种植面积5万余亩，产量居全国第一位，占全国总产量的三分之一强，对全国太子参价格具有标杆性影响。太子参正在成为施秉县农民增收致富的重要途径。目前，施秉太子参缺乏脱毒种苗供应，制约了太子参产业的发展。为此，制定《地理标志产品施秉太子参组织培养与脱毒种苗繁育技术规程》，规范施秉太子参脱毒种苗繁育技术，确保种子质量体系，发挥特色优势，促进太子参产业健康稳定发展具有重要的作用。一、工作简况（一）任务来源本标准由施秉县牛大场镇中药材协会提出，根据《国家标准化管理委员会民政部关于印发〈团体标准管理规定〉的通知》（国标委联[2019]1号）的规定，按照《施秉县牛大场镇中药材协会标准管理办法（试行）》的相关要求，2021年5月8日，施秉县牛大场镇中药材协会对《地理标志产品施秉太子参组织培养与脱毒种苗繁育技术规程》团体标准进行了立项审查，经技术专家认真研究与审核，于2021年5月10日在全国团体标准信息平台管理系统发布立项公告，项目由黔东南州农业科学院、施秉县农业农村局负责编写。（二）协作单位贵州三泓药业股份有限公司（三）主要工作过程和内容2013年，黔东南州农业科学院开展了“施秉太子参组织培养与脱毒种苗繁育技术规程”调查研究工作，拟定并发布了贵州省地方标准-施秉太子参组织培养与脱毒种苗繁育技术规程（标准编号DB52/T847.3-2013）,因不符合国家法律法规要求，2019年贵州省市场监督管理局（黔市监公告〔2019〕142号）废止。其数据为本标准的编制提供了数据基础。2021年2月，为促进施秉太子参产业健康稳定发展，施秉县牛大场镇中药材协会、施秉县农业农村局提出编制“地理标志产品施秉太子参系列标准”，随即与主要编制单位黔东南州农业科学院等单位启动‘地理标志产品施秉太子参系列标准’编制工作，负责团体标准“地理标志产品施秉太子参系列标准”的编制和申报立项。并深入施秉太子参产地和企业调研，听取群众和企业的意见和建议，拟定并确定太子参种子种根质量外观及其技术指标，编制完成了“地理标志产品施秉太子参组织培养与脱毒种苗繁育技术规程”，是“地理标志产品施秉太子参系列标准”之一。2021年3月，启动标准立项工作。2021年4月10日，在全国团体标准信息平台管理系统启动团体注册。2021年5月10日，在全国团体标准信息平台管理系统发布立项公告。2021年5月26日，网上征求意见，同时深入大专院校、科研院所、农业主管部门、生产企业线下征求意见，收到反馈信息条，无异议条，提出修改意见的条，针对反馈意见作出了相应的处理，见贵州省地方标准征求意见汇总处理表。2021年月日，由施秉县牛大场镇中药材协会、施秉县农业农村局、施秉县市场监督管理局组织专家，对《地理标志产品施秉太子参组织培养与脱毒种苗繁育技术规程》标准进行评审，通过了专家评审。起草小组按照专家意见进行了编制说明和标准文本的修改，报施秉县牛大场镇中药材协会批准，在全国团体标准信息平台管理系统发布标准发布公告。（四）主要起草人及其所做的工作《地理标志产品施秉太子参组织培养与脱毒种苗繁育技术规程》主要起草人及其工作内容一览表姓名单位职务职称主要工作内容陈建祥黔东南州农业科学院正高级农艺师项目负责，制定工作计划，产区调研，编制标准文本及编制说明余春香黔东南民族职业技术学院副教授负责太子参组织培养与脱毒种苗繁育技术规程数据测试***韦顺能黔东南州农业科学院助理农艺师负责脱毒种苗田间驯化数据的收集李穗渝黔东南州市场监督管理局标化科科长负责标准化编制工作指导二、标准编制原则和主要内容编制的原则与依据（一）编制的原则1、确保太子参种根质量安全；2、借鉴国内相关行业先进和成熟的经验；3、结合施秉太子参组织培养与脱毒种根生产实际；4、标准具有科学性、先进性、可操作性；5、与相关标准法规协调一致；6、促进施秉太子参产业健康发展。（二）编制的依据与内容1术语和定义下列术语和定义适用于本标准。1.1脱毒组培苗运用优良太子参植株茎尖、茎段作为外植体，采用植物组织培养技术，培养再生出来的脱毒试管苗。1.2初代培养将外植体进行的第一次培养。1.3继代增殖培养将外植体转接到新鲜培养基中继续培养，使其增殖、生长、分化，形成完整植株的过程。1.4原原种指育种专家育成的遗传性状稳定的品种或亲本的最初一批种子，其纯度为100%。1.5原种原种是指用原原种繁殖的1代～3代或按原种生产技术规程生产的达到原种质量标准的种子，其纯度在99.9%以上。2组织培养2.1实验室要求实验室要求符合GB19489和GB/T22278规定。2.2培养基的选择以MS为基础培养基，所用药品符合GB437、GB/T628、GB/T647、GB/T659、GB/T664、GB/T666、GB/T671、GB/T1272、GB/T1274、GB/T1401、GB/T15899的规定。2.3培养基制备2.3.1母液配制和保存将培养基配方扩大若干倍，一般为10倍~100倍的浓缩液体。药品配制严格按照GB/T603规定方法配制，用水应符合GB/T6682规定要求。称取药品的药匙必须专药专用。将配制好的母液分别贴上标签，注明母液名称、配制倍数和日期，贮存在2℃~4℃的冰箱中，贮藏时间控制在90d内。储藏期间，如有霉菌和沉淀产生，需重新配置。2.3.2植物生长调节剂母液配制和保存将各种植物生长调节剂单独配成浓度为50mg/100mL~100mg/100mL。多数植物生长调节剂难溶于水，其溶解方法：NAA、IBA、IAA等常用少量95%的乙醇溶解，然后加热溶解，再加蒸馏水定容。6-BA、KT等先用少量1mol/L盐酸溶解，再加蒸馏水定容。所用水要符合GB/T6682的要求。配制好植物生长调节剂分别贴上标签，标签写上名称、配制浓度和日期，贮存在2℃~4℃的冰箱中，贮藏时间控制在90d内。储藏期间，如有霉菌和沉淀产生，需重新配置。2.3.3培养基配制培养基由MS基础培养基、蔗糖、琼脂、水组成，蔗糖和水分别符合GB317和GB5749规定。所需蔗糖浓度3g/L，琼脂粉浓度4g/L。培养基配制流程，见图1。2.3.4pH值调节太子参培养基最佳pH值控制在5.6~5.8，一般用pH计或pH试纸测试，常用（1mol/L）NaOH或HCl进行调整。2.3.5培养基分装和灭菌将配制好的培养基趁热分装，分装量以占培养容器的1/4～1/3为宜。操作时，尽量避免将培养基粘到容器口和容器壁上，否则容易引起污染。将已分装好培养基封口并注明配制日期和培养基种类后即进行灭菌，灭菌锅内压力为0.105MPa、温度达121℃状态下保持15min～20min进行灭菌。2.4环境灭菌对环境进行定期灭菌。方法是用75%乙醇或0.1%新吉尔灭进行喷洒。对无菌操作室（接种室）、培养室和准备室采用紫外灯灭菌方法。接种所用的超净工作台在空气过滤灭菌的基础上再配合使用紫外灯照射灭菌20min~30min，再用75%乙醇对超净工作台表面进行擦拭。2.5接种工具灭菌接种用的工具、无菌水等必须在灭菌锅内压力为0.105MPa、温度达121℃状态下保持15~20min进行灭菌。2.6外植体选择与处理2.6.1选择生长健壮、无病虫害的优良太子参植株为外植体材料。2.6.2将太子参的茎尖、茎段用5%~10%洗衣粉漂洗2min~3min，洗去茎尖、茎段上的蜡质层及泥土、粉尘，用自来水冲洗30min后拿到接种室，用75%酒精表面消毒20s，无菌水冲洗2次；再用0.1%Hg消毒3min~8min，无菌水冲洗8次~10次，以除去残留消毒液。2.7外植体诱导培养将处理好的太子参外植体，在无菌条件下，用解剖刀和解剖针在显微镜下剥离0.5mm~1mm的茎尖，切取茎段（每段留一个节），分别接种于诱导培养基。茎尖、茎段应插入培养基，芽不能陷入培养基中。接种后做好标记。经7d~10d培养，芽开始萌动生长，30d后芽长到1cm~2cm，同时有少量丛芽分化。2.8继代增殖培养将诱导出的不定芽转接于继代增殖培养基中，经30d培养，形成丛生芽，并有少量根系分化。2.9脱毒检验获得的丛生芽须经有资质的检验单位检测，确认无毒后，进入壮苗及生根培养。2.10壮苗及生根培养将丛生芽转接到壮苗及生根培养基中，经30d左右，形成完整的试管苗，并有根系的分化。2.11培养条件培养温度为25±2℃，光照时间12h/d，光照强度2000LX~3000LX。太子参组织培养技术流程见图2。3驯化3.1大棚与基质消毒移栽前，用0.02%~0.04%高锰酸钾和0.1%~0.5%甲醛对大棚进行熏蒸消毒。用0.04%高锰酸钾溶液对基质消毒灭菌。3.2炼苗试管苗移栽前，将生长健壮、根5条~6条，长0.cm5~1.0cm，带3叶~4叶的试管苗连同培养瓶放置移栽大棚2d~3d，然后打开瓶口再放置2d~3d，使试管苗逐渐适应外界环境。3.3脱毒苗移栽将驯化后的脱毒苗用镊子小心取出，洗去根部培养基，用500倍多菌灵或甲基拖布津浸泡30min，用自来水冲洗干净后，定植于已灭菌的基质（珍珠岩:腐殖土=1:2）中。移栽后用遮阳率75%的遮阳网搭小拱棚遮阳，待苗生长5d~7d后拆除。3.4脱毒苗管理及种参收获3.4.1脱毒苗移栽后要注意保湿，基质内含水量保持在5%0~60%。移栽一周后，每周喷施1/2MS营养液1次~2次，定期用500倍多菌灵或甲基拖布津喷洒杀菌剂，预防病虫害发生，在整个生长期要及时除草。3.4.2脱毒苗生长180d~210d后，即可收获太子参原原种。3.5脱毒检验获得的原原种须经有资质的检验单位，按照《植物病毒检测方法》检测，确认无毒后，进入加代扩繁。4优质种苗快速繁育技术检验无毒的原原种按照DB52/XXxx《地理标志产品施秉太子参种植技术规程》加代扩繁，经过2代~3代繁殖成为原种，原种经加代繁殖即成为生产用脱毒良种。三、主要试验（或验证）的分析、综述根据施秉太子参的品种生物学特征特性，黔东南州农业科学院与黔东南民族职业技术学院联合开展了施秉太子参组织培养与脱毒种根繁育技术试验研究工作，为本标准的编制提供了数据基础，主要研究内容及结果如下:1、太子参培养基的配制流程（图1）水分母液生长调节剂蔗糖琼脂→混合→加热溶解→定容→调节pH分↓装培养容器→洗涤→干燥→播种←凝固←冷却←高压灭菌←封口图1太子参培养基的配制流程图2、太子参组织培养技术流程（图2）优良单株↓块根芽头或种子↓微茎尖↓→未脱毒苗淘汰病毒检测↓脱毒苗↓增殖培养→生根培养→炼苗栽培↓商品种←2-3代繁殖←原原种图2太子参组织培养技术流程3、通过试验结果，制订定“施秉太子参组织培养与无毒种苗繁育技术规程”。四、标准水平分析目前，贵州省废止了《施秉太子参组织培养与无毒种苗繁育技术规程》地方标准，国家、其他省区尚无“太子参组织培养与脱毒种苗繁育技术规程”标准，本标准水平为国内领先水平。五、与有关的现行法律、法规和强制性国家标准的关系本标准符合相关现行法律、法规和强制性国家标准的要求。本标准主要引用以下国家标准、行业标准和规范性文件：GB317白砂糖的标准。GB437化学试剂硫酸铜的标准。GB3095环境空气质量标准GB4285农药安全使用标准GB5084农田灌溉水质标准。GB5749生活饮用水卫生标准。GB9137保护农作物的大气污染物最高允许浓度GB15618土壤环境质量标准GB19489实验室生物安全通用要求。GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备。GB/T628化学试剂硼酸的标准。GB/T647化学试剂中硝酸钾的标准。GB/T659化学试剂中硝酸铵的标准。GB/T664化学试剂七水合硫酸亚铁（硫酸亚铁）标准。GB/T666化学试剂七水合硫酸锌（硫酸锌）的标准。GB/T671化学试剂硫酸镁的技术标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。GB/T1272化学试剂碘化钾的标准。GB/T1274化学试剂中磷酸二氢钾的标准。GB/T1401化学试剂乙二胺四乙酸二钠的标准。GB/T15899化学试剂水合硫酸锰的标准。GB/T22278良好实验室规范原则。六、重大分歧意见的处理经过和依据在该标准的审议过程中，对送审稿提出的意见，经各相关方认真讨论，达成了一致意见，无重大分歧意见。七、标准作为强制性或推