临床基因扩增检验技师考试试卷及答案

临床基因扩增检验技师考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.PCR反应的基本步骤包括变性、______、延伸。2.TaqDNA聚合酶的最适延伸温度是______℃。3.荧光定量PCR中，常用的探针类型有TaqMan探针、______探针等。4.核酸提取过程中，酚氯仿的主要作用是______。5.为避免扩增产物污染，常用的方法有______（举1例）。6.RT-PCR的模板是______。7.引物设计时，引物与模板之间应避免形成______结构。8.电泳检测PCR产物时，常用的指示剂是______。9.阴性质控品用于监测临床基因扩增检验中的______。10.普通PCR产物的检测方法主要有______电泳和核酸杂交。填空题答案1.退火（复性）2.723.分子信标4.变性蛋白、分离核酸5.紫外线照射6.RNA7.二聚体（发夹）8.溴化乙锭（EB）9.污染10.琼脂糖二、单项选择题（每题2分，共20分）1.PCR体系中Mg²⁺的主要作用是（）A.稳定引物B.激活Taq酶C.促进变性D.防止非特异扩增答案：B2.荧光定量PCR的Ct值是指（）A.平台期循环数B.阈值循环数C.完全扩增循环数D.产物最大循环数答案：B3.临床扩增检验最常见的污染类型是（）A.试剂污染B.产物气溶胶污染C.环境DNA污染D.模板污染答案：B4.核酸提取中蛋白酶K的作用是（）A.降解RNAB.降解DNAC.降解蛋白D.沉淀核酸答案：C5.引物设计的常用长度是（）A.5-10bpB.15-30bpC.30-50bpD.50-100bp答案：B6.Taq酶的缺陷是（）A.无聚合活性B.无3’→5’外切酶活性C.不耐高温D.不能延伸引物答案：B7.内参基因选择的核心依据是（）A.表达量恒定B.与目的基因序列相同C.扩增效率高D.片段短答案：A8.分离1000bpDNA的琼脂糖浓度是（）A.0.5%B.1.0%C.2.0%D.3.0%答案：B9.实时荧光定量PCR不包括（）A.绝对定量B.相对定量C.半定量D.定性定量答案：D10.质量控制指标不包括（）A.扩增效率B.Ct值C.产物长度D.引物浓度答案：D三、多项选择题（每题2分，共20分）1.PCR体系的主要成分包括（）A.模板B.引物C.Taq酶D.dNTPE.Mg²⁺答案：ABCDE2.荧光定量PCR的探针类型有（）A.TaqMan探针B.分子信标C.SYBRGreenD.Scorpion探针E.EvaGreen答案：ABD3.核酸提取常用方法有（）A.酚氯仿法B.磁珠法C.硅胶膜吸附法D.煮沸法E.蛋白酶K法答案：ABCD4.PCR污染来源包括（）A.产物气溶胶B.试剂交叉污染C.环境DNAD.模板污染E.引物污染答案：ABCDE5.引物设计要求包括（）A.特异性强B.避免自身互补C.引物间无互补D.扩增效率一致E.3’端G/C结尾答案：ABCE6.质量控制类型包括（）A.室内质控B.室间质评C.阴性质控D.阳性质控E.空白对照答案：ABCDE7.扩增失败的常见原因（）A.模板降解B.引物不当C.Mg²⁺浓度不适D.Taq酶失活E.循环参数错误答案：ABCDE8.RT-PCR注意事项（）A.避免RNA降解B.去除DNA污染C.选择逆转录酶D.引物匹配E.控制温度答案：ABCDE9.电泳检测影响因素（）A.琼脂糖浓度B.电泳电压C.电泳时间D.指示剂浓度E.缓冲液pH答案：ABCDE10.临床扩增适用范围（）A.病原体检测B.肿瘤基因检测C.遗传病诊断D.亲子鉴定E.药物代谢基因检测答案：ABCDE四、判断题（每题2分，共20分）1.Taq酶具有3’→5’外切酶活性（）答案：×2.内参基因需与目的基因扩增效率一致（）答案：√3.酚氯仿提取时水相在上层（）答案：√4.Ct值与模板浓度正相关（）答案：×5.产物气溶胶是最常见污染（）答案：√6.引物越长特异性越高（）答案：×7.RT-PCR无需DNase处理（）答案：×8.电泳条带越亮浓度越高（）答案：√9.阴性质控监测污染（）答案：√10.Taq酶最适变性温度94℃（）答案：√五、简答题（每题5分，共20分）1.简述PCR基本原理PCR利用DNA高温变性解链、低温引物退火结合、中温Taq酶延伸子链的特性，通过20-30次循环实现目的片段指数扩增。每次循环后目的片段翻倍，核心依赖耐高温Taq酶完成子链合成。2.简述污染防控主要措施①分区操作（试剂、样本、扩增、检测区分离）；②试剂无核酸酶处理，分装减少开盖；③产物灭活（UNG酶、紫外线）；④操作规范（滤芯吸头、手套口罩）；⑤质控监测（阴性质控、空白对照）。3.简述Ct值定义及意义Ct值是荧光信号达阈值时的循环数。意义：①与模板浓度负相关（浓度越高Ct越小）；②定量依据（标准曲线算绝对量，内参比相对量）；③质量判断（Ct＞35提示模板低或扩增失败）。4.简述核酸提取基本步骤①样本裂解（破坏细胞，释放核酸）；②酚氯仿去杂质（变性蛋白，分离水相）；③乙醇沉淀核酸；④70%乙醇洗涤；⑤无核酸酶水溶解核酸。六、讨论题（每题5分，共10分）1.讨论内参基因选择原则及注意事项原则：①表达量恒定（不同样本无差异）；②无突变多态性；③扩增效率匹配（差异＜5%）；④片段长度相近。注意：①预实验验证稳定性；②避免与目的基因同源；③联合多个内参减少误差。2.讨论实时荧光定量PCR与普通PCR的区别及临床价值区别：①检测方式（