自身免疫性溶血性贫血实验室检查的临床应用

实验室检查在自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的诊断及分型中具自身免疫性溶血性贫血(autoimmune/或补体，致使红细胞破坏加速、寿命缩短的一组溶血性贫血1.2。国外资料显示AIHA的年发病率为(0.8~3.0)/10万3。根据自身抗体与红细胞反应的最适温度可分为温抗体型(warmautoimmunehaemolyticanaemia,cAIHA,占20%~30%)和混合型(约占5%)。体瘤、感染、异基因造血干细胞移植、药物等²,5。(一)特异性指标检查直接抗人球蛋白试验(directantiglobuli溶血的主要实验室检查36。其原理为抗人球蛋白试剂与待测红细胞荐先使用多特异性抗人球蛋白试剂筛查，阳性者再采用单克隆抗体[免疫球蛋白G(immunoglobulinG,IgG)、IgM、IgA、补体C3c间接抗人球蛋白试验(indirectantiglobulintest,IAT)检测血清中的游离抗红细胞膜抗体1,6]。将待测血清与已知抗原性标准化红细胞一起孵育，加入抗人球蛋白观察凝集。当体内自身抗体大量产生，红细胞膜上抗原位点被占用，多余抗体不能被吸附而存在于血冷凝集试验用于检测CAD和CAS患者体内的冷抗体(冷凝集素)。当体表温度较低时，冷凝集素作用于自身红细胞抗原而发生可逆性的在CAD和CAS患者中，冷凝集试验滴度一般高于1:64,DAT呈C3d强阳性而1gG阴性或弱阳性1.12。急性溶血性贫血患儿怀疑PCH时，可通过Donath-Landsteiner试验(D-L试验)确诊或排除13]。PCH患者体内存在一种冷反应性IgG抗体，即D-L抗体。D-L抗体37℃时不能与红细胞结合；当温度降至20℃以下并有补体存在时，此抗体与红细胞结合但不发生溶血；当温度再次上升到37℃时激活补体发生溶血。PCH患者体内不存在冷途径增加检出率(表1)。微柱凝胶法、红细胞表面免疫球蛋白定量分析、流式细胞术等技术的出现显著提高了抗体检测的灵敏度16。生物素标记法免疫球蛋白定量分析可以测出每个红细胞上15~30个红细胞能够检测到约30~40个抗体分子，且能精准分型抗体类型，提高了检测的灵敏度和准确性18]。通过使用4℃低离子强度溶液洗涤实验类别临床应用法溶液洗涤法红维胞结合lgC34I细胞，保留低亲和力lgC;进抗体相互作用子细胞)中(抗体>200分子细胞)子/细胞)子/细胞)中15%-20%-自动化，标准化检测微量IgG或补体间未实现标准化参考实验室可用需特异性抗C3IJ)AT阴性疑诊.抗体定量需求明确补体介导的溶血(三)溶血性贫血的常规检查常规的溶血性贫血检查包括外周血细胞形态、血红蛋白、网织红细胞计数、胆红素(直接和间接胆红素)、结合珠蛋白、乳酸脱氢酶AIHA诊断的首要步骤是仔细分析外周血涂片，这对排除其他诊断(如微血管病或红细胞形态异常贫血如镰刀状细胞)至关重要。在wAIHA中，由于红细胞不完全吞噬，约40%患者外周可见到小球形红诊断时的血红蛋白水平与死亡风险和治疗选择密切相关。网织红细胞计数是反映骨髓造血活性的重要指标，通常在溶血性贫血患者中升高。然而37%的AIHA患者网织红细胞计数异常减低，提示抗体攻击骨髓内未成熟红细胞，致网织红细胞碎裂，常预示急性严重溶血、高输血需求及不良预后[22。结合珠蛋白减少是溶血性贫血最敏感指标之一[23。但需注意其酶(lactatede(四)病因学检查占30%,主要为慢性淋巴细胞白血病，5%~11%)和结缔组织病(主要也可由病毒感染(如人类细小病毒B19、丙型肝炎病毒、乙型肝炎病并进行包括自身免疫性疾病血清学标志物的评估以及相关的病毒血清学检测在内的全面临床实验室检查(表2)。实验室检查特川于显性SLE、ANA强阳性或既往血栓形成史患者)、CII50.C3和C4(怀疑SILE)血清蛋门电泳、免疫固定电泳、外周血B淋巴细骨髓活检：尤胞的免疫表型，CT扫打描(胸部腹部/骨盆)低丙种球蛋自血病!淋巴结和或CT打描不成比例的牌肿大和/或单克隆淋巴细胞增生时lgC、IgefIgM水平T/NK细胞和记忆B细胞的流式细胞亚型检测：疫苗后翻清学(如破伤风类毒浆、肺炎球菌)除血清学检测病毒119)注：AIHA为自身免疫性溶血性贫血、cIDN4为双链IN4.β2G;P抗体为抗β2-糖蛋白I抗体，SLE为系统性红斑狼疮.AA为抗核抗体.AIHA的遗传学研究揭示其疾病发生与抗原识别、免疫细胞成熟淋巴毒素-α的AG构型也被证实可增加患病风及分类(诊断流程图见图1)。如果患者存在贫血和溶血的体征和临胞自身抗体的直接血清学证据³。由于不同类型AIHA的治疗方案差阳性(如输血、药物、高球蛋白血症等干扰)[8。继发性AIHA患者临床上仍怀疑AIHA,可进行灵敏度更高的检测方法，如微柱凝胶法、查。由于DAT阴性AIHA在临床发生率极低(仅为5%~10%),在临床溶血性贫血素、结合珠蛋白、计数、外周血涂特异性单克隆IgM+/-冷凝集试验遗传因素(遗传性球军性血红蛋白尿)理化因素(大面积烧微柱凝胶法、抗体冷测、红细胞表面免疫球蛋白定量分析、流式细胞术、丝裂原刺排除假阳性高丙种球蛋白血症、近期输血、药物治疗后(免疫混合AIHA阴性有基础疾病无系统性自身免疫病、造血及淋巴细胞增生性疾病、实体胞移植、药物骨髓检查倍正常值、间接胆红素>20mg/L、血红蛋白<80g/L及网织红细胞计数<100×10⁹/L等指标，可用于评估溶血活动度与骨髓代偿能力，补体激活指标如C3d沉积水平则与难治性溶血及血栓风险相关。此外，其疾病研究的新型标志物如细胞因子谱、基因谱等，为预后评估提供及疾病进展。当血红蛋白恢复正常，且溶血相关检测呈阴性时，判断患者为完全缓解；血红蛋白增加超过20g/L,或溶血相关检测呈阴性且连续7d未输血时，判断患者为缓解。将接受三线治疗后仍无效的wAIHA患者，包括切脾和/或至少接受1种免疫抑制治疗的患者判断为难治性wAIHA,推荐进行全面的原发或继发疾病筛查，积极治疗并增加溶血及治疗监测频率。制，使用单细胞测序及蛋白组学鉴定AIHA罕见抗体、开发针对红细胞膜补体调控蛋白异常的检测及细胞介导的细胞毒性标志物检测，为疫失调生物标志物，明确特定自身反应性细胞表型改变，监测促炎/补体活化产物(如C3a、C5a、sC5b-9)的动态变化，有助于筛选高的发病机制更为复杂27,临床上通过详尽的病史询问及全面的临床到此要求，因此要求实验室开发更灵敏特异的感染监测指标(如特定病原体PCR),并建立结合临床信息、免疫状态(淋巴细胞亚群、免疫球蛋白水平)和溶血活动度的感染风险分层模型。血栓是溶血性疾未来实验室应该阐明AIHA相关血栓机制(如补体激活、红细胞释放促凝物质、炎症),深入挖掘凝血指标(D-二聚体、FVIll、vWF)、AIHA是一组高度异质性的复杂疾病，实验室检测在AIHA的诊断和分型中扮演着至关重要的角色。目前，基于DAT及其他实验室检测方