动物细胞培养课件高二下学期生物人教版选择性必修3(1)-1

11、动物细胞培养（基础）2、动物细胞融合与单克隆抗体3、动物细胞核移植技术与克隆动物植物细胞工程植物组织培养

植物体细胞杂交动物细胞工程的基本技术【回顾旧知】（基础）Q1:植物组织培养技术的原理是什么？大致流程？如何调控发育的方向？Q2：以菊花的组织培养为例分析操作流程？Q3：植物体细胞杂交技术的原理？流程？Q4：植物细胞工程的应用有哪些？2.2动物细胞工程

2.2.1动物细胞培养皮肤的自体移植小面积烧伤：植皮(自身)后恢复1）使用他人皮肤？患者自身的不够用，如何解决？大面积烧伤？2）培养自身细胞？从社会中来人造皮肤：人体再生术的秘密1、概念：从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。2、目的：细胞；不能获得完整动物个体。3、原理：细胞增殖（有丝分裂）那么，动物细胞的培养需要哪些条件呢？动物体组织单个细胞细胞生长和增殖取出分散适宜条件一、动物细胞培养601动物细胞培养的条件糖类、氨基酸、无机盐、维生素…无菌、无毒的环境适宜的温度、pH和渗透压适宜的气体环境充足的营养、稳定的内环境将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基含人类未知、细胞生长增殖所必需的物质，满足细胞对未知营养成分的需求。培养基的构成：合成培养基+血清等天然成分一般用液体培养基，也称为培养液一、动物细胞培养701动物细胞培养的条件糖类、氨基酸、无机盐、维生素…无菌、无毒的环境适宜的温度、pH和渗透压适宜的气体环境①培养液、培养用具：灭菌处理；②无菌操作；③适量添加抗生素定期更换培养液，以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。①适宜的温度：哺乳动物细胞培养的温度多以___________为宜；②适宜的pH：多数动物细胞生存的适宜pH为________；③适宜的渗透压：维持细胞正常的形态和功能。36.5±0.5℃7.2-7.4一、动物细胞培养801动物细胞培养的条件糖类、氨基酸、无机盐、维生素…无菌、无毒的环境适宜的温度、pH和渗透压适宜的气体环境维持培养液的pH95%空气

+5%CO2的CO2培养箱O2：细胞代谢所必需CO2培养箱松盖培养瓶培养皿你还记得体液调节中的CO2的作用吗？一、动物细胞培养

动物组织分散成单个细胞培养根据动物细胞培养的概念，小组为单位初步构建动物细胞培养的流程：【8min】（1）培养前，为什么要将动物组织分散成单个细胞？（2）怎样将动物组织分散成单个细胞？（3）分散成的单个细胞，如何培养？（4）培养一段时间后，细胞分裂会受阻，为什么？怎么解决？（5）什么是原代培养和传代培养？（6）进行传代培养（分瓶培养）时，如何处理？一、动物细胞培养的过程取动物组织制成细胞悬液转入培养液进行原代培养放入CO2培养箱中培养传代培养放入CO2培养箱中培养用机械的方法，或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理的方法，将组织分散成单个细胞快速浏览培养过程：一、动物细胞培养的过程

动物组织分散成单个细胞培养根据动物细胞培养的概念，初步构建动物细胞培养的流程：（1）培养前，为什么要将动物组织分散成单个细胞？①分散不会限制彼此的生长和增殖；②分散有利于与培养液充分接触，保证O2与营养供应和代谢物及时排出。一、动物细胞培养的过程

动物组织分散成单个细胞培养根据动物细胞培养的概念，初步构建动物细胞培养的流程：（2）怎样将动物组织分散成单个细胞？机械的方法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间。①说明动物细胞间的物质主要是什么成分？蛋白质机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理一、动物细胞培养的过程

动物组织分散成单个细胞培养根据动物细胞培养的概念，初步构建动物细胞培养的流程：教材P44旁栏思考：（2）怎样将动物组织分散成单个细胞？机械的方法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间。②用胃蛋白酶可以吗？不可以，多数动物细胞生存的适宜pH为7.2～7.4，而胃蛋白酶的适宜pH约为2，在此环境中会失活。机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理一、动物细胞培养的过程

动物组织分散成单个细胞培养根据动物细胞培养的概念，初步构建动物细胞培养的流程：（2）怎样将动物组织分散成单个细胞？机械的方法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间。③胰蛋白酶处理时间过长，会怎样？会破坏细胞结构，把细胞消化掉机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理一、动物细胞培养的过程教材P44旁栏思考：

动物组织分散成单个细胞培养根据动物细胞培养的概念，初步构建动物细胞培养的流程：（3）分散成的单个细胞，如何培养？用培养液将细胞制成细胞悬液，放入培养皿或松盖培养瓶内，置于适宜环境中培养。机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理加培养液细胞悬液培养放入培养瓶在适宜条件中一、动物细胞培养的过程动物组织分散成单个细胞细胞悬液机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理加培养液★体外培养动物细胞分为两类:①悬浮生长细胞细胞能够悬浮在培养液中生长増殖;②贴壁生长细胞（主要类型）细胞需要贴附于某些基质表面才能生长增殖悬浮培养瓶培养放入培养瓶在适宜条件中细胞贴壁接触抑制一、动物细胞培养的过程【如淋巴细胞、大部分血液系统来源细胞】细胞贴壁过程圆球形细胞刚开始铺展贴壁生长（100×）培养的动物细胞贴壁生长并进行有丝分裂（100×）细胞单层贴壁生长铺满瓶壁后出现接触抑制（100×）贴壁生长与接触抑制正常细胞只有一层；肿瘤细胞/癌细胞有多层癌细胞表面糖蛋白减少，黏着性降低，适宜条件可无限增殖。动物组织分散成单个细胞细胞悬液机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理加培养液培养放入培养瓶在适宜条件中（4）培养一段时间后，细胞分裂会受阻，为什么？接触抑制悬浮生长贴壁生长(大多数）细胞密度过大、有害代谢物积累、营养物质缺乏等细胞分裂受阻解决？一、动物细胞培养的过程动物组织分散成单个细胞细胞悬液机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理加培养液培养放入培养瓶在适宜条件中传代培养在适宜条件中分瓶培养

原代培养（5）什么是原代培养和传代培养？①原代培养：指动物组织经处理后的初次培养。②传代培养：分瓶后的细胞培养。一、动物细胞培养的过程动物组织分散成单个细胞细胞悬液机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理加培养液培养放入培养瓶在适宜条件中传代培养在适宜条件中分瓶培养

原代培养（6）进行传代培养（分瓶培养）时，如何处理？悬浮细胞:离心法收集贴壁细胞:胰蛋白酶处理，再离心法收集②制成细胞悬液，分瓶培养①收集细胞一、动物细胞培养的过程取动物组织用机械法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理分散成单个细胞解决悬浮生长贴壁生长(大多数）细胞密度过大、有害代谢物积累、营养物质缺乏等接触抑制传代培养细胞悬液原代培养分瓶培养①原代培养：指动物组织经处理后的初次培养。②细胞贴壁：大多数细胞需要贴附于某些基质表面才能增殖，这类细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上。③接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞停止分裂增殖的现象。④传代培养：分瓶后的细胞培养。加培养液在培养皿或培养瓶内悬浮培养的细胞:直接用离心法收集贴壁细胞:用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，用离心法收集细胞分裂受阻②制成细胞悬液，分瓶培养①收集细胞

相关概念一、动物细胞培养的过程一、动物细胞培养的过程23021、幼龄动物的细胞与老龄动物的细胞比较，分化程度低的细胞与分化程度高的细胞比较，哪些细胞更易于培养？为什么？幼龄动物的细胞;分化程度低的细胞。这些个体的细胞分化程度低、分裂能力强，易培养。一、动物细胞培养的过程思考●讨论2：植物组织培养和动物细胞培养的比较

P42比较项目植物组织培养动物细胞培养原理培养基培养基特有成分过程结果相同点固体培养基葡萄糖、动物血清液体培养基细胞增殖植物细胞的全能性许多细胞蔗糖、植物激素（生长素、细胞分裂素）①都进行有丝分裂，不涉及减数分裂；②均需无菌操作，需要适宜的温度、pH等条件新的植株外植体↓脱分化愈伤组织

↓再分化芽、根或胚状体↓生长发育植物体动物的组织

↓机械法或胰蛋白酶、

↓胶原蛋白酶处理细胞悬液↓原代培养↓细胞悬液↓传代培养1、在进行动物细胞培养时，需要（

）A、用胶原蛋白酶、胃蛋白酶等处理以获得细胞悬液B、充入5%CO2以刺激细胞正常呼吸C、加入经高压蒸汽灭菌处理的血清以提供营养D、定期更换培养液以清除代谢物2、下列关于动物细胞培养叙述错误的是(

)A．选用的材料一般是幼龄动物的器官或组织，原因是其细胞分裂能力强B．动物细胞培养和植物细胞培养可获得大量细胞，原理均为细胞增殖C．通常将动物组织经处理后在培养瓶中的初次培养称为原代培养D．培养瓶中的细胞都需要定期用胰蛋白酶处理，分瓶后才能继续培养DD随堂练习In-classpractice《干细胞技术带来延长生命的可能》二、干细胞培养及其应用27031.干细胞的概念：2.干细胞的来源：3.干细胞的类型：

动物和人体内保留的具有分裂和分化能力的细胞。在一定的条件下，干细胞可以分化成其他类型的细胞。早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组织和器官中。二、干细胞培养及其应用2803早期胚胎中具有分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能。胚胎干细胞分布特点应用实例

在体外分化成心肌细胞、神经元细胞和造血干细胞等局限性必须从胚胎中获取，涉及伦理问题；因而限制了在医学上的应用。ES细胞二、干细胞培养及其应用29成体组织或器官内造血干细胞（骨髓、外周血和脐带血中）神经干细胞（神经系统中）精原干细胞（睾丸中）具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力成体干细胞分布举例特点应用实例治疗神经组织损伤和神经系统退行性疾病（如帕金森病、阿尔茨海默病等）治疗白血病及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的造血系统、免疫系统功能障碍等疾病造血干细胞→神经干细胞→治疗细胞损伤造成的疾病03二、干细胞培养及其应用30通过体外诱导小鼠成纤维细胞得到的类似胚胎干细胞的一种细胞①将特定基因或特定蛋白导入细胞

（成纤维细胞、已分化的T细胞、B细胞）诱导多能干细胞概念制备方法应用优点②用小分子化合物诱导形成。①诱导过程无须破坏胚胎；②iPS细胞可以来源于病人自身的体细胞，将它移植回病人体内后，理论上可以避免免疫排斥反应。可治疗镰状细胞贫血症；在治疗阿尔兹海默病、心血管疾病等领域的研究也取得了新进展iPS细胞03二、干细胞培养及其应用3103诱导多能干细胞（iPS细胞）多种体细胞定向诱导分化体外诱导小鼠成纤维细胞移植取成纤维细胞等iPS细胞转入相关因子细胞发生转化分化胰岛细胞神经元血细胞肠上皮细胞心肌细胞肝细胞病人iPS细胞用于治疗人类疾病示意图iPS细胞的应用前景：临床治疗人类疾病如：白血病、帕金森病、阿而茨海默病等二、干细胞培养及其应用无菌、无毒营养温度、pH和渗透压气体环境制备细胞悬液原代培养传代培养动物细胞培养动物细胞培养的条件动物细胞培养的过程干细胞的培养和应用干细胞的种类、特点及应用iPS细胞的培养和应用【课堂小结】1.判断下列有关动物细胞培养的表述是否正确。（1）培养环境中需要O2，不需要CO2。（

）（2）细胞要经过脱分化形成愈伤组织。（

）（3）培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清（

）（4）培养瓶中的细胞需定期用胰蛋白酶处理,分瓶后才能继续增殖（

）一、概念检测×√××2.干细胞有着广泛的应用前景。下列相关叙述错误的是()A.干细胞是从胚胎中分离提取的细胞B.造血