CN113358862B 一种三联毒品荧光免疫层析试剂纸、检测试剂盒和检测方法 （暨南大学）

CN216718452U,2022.06.10本发明公开了一种三联毒品荧光免疫层析用磁性荧光探针的磁响应功能捕获并富集待检ng/L，满足对污水中毒品代谢物的各级溯源要2（2）封闭：向各抗体标记的磁性荧光微球中分别加入牛血清白蛋白，旋转反应至少KET抗体标记磁性荧光探针及羊抗鸡IgY抗体标记球用MES缓冲液清洗并重悬，再加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，室温下混旋反应至少7.一种三联毒品荧光免疫检测试剂盒，其特所述试剂纸的NC膜各检测线及质控线在位置上与上卡壳的8.基于权利要求7所述试剂盒对污水中的三种毒品进行荧光免疫检测的方法，其特征（1）每1mL的污水待测样品与0.4µg磁性荧光探针冻干粉混合，25-37°C共孵育至少的免疫复合物及未结合毒品代谢物的磁性荧光探针；去上清液后将回收沉淀重悬于PBS缓34[0001]本发明属于毒品分析检测领域，具体涉及一种三联毒品(甲基苯丙胺MET、吗啡市地下道污水系统中毒品及其代谢物的含量监测能够推算出某种毒品在当地的使用情况。[0007]酶联免疫吸附测定(ELISA)以及胶体金免疫层析法是目前国际上较为认可的主流5抗体标记磁性荧光探针)分别以等量的标记保存液重悬，然后将三种检测探针以体积比1:1:1混匀，最后将三种检测探针的混合溶液与质控探针以9:1的体积[0017]所述标记保存液的配方如下：[0020]优选地，所述各检测线、质控线的间距为3.5mm，KET检测线与吸水垫的距离为6[0031]一种三联毒品荧光免疫检测试剂盒，包括所述的磁性荧光探针冻干粉和/或三联的免疫复合物及未结合毒品代谢物的磁性荧光探针；去上清液后将回收沉淀重悬于PBS缓[0034](2)取待测样本液滴加到三联毒品荧光免疫检测卡点样孔中，层析10-15min后将[0035](3)未结合毒品代谢物的磁性荧光探针截留在各检测线和质控线上，在激发光激[0044](1)灵敏度高：本发明所采用的磁性荧光微球由磁性材料四氧化三铁纳米粒子及特性结合多联检测试纸条定量检测样品中多种待检物质。优化后的试纸条灵敏度可达ng/7[0046](3)检测通量高：本发明多联磁性荧光免疫层析试纸条可实现单次点样同时检测[0047](4)应用场景广：本发明多联磁性荧光免疫层析试纸条不仅可用于对污水中多种于990μlMES缓冲溶液中，振荡混匀后再分别加入10μL10mg/mL的EDC(碳二亚胺)和10μL10mg/mL的NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)，室温下混旋旋转30min；15000rpm离心30min后弃上[0056]所述的磁性荧光微球是按文献(GuoL,ShaoYN,DuanH,etal.MagneticQuantumDotNanobead-BasedFluorescentImmunochromatographicAssayfortheHighlySensitiveDetectionofAflatoxinB-1inDarkSoySauce[J].Analytical[0057](2)抗体标记：向沉淀中加入1000μLMES缓冲液，超声重悬；加入MET抗体(mAb-8[0059](4)磁性荧光微球标记MOR抗体：活化并重悬的磁性荧光微球加入MOR抗体(mAb-性荧光探针、KET抗体标记磁性荧光探针)和质控探针(羊抗鸡IgY抗体标记磁性荧光探针)[0063]所述标记保存液的配方如下：[0064]本发明所使用的三种检测抗体mAb-MET、mAb-MOR、mAb-KET均来自于EastCoast[0072]所述试剂纸3的样品垫2在位置上与上卡壳10的点样孔12重叠，方便操作人员点3检测线与吸水纸边缘的距离为11mm，与质控线的距离91-2mm以确保样品滴加后试纸条能够顺利的完成整个流动过程，制得三联毒品荧光免疫层[0081]一种三联毒品荧光免疫检测试剂盒，包括实施例1所述的磁性荧光探针冻干粉和[0083](1)将1mL的污水待测样品与0.4μg磁性荧光探针冻干粉混合，37℃共孵育至少物形成的免疫复合物及未结合的各磁性荧光探针；去上清液后将免疫复合物重悬于100μ[0084](2)取75μL待测样本液滴加到三联毒品荧光免疫检测卡点样孔中，反应10-15min[0091](2)依次取1mL的各毒品参考品溶液与0.4μg磁性荧光探针冻干粉混合，3[0092](3)依次吸取75μL待测样本液加入三联毒品荧光免疫检测卡点样孔中，于加样代入公式Logit(Y)＝LN[(BX/B0)/(1-BX光探针、KET抗体标记磁性荧光探针)和质控探针(羊抗鸡IgY抗体标记磁性荧光探针)分别实施例3方法检测实际样计算出的结果与文献(CastiglioniS,ZuccatoE,ChiabrandoC,etal.Massspectrometricanalysisofillicitdrugsinwastewaterandsurfacewater[J].MassSpectrometryReviews,2008,27(4):378-394.)方法(液相色谱-质谱串联各20次，将其检测线与质控线的荧光值之比FT/FC的均值X减二倍标准差作为BX代入各试纸条的剂量－反应曲线(即实施例3的