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细胞工程--C4.细胞的冻存、复苏和运输细胞培养4.1培养细胞的生物学特征4.2细胞培养液4.3细胞的基本培养技术4.4细胞系和细胞株的建立4.5细胞的冻存、复苏和运输2细胞冻存和复苏细胞低温冷冻贮存是细胞室的常规工作。细胞冻存与细胞传代保存相比可以减少入力、经费，减少污染，减少细胞生物学特性变化。3

冻存和复苏的原则：慢冻快融当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反．结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。4慢冻程序标准程序：当温度在-25℃以上时，1～2℃/min当温度达-25℃以下时，5～10℃/min当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中细胞冻存器简易程序：将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1～2℃的速度，在40分钟内降至液氮表面，停30分钟后，直接投人液氮中。5低温保护剂的应用在细胞冻存时加入温保护剂，能大大提高冻存效果。常用的低温保护剂是DMSO，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤。6细胞冻存方法预先配制冻存液：含20%血清培养基10%DMSO取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入适量冻存液,用吸管吹打制成细胞悬液（1×106～5×106细胞/ml)加入1ml细胞于冻存管中，密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。DMSO液用培养液配好，避免因临时配制产热而伤害细胞。对人造血干细胞的研究证7细胞复苏方法从液氮中取出冷冻管，迅速投入37～38℃水浴中，使其融化（1分钟左右）。5分钟内用培养液稀释至原体积的10倍以上。低速离心10分钟。去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。8大家应该也有点累了，稍作休息大家有疑问的，可以询问和交流9细胞运送当前培养细胞既可在国内相互寄赠，也可进行国际间的交流，为此要有运输细胞的方法。装运方法有两种:一是用液氮或干冰保存，效果较好，但需用

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