基因工程习题样本

资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。基因重组和基因工程一、单项选择题1.限制性核酸内切酶切割DNA后产生A.5′磷酸基和3′羟基基团的末端B.5′磷酸基和3′磷酸基团的末端C.5′羟基和3′羟基基团的末端D.3′磷酸基和5′羟基基团的末端E.以上都不是2.可识别并切割特异DNA序列的酶是A.非限制性核酸外切酶B.限制性核酸内切酶C.限制性核酸外切酶D.非限制性核酸内切酶E.DNA酶3.有关限制性核酸内切酶,以下哪个描述是错误的?A.识别和切割位点一般是4～8个bp长度B.大多数酶的识别序列具有回文结构C.在识别位点切割磷酸二酯键D.只能识别和切割原核生物DNA分子E.只能切割含识别序列的双链DNA分子4.在重组DNA技术中催化形成重组DNA分子的酶是A.解链酶B.DNA聚合酶C.DNA连接酶D.内切酶E.拓扑酶5.对基因工程载体的描述,下列哪个不正确?A.能够转入宿主细胞B.有限制酶的识别位点C.可与目的基因相连D.是环状DNA分子E.有筛选标志6.克隆所依赖的DNA载体的最基本性质是A.卡那霉素抗性B.青霉素抗性C.自我复制能力D.自我表示能力E.自我转录能力7.重组DNA技术中常见的质粒DNA是A.病毒基因组DNA的一部分B.细菌染色体外的独立遗传单位C.细菌染色体DNA的一部分D.真核细胞染色体外的独立遗传单位E.真核细胞染色体DNA的一部分8.下列哪种物质一般不用作基因工程的载体?A.质粒B.噬菌体C.哺乳动物的病毒D.逆转录病毒ＤＮＡE.大肠杆菌基因组9.关于pBR322质粒描述错误的是Ａ．有一些限制酶的酶切位点Ｂ．含有1个ori.Ｃ．含有来自大肠杆菌的lacZ基因片段Ｄ．含个氨卞青霉素抗性基因Ｅ．含四环素抗性基因。10.以ｍＲＮＡ为模板催化ｃＤＮＡ合成需要下列酶A.RNA聚合酶B.DNA聚合酶C.Klenow片段D.逆转录酶E.ＤＮＡ酶11.催化聚合酶链反应需要下列酶A.RNA聚合酶B.DNA聚合酶C.TaqDNA聚合酶D.逆转录酶E.限制性核酸内切酶12.关于ＰＣＲ的描述下列哪项不正确?A.是一种酶促反应B.引物决定了扩增的特异性C.扩增产物量大D.扩增的对象是ＤＮＡ序列E.扩增的对象是RNA序列13.在基因工程中,DNA重组体是指A.不同来源的两段DNA单链的复性B.目的基因与载体的连接物C.不同来源的DNA分子的连接物D.原核DNA与真核DNA的连接物E.两个不同的结构基因形成的连接物14.基因工程操作中转导是指A.把重组质粒导入宿主细胞B.把DNA重组体导入真核细胞C.把DNA重组体导入原核细胞D.把外源DNA导入宿主细胞E.以噬菌体或病毒为载体构建的重组DNA导入宿主细胞15.重组DNA的筛选与鉴定不包括哪一方法A.限制酶酶切图谱鉴定B.PCR扩增鉴定C.显微注射D.蓝白筛选E.抗药筛选二、多项选择题1.在分子克隆中,目的DNA可来自A.原核细胞染色体DNAB.真核细胞染色体DNAC.人工合成的DNAD.聚合酶链反应E.真核细胞mRNA反转录获得的cDNA2.重组DNA技术基本过程包括A.目的基因的获取B.克隆载体的构建C.目的DNA与载体的连接D.将重组体导入受体菌E.重组DNA分子转化受体菌的筛选3.分子克隆又称A.基因克隆B.DNA克隆C.单克隆抗体制备D.构建基因组DNA文库E.基因重组4.参与聚合酶链反应体系的组分有A.DNA引物B.目的DNAC.三磷酸脱氧核苷D.TaqDNA聚合酶E.RNA聚合酶5．从基因组DNA文库或cDNA文库分离、扩增某一感兴趣基因的过程就是A.基因克隆B.分子克隆C.DNA克隆D.构建基因组DNA文库E.重组DNA技术6.可用作克隆基因载体的DNA有A.细菌质粒DNAB.真核细胞基因组DNAC.病毒DNAD.酵母人工染色体E.噬菌体DNA7．将重组DNA分子导入受体细菌的方法有A.接合B.转座C.感染D.转染E.转化8．转染真核细胞的方法有A.磷酸钙共沉淀法B.电穿孔C.DEAE葡聚糖法D.脂质体载体法E.显微注射法9．下述操作可能用于基因工程过程的是Ａ．DNA的制备和酶解Ｂ．不同来源DNA的拼接Ｃ．重组DNA导入受体细胞Ｄ．细菌的生长和繁殖Ｅ．核酸分子杂交10．关于质粒DNA的叙述正确的是A.是基因组DNA的组成部分B.具有独立复制功能C.含有抗生素抗性基因D.含有感兴趣的目的DNAE.具有编码蛋白质的功能三、填空题１、DNA重组技术主要涉及两大核心技术:和。２、一个完整的基因克隆过程应包括:目的基因的获取,_________的选择与改造,_________的连接,重组DNA分子受体细胞,出含感兴趣基因的重组DNA转化细胞。３、限制性核酸内切酶是由________产生的一类识别_____,并在识别位点切割键的核酸内切酶。４、科学家感兴趣的外源基因又称_____,其来源有_____、_____、_____、_____等几种途径。５、常见的目的基因与载体连接的方式有_____、_____、_____、_____。６、根据采用的克隆载体性质不同,将重组DNA分子导入细菌的方法有___、___等。７、基因组文库含有组织或细胞的____信息,cDNA文库含有组织或细胞的____信息。8、载体的本质是,它应具备下列基本条件:、、、和。四、名词解释1.基因工程2.DNA重组3.克隆4.DNA克隆5.目的基因6.基因载体7.质粒8.限制性核酸内切酶9.基因文库10.cDNA文库11.转化12.转导13.转染五、问答题１.载体应具备以下基本条件２.常见的工具酶有哪些?其主要用途是什么?３.重组DNA技术常包括哪些基本步骤:４.常见的目的基因的获取方法有哪些?５.常见的目的基因与载体的连接方法有哪些?５.何谓限制性核酸内切酶?写出大多数限制性核酸内切酶识DNA序列的结构特点。６.解释质粒,为什么质粒可作为基因载体。参考答案1.Ａ2.Ｂ3.Ｄ4.Ｃ5.Ｄ6.Ｃ7.Ｂ8.Ｅ9.Ｃ10.Ｄ11.Ｃ12.Ｅ13.Ｂ14.E15.Ｃ二、多项选择题1.Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ2.Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ3.Ａ、Ｂ、Ｅ4.Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ5.Ａ、Ｂ、Ｃ6.Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ7.Ｃ、Ｄ、Ｅ8.Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ9.Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ10.Ｂ、Ｃ三、填空题１．DNA重组、克隆２．载体、目的基因与载体、导入、筛选３．细菌、双链DNA中的特定碱基序列、磷酸二酯４．目的基因、制备基因组文库、构建cDNA文库、PCR扩增、人工合成DNA技术５．黏性末端连接、平头末端连接、人工接头法、同源多聚尾连接法６．转化、转导７．DNA、mRNA。8．DNA、具有独立复制能力、具有多克隆位点、具有筛选标志、具有足够的容量、能导入受体细胞四、名词解释1、是指在体外将DNA分子”剪切”并重新”拼接”形成一个新的重组DNA分子,然后将它导入细菌或动物细胞内使之表示,产生出人类所需要的基因产物或改造新的生物品种。2、是指用酶学方法将不同来源的DNA进行切割、连接,组成一个新的DNA分子的过程。3、克隆(clone)原指一个亲本细胞经无性繁殖产生无数个相同细胞的子代群体的过程。4、是指将重组DNA分子导入到合适的受体细胞中,使其扩增和繁殖,以获得大量的相同的DNA分子,又称分子克隆或基因克隆。5、要分离和克隆的相应基因常称为目的基因。因目的基因片段需插入载体,导入宿主细胞内进行复制或表示,因此对宿主细胞DNA而言,又称它为外源性基因或外源性DNA。6、能够携带外源DNA进入受体细胞内进行复制或表示的DNA分子,被称为基因载体。7、是独立于细菌染色体之外,能自主复制的共价闭合环状双链DNA。8、是由细菌产生的一类能特异识别双链DNA中的特定碱基序列,并在识别位点切割磷酸二酯键的核酸内切酶(简称限制酶)。9、将所有的重组DNA分子都导入宿主细胞进行扩增,得到分子克隆的混合体,这样一个混合体称为基因文库。10、从组织细胞中分离得到纯化的mRNA,然后以mRNA为模板,利用逆转录酶合成其互补DNA,再复制成双链cDNA片段,与适当载体连接后导入受体菌内,扩增,构建cDNA文库。11、是指以质粒为载体构建的重组DNA导入处于感受态的宿主细胞,并使其获得新的表型的过程。12、以噬菌体或细胞病毒为载体构建的重组DNA导入受体细胞并获得新的表型的过程称为转导(transduction)。13、真核细胞主动摄取或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程称为转染。五、问答题１、①具有独立复制能力;②具备多个限制酶的识别位点(多克隆位点);③具有遗传表型或筛选标志;④有足够的容量以容纳外源DNA片段;⑤可导入受体细胞。经过人工构建的载体,不但能与外源基因相连接,导入受体细胞,还能利用本身的调控系统,使外源基因在宿主细胞中复制并表示。２、(1)限制性核酸内切酶:识别并特异切割DNA碱基序列;(2)DNApolⅠ:催化缺口平移,制备高比度DNA探针;(3)Klenow片段:合成cDNA第二条链,补齐或标记双链DNA3′端;(4)TaqDNA聚合酶:DNA体外扩增(PCR);(5)逆转录酶:催化合成cDNA;(6)T4DNA聚合酶:聚合补平或标记DNA平末端或3′凹端等;(7)DNA连接酶:催化2条DNA链之间形成磷酸二酯键;(8)大肠杆菌DNA连接酶:应用于黏端DNA或切口间连接;(9)T4DNA连接酶:应用于黏性或平末端DNA的连接;(10)末端脱氧核苷酸转移酶:给载体或cDNA加上互补的同聚尾、加标记物;(11)碱性磷酸酶:防止载体自身连接、32P标记5′端;(12)T4多核苷酸激酶:5′端磷酸化、5′端标记放射性核素。３、(1)分离制备目的基因——”分”;(2)切割目的基因和载体——”切”;(3)目的基因与载体的连接——”接”;(4)将重组DNA导入宿主细胞——”转”;(5)筛选并鉴定含重组DNA分子的受体细胞克隆——”筛”;(6)克隆基因在受体细胞内进行复制或表示——”表”。 ４、(1)制备基因组文库;(2)构建cDNA文库;(3)PCR扩增目的基因;(4)人工合成DNA技术。５、⑴黏性末端连接:将靶基因片段和载体DNA经相同的限制酶分别切割,使它们两端产生相同的黏性末端。然后经黏性末端碱基配对,再经DNA连接酶作用,共价连接成新的重组DNA分子;⑵平头末端连接:将平末端的DNA分子在T4DNA连接酶催化下,使DNA分子的3′OH和5′P进行共价结合;⑶人工接头法:是指利用人工接头加在平端DNA片段的两端,然后用相应限制酶切割人工接头以产生黏性末端,再与带相同黏性末端的载体相连;⑷同源多聚尾连接法:在末端脱氧核苷酸转移酶催化下,在线型载体分子的两端加上单一核苷酸如dG组成的多聚尾;而在目的DNA分子的两端加上dC尾,两者混合退火,然后经DNA聚合酶Ⅰ或Klenow填补裂口处缺失的核苷酸,再经过DNA连接酶修复成环状的双链DNA。6、限制性核酸内切酶(RE)是由细菌产生的一类能特异识别双链DNA中的特定碱基序列,并在识别位点切割磷酸二酯键的核酸内切酶(简称限制酶)。限制酶的识别和切割位点一般是4～8个bp长度且具有回文序列的DNA片段,主要产生5′突出、3′突出的黏性末端或平端。当一个样本DNA被一个特定的限制酶切割后,能够产生一批相同碱基序列的DNA片段,进而能够用于基因重组、克隆、核酸分子杂交与序列分析等。7、质粒是独立于细菌染色体之外,能自主复制的共价闭合环状双链DNA。经过人工构建的载体,不但能与外源基因相连接,而且质粒含有复制起始原点(ori),此起始点与顺式作用调控元件构成一个复制子(复制区内),能借助宿主细菌染色体DNA复制所用的同一套酶系独立地进行自我复制、克隆。什么是基因工程,基因工程的基本流程?基因工程诞生的条件与标志分别是什么?3.基因工程载体必须满足哪些基本条件?质粒载体有什么特征,有哪些主要类型?3.噬菌体载体有哪些?携带能力分别有多大?4.什么是人工微小染色体?有哪些类型?5.什么是穿梭载体?表示载体应该具备什么条件?7.限制性内切核酸酶的特点与使用注意事项有哪些?18.什么是蛋白质芯片?19.什么是基因组文库?其构建方法是怎样的?20.什么是cDNA文库?它的构建流程是什么?21.构建cDNA文库需要用到哪些工具酶?第二章1.在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指(B)A．I类限制酶B.II类限制酶C.III类限制酶D.核酸内切酶E.RNAase2.下列关于同裂酶的叙述错误的是(B)是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。它们的识别序列完全相同。它们的切割方式能够相同,也能够不同。有些同裂酶识别的完整序列不完全一样,但切割位点间的序列一样。两种同裂酶的切割产物连接后,可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。3.多数限制酶消化DNA的最佳温度是(A)A.37℃B.30℃C.25℃D4.下列关于限制酶的叙述错误的是(B)A.

I类限制酶反应需要Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸。B.

II类限制酶反应需要Mg2+、ATP。C.

III类限制酶反应需要Mg2+、ATP,S-腺苷蛋氨酸能促进反应,但不是绝对需要。D.

I、III类限制酶对DNA有切割和甲基化活性,II类限制酶对DNA只有切割活性而无甲基化活性。E.

II5.如果一个限制酶识别长度为6bp,则其在DNA上识别6bp的切割概率为(D)A.1/44B.1/66C.1/64D.1/46E.1/1066.多数II类限制酶反应最适PH是(C)A.PH:2-4B.PH:4-6C.PH:6-8D.PH:8-10E.PH:4-107.下列关于限制酶反应的说法错误的是(D)A.

限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后,可能会阻碍限制酶的酶解活性。B.

许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。C.

有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。D.

限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液,是由于磷酸根会抑制限制酶反应。E.

BSA对许多限制酶的切割活性都有促进作用,因此酶切反应中常加入一定量的8.II类限制酶反应中必须的阳离子是(C)A.Na+B.Ca2+C.Mg2+D.Zn2+E.Mn2+9.RFLP形成的原因是(A)A.

由于遗传变异造成同源染色体中碱基的随机变化。B.

使用不同的限制性内切酶进行切割。C.

杂交时使用不同的探针。D.

每种染色体存在两条。E.

提取不同的染色体DNA酶切。10.下列关于限制酶命名的表示方法,正确的是(E)A.Sau.3AIB.B.amHIC.pstID.EcorIE.HindIII11.需进行DNA部分酶切时,控制下列哪种条件最合适(D)A.反应时间B.反应体积C.PHD.限制酶量E.反应温度12.下列酶在反应中不需要ATP的是(D)A.E

coKB.T4DNA连接酶C.BamHID.EcoBE.DNApolI13.限制性内切酶可特异性识别(B)A.双链DNA的特定碱基对B.双链DNA的特定碱基序列C.单链RNA的特定碱基序列D.单链DNA的特定碱基序列E双链RNA的特定碱基对14.下列与RFLP相关的一条是(D)A.

不同限制酶在单个染色体DNA上的限制性图谱。B.

两种物种个体间的限制性图谱。C.

同一个体等位基因的限制性图谱。D.

同一物种不同个体的限制性图谱。E.

非同源染色体用同种限制酶切形成的限制酶图谱。15．限制酶的星号活性是指在非正常条件下,限制酶(A)A.

识别和切割序列发生变化。B.

切割活性大大提高。C.

识别和切割序列与原来完全不同。D.

能够任意切割DNA。E.

只能部分切割DNA。三．填空题1．限制酶是一类专门切割DNA的酶,它能特异性识别切割双链(单、双)DNA。2．II型限制酶识别位点一般长度为4~6个核苷酸对。3．个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称限制性片段长度多态性(RFLP)。4．限制酶命名采用Smith和Athens提议的方案,第一个字母大写取自来源细菌的属名;第二、三个字母取自来源细菌的种名;第四个字母(如果有)取自来源菌的株系。5．需要部分酶切时可采取的方法有(1)减少酶的用量(2)缩短反应时间(3)增大反应体积。6．限制酶识别序列为n个碱基,则其切割频率的理论值应是4n。7．限制性内切酶一般保存在50%浓度的甘油溶液中。8．甘油浓度是导致一些酶的星活性的原因之一,在酶切时反应体系中的甘油浓度应控制在5%以下。9．限制与修饰是宿主的一种保护体系,它是经过对外源DNA的限制和对自身DNA的修饰来实现的。10．II型限制酶既具有识别位点的专一性,也具有切割位点的专一性。它作用时需要Mg2+离子作辅助因子。第三章习题选择题1.关于PCR扩增停滞的原因有很多种,但下列各项中(B)项不是主要原因。A.底物(模板)过剩B.dNTP的大量消耗C.产物的聚集D.非特异性产物的竞争性抑制2.Clark作了一个有趣的实验,发现TaqDNA聚合酶能够不需要模板,在双链DNA的末端加一个碱基,主要是加(B)A.dGTPB.dATPC.dCTPD.dTTP3.有简并引物的3’端尽量使用具有简并密码的氨基酸,这是因为(A)A.TaqDNA聚合酶具有一定的不精确性B.便于排除错误碱基的掺入C.易于退火D.易于重组连接4.PCR实验的特异性主要取决于(C)A.DNA聚合酶的种类B.反应体系中模板DNA的量C.引物序列的结构和长度D.四种dNTP的浓度E.循环周期的次数5.有关PCR的描述下列哪项不正确:(D)A.是一种酶促反应B.引物决定了扩增的特异性C.扩增的产量按Y=m(1+X)nD.扩增的对象是氨基酸序列E.扩增的对象是DNA序列6.有关PCR的描述下列哪项正确:(ABC)A.polymerasechainreaction的字首缩写B.1993年获诺贝尔化学奖C.已广泛的应用于医学各学科D.能够准确对扩增模板定量E.以上都对7.PCR反应产物的特异性取决于(E)A镁离子浓度B退火温度C引物碱基组成和长度D循环次数E.A+B+C填空1.Clark发现用TaqDNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端,而是有一个突出碱基末端的双链DNA分子。根据这一发现设计了克隆PCR产物的。2.在简并引物的设计中,常常要用到dI(次黄嘌呤),原因是。3.简并引物PCR主要是根据蛋白质的氨基酸序列设计引物来合成相应的基因。4.SSC是由NaCl和柠檬酸钠组成的试剂,其中NaCl的作用是使,而柠檬酸钠的作用是。KEY1.T-载体2.dI能够和任何载体相匹配3.一组混合4.DNA溶解;作为螯合剂抑制核酸酶的活性简答题1.你打算扩增下图所示的两段序列之间的DNA,请从所列出引物中选出合适的一对,5’-GACCTGTGGAAGCCATACGGGATTG-3’3’-CTGGACACCTTCGGTATGCCCTAAC-5’引物1引物25’-GACCTGTGGAAGC5’-CATACGGGATTG5’-CTGGACACCTTCG5’-GTATGCCCTAAC5’-CGAAGGTGTCCAG5’-GTTAGGGCATAC5’-GCTTCCACAGGTC5’-CAATCCCGTATG答:引物1:5’-GACCTGTGGAAGC;引物2:5’-CAATCCCGTATG2.PCR反应包括引物与DNA模板链间的解链与复性。讨论循环温度范围对引物-DNA双螺旋稳定性的影响及对PCR产率的影响。答:由于GC对间是三个氢键的作用力,比两个氢键作用力的AT对要稳定,因此DNA的解链与退火都是依赖于G+C的含量与A+T的含量的比例。GC对普遍比AT对更倾向于非特异性的复性,因此GC含量高的引物比AT含量高的引物更适合于PCR反应。PCR的基本原理是什麽?用PCR扩增某一基因,必须预先得到什麽样的信息?(1)利用DNA半保留复制的原理,在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸。(2)至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。3.何谓简并引物?简并引物设计的一般原则是什麽?答:简并引物是指根据肽链的氨基酸序列(或部分序列),并充分考虑密码子的简并性而设计的,用于PCR扩增的混合引物之间具有不同的碱基组成,但碱基数量是相同的。由于充分考虑了密码的简并性,在这种混合引物中必定有一种引物能够和该基因的DNA序列精确互补。简并引物设计的一般原则是:(1)选择保守区设计简并引物;(2)选择简并性低的氨基酸密码区设计引物;(3)注意密码的偏爱性;(4)使用尽可能短的引物,以降低简并性,最短可用15~20个碱基。(5)由于TaqDNA聚合酶在PCR扩增时容易掺入错误碱基,因此设计的引物,其3’端