CN112638533A 微粒分类装置、细胞治疗剂制造装置、微粒分类方法和程序 （索尼公司）

PCT/JP2019/03559120提供了一种根据预定比率制备包括多种微经流道(155)的微粒而产生的光来确定微粒是否基于所产生的光的特征来确定微粒是否属于两为两个或更多个不同微粒群指定的颗粒组成比中被确定为属于任何一个微粒群的微粒是否被2基于所述第一微粒群和所述第二微粒群的至少一个成分2.根据权利要求1所述的微粒分类装置，其中，所述电路还被配置为当微粒流过流道至少一个特征和所述光学信息来确定所述第一组微粒属于所述第一微粒群和所述第二组4.根据权利要求3所述的微粒分类装置，其中，所述至少响应于确定所述微粒混合物的所述第一微粒群与所述第二微粒群的比率在所述组成比率范围内，控制第一组中的第一微粒的分类以不在所述微粒混合物中包括所述第一微响应于确定所述微粒混合物的所述第一微粒群与所述第二微粒群的比率在所述组成比率范围内，控制第二组中的第二微粒的分类以不在所述微粒混合物中包括所述第二微响应于确定所述微粒混合物的所述第一微粒群与所述第二微粒群的比率在所述组成比率范围之外，控制第一组中的第一微粒的分类以在所述微粒混合物中包括所述第一微响应于确定所述微粒混合物的所述第一微粒群与所述第二微粒群的比率在所述组成3比率范围之外，控制第二组中的第二微粒的分类以在所述微粒混合物中包括所述第二微粒群到所述第二微粒群的至少一个成分量，为所述第一微粒群设置要获取的第一微粒数基于所述第三微粒数量与所述第一微粒数量的比较来控制基于所述第四微粒数量与所述第二微粒数量的比较来控制基于所述第一微粒群和所述第二微粒群的至少一个成分4获得指示第一组细胞是第一细胞类型并且第且基于所述第一细胞类型和所述第二细胞类型的至少一5derivedfromdefinedCD8+andCD4+subsetsconfersuperiorantitumorreactivity6胞仪获得具有不同特征的多种类型细胞亚群部分，测量/调节每个细胞亚群部分的细胞浓产生的光是否具有针对荧光和/或散射光指定的特征，来确定微粒是否属于两个或更多个属于两个或更多个不同微粒群中的任何一个的微粒的分类数量没有达到基于指定的颗粒7属于两个或更多个不同微粒群中的任何一个的微粒的分类数量已经达到基于指定的颗粒[0031]所述确定单元可以基于通过用光照射在用于微粒分类的微芯片中流动的流体中8置为基于所检测的光的至少一个特征和光学信息来确定第一组微粒属于第一微粒群和第来控制第一组微粒的分类；确定已经被分类到微粒混合物中的第二微粒群的第四微粒数9[0059][图4]图4A至4C是示出通过用微粒分类装置对全血溶血样品进行测试测量而获得[0065][图10]图10是示出根据本技术的实施例的细胞治疗剂制造装置的配置示例的示[0074](5)第一实施例的第四示例(具有用于微粒分类的连接的微芯片的颗粒分类过程类操作获得的混合物中的多种类型的微粒的组道的微粒。光照射单元101可以包括发射光的光源和将激发光聚集在检测区域中流动的微[0085]检测单元102检测由光照射单元101执行的光照射从微粒产生的散射光和/或荧转换将检测到的光转换成模拟电信号。检测单元102还可以通过AD转换将模拟电信号转换[0086]控制单元103中包括的信号处理单元104可以处理由检测单元102获得的数字电信号的波形，并且生成关于用于由确定单元105做出的确定(特别是初级分类确定)的光的特[0087]控制单元103中包括的确定单元105基于通过用光照射流经流道的微粒而产生的[0089]控制单元103中包括的分类控制单元107控制用于微粒分类的微芯片150执行的微中的流体的流动，以便对由确定单元105执行的次级分类确定所确定要分类的微粒进行分[0090]控制单元103可以控制光照射单元101的光照射和/或检测单元102的光检测。此制单元103可以包括例如存储用于使微粒分类装置执行根据本技术的微粒分类方法的程序中的两个不同位置中的每一个被光照射(换言之，在检测区域156中，有两个位置被光照达分类部分157的时间之间的差值等于或小于预定阈值的情况下，也可以确定所述特定微光照射检测区域156中的两个不同位置中的每一个的微芯片和包括该微芯片的装置的具体[0097]用于微粒分类的微芯片150包括包含微粒的流体流过的主流道155、从主流道155[0098]在用于微粒分类的微芯片150中的分类部分157中，流过主流道155的层流被分成[0100]可以例如通过在颗粒分类流道159中产生负压来进行进入颗粒分类流道159的流[0101]如上所述，在特定微粒到达分类部分157的时间和特定微粒之前或之后的微粒到类流道159经由与主流道155同轴的孔口部分170彼此连通。应该被收集的颗粒通过孔口部[0105]为了防止不应被收集的颗粒通过孔口部分170进入颗粒分类流道159，孔口部分[0106]流向分支流道158的层流可以在分支流道端部160处排放到微收集到颗粒分类流道159中的颗粒可以在颗粒分类通道端部单元105确定要分类的微粒进行分类，由分类部分157分类的微粒可以收集在一个容器中。[0110]一个颗粒收集通道可以连接到颗粒分类通道端部161。颗粒收集通道的一端可以结合两个形成有预定流道的衬底来制造用于微粒分类的微芯片150。流道可以形成在两个[0116]下面将更详细地描述由构成根据本技术的微粒分类装置的确定单元执行的初级[0119]两个或更多个不同微粒群中的每一个都可以包括一个或多个共享特征的微粒(特于另一分化阶段的细胞群的组合的两个细胞群或者处于一个或多个其他分化阶段的两个以确定由光照射产生的光的特征是否满足为光指定的标准(下文中，称为“初级分类标生的光是否具有针对荧光和/或散射光指定的特征，来确定微粒是否属于两个或更多个不标准可以例如由用户在初级分类确定之前指定。在由光照射产生的荧光和/或散射光的特[0152]如上所述，确定单元105可以确定在检测到特定微粒的时间之前和之后的时间间即，确定单元105可以根据存在于特定微粒附近的其他微粒的存在来确定特定微粒没有被[0154]确定单元105可以根据特定微粒附近的其他微粒的存在、特定微粒未被分类的次[0155]初级分类确定可以是例如通过使用上述PTL1中描述的微芯片在芯片上分类中进[0157]确定单元105基于为两个或更多个不同微粒群指定的颗粒组成比率，确定在初级[0163]例如，在通过细胞表面上存在的分子和/或分化阶段对两个或更多个微粒群进行[0164]在执行次级分类确定之前，确定单元105可以基于指定的颗粒组成比率设置用于确定在初级分类确定中被确定为属于两个或更多个不同微粒群中的任何一个的微粒是否级分类确定中对被确定为属于两个或更多个不同微粒群中的任何一个的微粒进行分类来实现颗粒组成比率。次级分类标准可以由例如确定单元105设置，或者可以由另一组件设[0165]根据本技术的一个实施例，确定单元105可以基于指定的颗粒组成比率来设置获属于微粒群A和B的微粒的获取的微粒的数量分别设置为例如的分类数量没有达到基于指定的颗粒组成比率设置的获取微粒的数量，则确定单元105可[0169]当确定单元105执行如上所述的次级分类确定时，收集的微粒具有上述颗粒组成[0170]可以通过对通过微粒分类流道159中的预定位置的微粒数量进行计数来获得微粒射单元101和检测单元102的内容适用于光照射单元和检测单元。可以由例如控制单元103[0174]属于特定微粒群的确定次数可以是确定单元105确定其属于特定微粒群的确定次定微粒附近的另一微粒的存在确定特定微粒没有被分类的确定次数)和(确定单元105根据以预定次数连续驱动的致动器的驱动确定下一个流动的微粒没有被分类的确定次数)的总率是否落在包括指定的颗粒组成比率的预定数值范围的任何一个的微粒的情况下的颗粒组成比率落在包括指定的颗粒组成比率的指定数值范或更多个不同微粒群中的任何一个的微粒的情况下的颗粒组成比率未落在包括指定颗粒[0178]确定单元105可以采用例如指定的颗粒组成比率±预定的阈值，作为指定的数值[0179]确定单元105执行如上所述的次级分类确定，从而允许以指定数值范围内的组成个或更多个不同微粒群中的任何一个的微粒。被确定为被分类的微粒通过孔口部分170流入颗粒分类流道159。一个容器可以通过例如颗粒收集通道连接到颗粒分类通道端部161。执行根据本技术的确定单元对微粒的分类确定处理。通过控制包括微粒的液滴的移动方细胞组成比率从全血溶血样品中分类作为T细胞的亚群的C[0187]注意，在该示例和以下“(3)第一实施例的第二示例(微粒分类操作的示例)两种特定类型的T细胞的情况，但是这些示例中的微粒分类装置100的操作可以分类T细胞[0191]在通过前述测试测量找到应该被设置为分类目标细胞的闸之后，例如，如图5所[0192]在指定了作为初级分类标准的门逻辑和用于设置次级分类标准的颗粒组成比率[0193]在图6的步骤S101中，用户经由例如接口将门逻辑和颗粒组成比率输入到微粒分类装置的操作员(除了执行上述设置的人之外)制造开用户可以基于在测试测量中计数的满足每个门逻辑的单元数量来设置用于分类的单元数号闸门的门逻辑的细胞数量和所获取的满足2号闸门的门逻辑的细胞数量。可以基于例如在步骤S102中设置的用于分类的单元的单元数量和颗粒组成比率来设置这些获取的单元[0199]例如，在步骤S102中用于分类的单元数量被设置为100的情况下，基于单元数量足1号闸门的门逻辑的细胞的数量和在步骤S1粒分类装置100开始分类满足通过将1加到当前闸门数而获得开始对细胞进行分类。例如，控制单元103开始对满足最小闸门数的门逻辑的细胞进行分器例如通过通道(管等)连接到样品液体通道152或鞘液通道154。除了样品液体或鞘液之且可以通过样品液体通道152或鞘液通道154流入主流道155。通过用光照射气泡而产生的光的检测时间的长度可以不同于通过用光照射微粒而产生的光的检测时间的长度(特别是更长)。通过用光照射气泡而产生的光的特征也可以不同于通过用光照射微粒而产生的光105可以基于数字电信号来确定气泡是否流动。控制单元103可以根据气泡流过检测区域的光被检测单元和信号处理单元转换成数字电信号，并且确定单元105可以基于数字电信号来确定气泡是否穿过预定位置。控制单元103可以根据气泡穿过预定位置的确定来结束[0218]用于结束分类过程的条件的另一示例可以是用于向样品液体通道152或鞘液体通道154供应样品液体或鞘液体的容纳液体的容器的重量是否达到预定值或更小，或者重量[0219]或者，分类过程重量条件可以是连接到上述颗粒分类通道端部161的容器的重量感器可以连接到微粒分类装置100。由重量传感器称重的量数据依次或连续地传输到控制[0223]该示例是用于利用根据本技术的微粒分类装置100从细胞组成比率为1：1的全血溶血样品中对作为T细胞亚群CD4+T细胞和CD8+T细胞分类的分类[0226]在指定了作为初级分类标准的门逻辑和用于设置次级分类标准的颗粒组成比率收集的细胞数量达到预先为每个细胞设置的获取数量。将在下面描述微粒分类过程的细[0228]在步骤S205中，微粒分类装置100开始分类满足1号闸门的门逻辑或2号闸门的门[0231]在步骤S208中，确定单元105确定已经产生满足1号闸门的门逻辑或2号闸门的门被分类到颗粒分类流道159中的细胞的数量与在步骤S203中设置的获取的细胞数量进行比被分类到颗粒分类流道159中的细胞的数量与在步骤S203中设置的获取的细胞数量进行比被确定为满足2号闸门的细胞在步骤S207中被分类。响应于细胞被分类的确定，控制单元细胞通过检测区域156后经过一段时间后驱动设置在颗粒分类流道159上的压电致动器(未[0236]在步骤S210中，控制单元103对于所有的闸门数量确定已经分类到颗粒分类流道159中的细胞的数量是否已经达到在步骤S203中设定的获取的细胞数量。如果已经分类到颗粒分类流道159中的细胞的数量已经达到在步骤S203中为所有闸门数量设定的获得的细[0246]该示例是利用根据本技术的微粒分类装置100从全血溶血样品中分类作为T细胞的亚群的CD4+T细胞和CD8+T细胞的示例，使得细胞之间的组成比[0249]在指定了作为初级分类标准的门逻辑和用于设置次级分类标准的颗粒组成比率[0250]在图8的步骤S301中，用户经由例如接口将门逻辑和颗粒组成比率输入到微粒分[0252]在步骤S303中，微粒分类装置100获取满足1号闸门的门逻辑的细胞和满足2号闸[0254]上述分类过程收集了50个满足1号闸门的门逻辑的细胞和50个满足2号闸门的门门逻辑或2号闸门的门逻辑(即，任何初级分类标准)的光的细胞进行分类的情况下的颗粒分类的情况下的颗粒组成比率落在预定数值范围内，则控制单元103使处理进行到步骤分类的情况下的颗粒组成比率未落在预定数值范围内，则控制单元103使处理进行到步骤细胞通过检测区域156后经过一段时间后驱动设置在颗粒分类流道159上的压电致动器(未[0268]在如上所述的分类过程中分别收集50个CD4+T细胞和50个CD8+[0269](5)第一实施例的第四示例(具有用于微粒分类的连接的微芯片的颗粒分类过程[0272]将在下面参考图9描述根据本技术的微粒分类装置，包括用于微粒分类的通道单技术的微粒分类装置900包括光照射单元101a、检测单元102a和用于微粒分类的微芯片[0278]用于微粒分类的微芯片150a的微粒分类通道端部161a和用于微粒分类的微芯片微粒分类的微芯片150a的分类部分157a和用于微粒分类的微芯片150b的分类部分157b之[0279]流道连接构件901可以是例如管等。本领域技术人员可以从本技术所属的技术领902设置在连接两个分类部件157a和157b的流道上，使得流体能够从连接两个分类部件游微芯片150a的分类部分157a流入容器902的流体的流速和从容器902流入用于微粒分类902上游和用于微粒分类的微芯片150a的分类部分157a下游的流道中的流速以及位于容器902下游和用于微粒分类的微芯片150b的分类部分15对流体储存容器902下游的流道中的流速的影响或者由于流体储存容器902下游的流道中的流速波动对流体储存容器902上游的流道中的流速的影响。流速变化可以是例如由泵驱[0282]在流体存储容器902上游的流速与流体存储容器902下游的流速流体存储容器902根据两个流速之间的差异改变其流体存储量。即使在这两个流速由于流气接口的流体储存容器适于抑制由上游分类部分157a和下游分类部分157b中的每一个中[0284]流体储存容器902可以被配置为例如随着流体储存量的变化(增加)而膨胀。流体[0285]根据本技术的一个实施例，流体储存容器902本身可以包括不具有弹性特征的材[0286]根据本技术的另一实施例，流体储存容器902可以包括具有弹性特征的材料(例[0288]流体储存容器902可以具有设置在其中的过滤器。该过滤器可以用于例如防止来[0289]例如，在流体存储容器902上游的流速高于流体存储容器902下游的流速的情况[0291]此外，流体储存容器902可以被配置为使得流体(特别是流入容器的液体)不会从[0292]流体存储容器902的材料可以是能够改变流体存储量和流体保持力的材料。本领脉动流对流体存储容器902上游的用于微粒分类的微芯150b中执行根据本技术的微粒分类过程，从而使得能够以用户指定的颗粒组成比率收集多种类型的目标微粒。此外，供应到用于微粒分类的下游微芯片150b的微粒数量小于在前述容器181中的多种类型的细胞以特定的组成比率存在。使特定的组成比率适合于某种疾病[0317]根据本技术的微粒分类方法的流程图的一个示例如图6所示被认为如上述1中的描述。[0318]根据本技术的微粒分类方法可以包括步骤S107和S108以外的图6所示的步骤。这[0319]根据本技术的微粒分类方法的流程图的另一示例如图7所示被认为如上述1中的描述。[0320]根据本技术的微粒分类方法可以包括步骤S207和S208以外的图7所示的步骤。这[0321]根据本技术的微粒分类方法的流程图的另一示例如图8所示被认为如上述1中的描述。[0323]根据本技术的微粒分类方法可以包括步骤S305和S306以外的图9所示的步骤。这[0324]本技术还提供了用于使微粒分类装置(特别是根据本技术的微粒分类装置)或其控制单元或细胞治疗剂制造装置(特别是根据本技术的细胞治疗剂制造装置)或其控制单元或细胞治疗剂制造装置(特别是根据本技术的细胞治疗剂制造装置)或其控制单元执行分类确定步骤，用于基于通过用光照射流经流道的微粒而产生的光来确定微粒是否被分剂制造装置(特别是根据本技术的细胞治疗剂制造装置至少一个特征和光学信息来确定第一组微粒属于第一微粒群和第二组微粒属于第二微粒包括：响应于确定所述微粒混合物的第一微粒群与第二微粒群的比率在组成比率范围内，于第一微粒群到第二微粒群的至少一个成分量，为第一微粒群设置要获取