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银杏外种皮的研究概况文献综述1.1银杏外种皮简介银杏属裸子植物。常见的“果实”是银杏的种子。种皮分为肉质外种皮、骨性中种皮和膜质内种皮。银杏种皮为厚肉质层。其重量约占种子总重量的75%。成熟的种皮呈橙黄色,对人体皮肤有刺激作用。一般情况下,外种皮都是作为废弃物,弃而不用。在一些盛产银杏的地区,外种皮一般会被当做污染物。研究发现,将银行外种皮进行成分分离,发现其中的成分主要有银杏酚、白果酚、白果酸、氢化白果酸、银杏黄酮、银杏内酯、白果醇、银杏黄素、异银杏黄素等,大约有几十种有机化合物[1]。这里面的酚酸类化合物有很好的抗肿瘤作用,另外还有抗过敏、抗炎抑菌等功效,另外还发现其对免疫系统和心血管系统也发挥有效作用[2]。银杏种皮中的水溶性成分具有镇咳祛痰、抗过敏介质和抗原、抗气道平滑肌痉挛、降低血压、增加冠脉血流量、降低心输出量、降低心肌耗氧量、提高耐缺氧能力等作用。它们对非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫都有影响。其性质与环磷酰胺和地塞米松相似。银杏外种皮多糖具有增强细胞免疫功能的作用,能促进体液免疫过程中B淋巴细胞和抗体的产生。银杏外种皮乙醇中间体对22种常见病原真菌的有效率为81%,银杏外种皮水提物和醇提物对苹果炭疽病等11种植物病原菌的抑制率均在90%左右。乙醇提取物杀虫效果好,3d内防治率达100%。此外,银杏外种皮还可以作为生产兽药和农药的原料。从银杏外种皮中提取有效成分,将外种皮副产物变废为宝,不仅可以造福人类,而且可以解决大量废弃银杏外种皮造成的环境污染问题。楼凤昌等人[3]用乙醇提取银杏外种皮,分离获得内酯混合物。吴红菱[4]通过选用两种不同的溶剂体系提取萜内酯,并将两者进行了对比,发现乙醇水体系提取物中的总内酯平均含量明显高于丙酮水体系。此外,潘竞先等人[5]也用乙醇水体系了从银杏外种皮中提取,从中得到了银杏双黄酮。目前,根据银杏外种皮的毒性研究表明,对于提取银杏外种皮中的有效成分,其毒性对其造成了不良影响。因此,关于银杏外种皮的实验研究未能全面开展,甚至是广泛开发研究利用。1.2银杏外种皮黄酮的研究进展黄酮类化合物,一般被人们称为黄酮体(又叫做黄碱素),属于植物的的一种次生代谢产物,主要存在于一些维管植物中的叶、根、茎、花和果实之中[6],其中黄色色素,以苯基色原酮作为母核,根据实验研究已经证明,很多可使用的植物食品中,其中含有很多类型的黄酮类化合物。研究已发现,这类物质可以阵痛,还可以降血脂降血糖和降血压,同时还可以治疗抑郁症,调节神经的内分泌的效果。众所周知,结构决定功能;黄酮类化合物也是如此。组成结构不同的黄酮类化合物,它们之间的溶解能力可能大不相同[7]。实验中关于黄酮类物质常用的提取方法如下:双水相萃取分离法(aqueoustwo-phaseextraction)、超临界流体萃取(SFE)法等[8]。大多数天然植物结构组成复杂,包含的种类可能也较多;双水相萃取技术在众多方法中,因其具有较好专一性、选择性而脱颖而出,它能够很好的解决结构复杂组成的问题。这就有了一个很好的思路去从天然的植物中提取其中有药用价值的有效成分。而且,双水相体系作为化学反应介质具有操作方便、组分可调、绿色环保等特点,引起了界面科学、分离提纯和反应工程等研究和应用领域的广泛深入的研究[10]。黄酮类化合物主要分析方法:LC-MS、LC、HPCE(高效毛细管电泳法)、分光光度法等[11]。每种分析方法对分析时间和对仪器的要求有很大的差异[12]。例如:分光光度法,与其他方法相比,分光光度法既能定量地分析成分的含量,并且其操作方式也相对简单,但是其局限性是仅能定量检测粗黄酮。而追求精确性较高的定量检测黄酮,则需要色谱法进行检测分析。一般来说,硝酸铝法凭借着与黄酮类化合物都能产生反应的特点,在实验室内是最常用的分光光度法。它与黄酮类物质反应后会显色,生成的物质在特定波长下往往具有特征吸收能力。黄酮类物质分布范非常广泛,种类也很多,所以不同的化合物其本身所具有的生物活性和药物功效也是有所差异的。上世纪,研究人员已经证明,黄酮类化合物能够抵抗油脂的氧化。并且做出猜测,这类化合物是一级氧化剂而产生的作用。自此,在已开展的众多研究黄酮实验中,探索的主要都是针对清除其自身的活性氧自由基。因此,大量的实验已经证明,大部分的黄酮类化合本身其清除活性氧自由基的能力很强。1.3银杏外种皮多糖的研究进展银杏外种皮物质组成结构复杂,多糖便是其中一员;目前对多糖的研究较多[13],因为多糖在水溶液中易溶解而不溶于在醇类溶液,所以实验室中多采用的是醇沉法进行银杏外种皮中多糖的提取。可是,单一的提取方法往往有局限性,所以必须选取合适的辅助方法以此完成高效的提取。以下就是常用的一些辅助方法:热水浴、煮沸法、超声波法。沈伟松等[15]采用微波辅助法从外种皮中提取多糖,并对传统的提取方法进行了改进。采用水提醇沉法提取银杏外种皮多糖。有必要进一步分离纯化多糖,进一步研究多糖的生物活性。目前,银杏多糖的分离纯化方法主要有树脂纯化法、纤维素吸附法和强沉淀法。郭树航等[17]采用醇沉法提取多糖。分析了以下4个因素(料液比、提取次数、提取时间和提取温度)对实验多糖提取时的影响;即在料液比为1:20(g/ml),提取温度、次数、时间分别为90℃、2次、2h的条件下,银杏外种皮多糖的提取量达到最佳,为83mg/g。徐子恒[18]采用重沉法将干燥的银杏外种皮多糖两次溶于水,并用乙醇将其沉淀,而后用乙醇沉淀,最终银行外种皮中的糖含量从44.15%提升到75.2%。蒽酮-硫酸法、苯酚-硫酸法、DNS法众多研究中已使用的测定多糖含量的常用方法[19]。而苯酚硫酸法在众多研究中一致成为了大家的选择,而采用高效液相色谱(HPLC)和红外光谱扫描法(IR)也可以来分析其主要成分及结构。参考文献[1]田路飞.银杏外种皮中银杏酚酸的提取工艺研究[D].东南大学化学工程与技术;化学工艺,2015.[2]李思斯.银杏外种皮中黄酮类物质的分离纯化及抗氧化活性研究[D].江南大学,2011.[3]楼凤昌,凌娅,唐于平,等.银杏萜内酯的分离、纯化和结构鉴定[J].中国天然药物,2004(01):12-16.[4]吴红菱.银杏外种皮提取物中的内酯含量测定[J].中国医药工业杂志,2002(05):20-28.[5]潘竞先,张虎翼,杨宪斌,等.银杏外种皮的双黄酮成分[J].植物资源与环境,1995(02):17-21.[6]罗贵铃.ZIFs基衍生纳米复合材料的制备及药物小分子的电化学传感分析[D].海南师范大学,2020.[7]李国胜,张云竹,李斌.火龙果花中总黄酮的提取与含量测定[J].保鲜与加工,2018,18(06):76-82.[8]郭雪峰,岳永德.黄酮类化合物的提取·分离纯化和含量测定方法的研究进展[J].安徽农业学,2007(26):8083-8086.[9]李伟,朱自强,梅乐和.双水相萃取技术在药物分离和提取中的应用[J].化工进展,1998(01):26-29.[10]林锦良,余贵山,李友凤.双水相体系在化学反应工程中的应用研究进展[J].广东化工,2021,48(05):62-64.[11]赵晓莉,岳红.黄酮类化合物分析方法概述[J].盐湖研究,2005(02):34-39.[12]高欣.中华补血草总黄酮的提取分离及抗氧化活性研究[D].浙江海洋学院,2013.[13]夏前贤,李金贵.银杏外种皮多糖研究进展[J].中兽医医药杂志,2018,37(01):29-32.[14]夏前贤.银杏外种皮多糖抑制新城疫病毒作用的研究[D].扬州大学,2017.[15]申伟崧,刘毅,陈效毅.响应面分析法优化微波辅助提取银杏外种皮多糖的工艺研究[J].中国野生植物资源,2014,33(05):19-22.[16]茆广华.银杏外种皮多糖的分离纯化及活性研究[D].江苏大学,2007.[17]郭舒航.银杏外种皮多糖的提取工艺及抗氧化活性研究[J].食品工业科技,2011,36(7):242-245.[18]徐子恒.白果外种皮多糖的提取及其对金葡菌生物被膜抑制作用的研究[D].锦州医科大学,2018.[19]孙晓燕.多糖含量测定方法的比较[J].2015,29(3):57-62.[20]高晓燕.几种天然产物的双水相体系萃取研究[D].中国矿业大学,2019.[21]刘磊磊,李秀娜,赵帅.双水相萃取在中药活性成分提取分离中的应用进展[J].中草药,2015,46(05):766-773.[22]ALEKSANDRA,DIMITRIJEVIC.Further

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