1.2基因工程的基本操作程序省微

解旋以母链为模板进行碱基配对形成的两个新的DNA分子子链母链DNA的复制过程图解ＤＮＡ半保存复制总结：DNA的复制

1、概念：2、时期：3、条件：以亲代DNA为模板合成子代DNA的过程。有丝分裂间期减数第一次分裂间期模板——DNA的每一条母链原料——游离的4种脱氧核苷酸能量——ATP酶——解旋酶、DNA聚合酶等4、过程：5、成果：6、特点：7、意义：总结：解旋、合成子链、形成双链DNA形成2个双链DNA分子（和亲代DNA完全相似）半保存复制边解旋边复制使遗传信息从亲代传给子代，保持了遗传信息的持续性。DNA的平面构造图AGTACAAATTCATGATTA以DNA的一条链为模板合成RNADNA游离的核糖核苷酸AGT

ACAAAT

UUGGACUGCUGAAGT

ACAAAT

AGCUGACGGUUU

DNA与RNA的碱基互补配对：A——U；T——C；C——G；T—ARNA聚合酶AGT

ACAAAT

AGCGACGGUUUU构成RNA的核糖核苷酸一种个连接起来AGT

ACAAAT

GCGACGGUUUUAAGTACAAATGCGACGUGUUAUAGTACAAATGCGACGGUUAUUAG

T

AC

AA

A

T

GGCGGUUAUUAUCAGTACAAATGGCGGUUAUUAUC形成的

mRNA链，DNA上的遗传信息就传递到mRNA上RNADNA转录是在细胞核内进行的，是以DNA双链中的一条为模板，合成mRNA的过程。1、时间：2、场合:3、模板:4、原料:5、条件:6、原则:7、产物:8、实质:个体生长发育的整个过程重要在细胞核中DNA的一条链4种游离的核糖核苷酸酶、ATP碱基互补配对原则：A和UC和G

T和A

G和CmRNADNA转录mRNAmRNAtRNA氨基酸核糖体UCAUGAUUAAAU亮氨酸ACU天门冬氨酸核糖体UCAUGAUUAAAU亮氨酸ACU天门冬氨酸UCAUGAUUAAAU亮氨酸ACU天门冬氨酸AUG异亮氨酸UCAUGAUUAAAU亮氨酸ACU天门冬氨酸AUG异亮氨酸肽键UCAUGAUUAAAU亮氨酸ACU天门冬氨酸AUG异亮氨酸UCAUGAUUAAAU亮氨酸ACU天门冬氨酸AUG异亮氨酸肽键UCAUGAUUAAAU亮氨酸ACU天门冬氨酸AUG异亮氨酸UCAUGAUUAAAUACUAUG亮氨酸天门冬氨酸异亮氨酸2.翻译的概念:以mRNA为模板,合成含有一定氨基酸次序的蛋白质的过程。1.场合：在细胞质3.过程：4步:4.条件:翻译者：转运RNA(tRNA)5.成果：模板：原料：能量：游离的20种氨基酸ATPmRNA肽链总结：遗传信息的翻译肽链加工蛋白质(生命活动的主要承担者）小结当代生物科技专项1.2基因工程的基本

操作程序1.基因工程的最后目的是什么？2.生命活动的重要承当者（或性状的重要体现者）是什么？目的基因的获取基因体现载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测和鉴定基因工程的基本操作程序什么叫基因？基因－－有遗传效应的DNA片段。什么叫遗传效应？

遗传效应－－能转录为mRNA，继而翻译为蛋白质；能转录为核糖体RNA；能转录为转运RNA。什么是目的基因？重要指人们需要获取的，编码蛋白质的基因或含有调控作用的因子。？1、获取目的基因的办法有哪些？2、什么叫基因文库，它涉及哪些种类？3、用PCR技术扩增基因需要哪些原料？1、人工合成2、从基因文库中获取3、运用PCR技术扩增(基因比较小，序列已知)基因文库基因组文库部分基因文库－－如：cDNA文库聚合酶链式反映目的基因的获取途径人工合成法：合用于基因较小，核苷酸序列已知的基因，是最方便的办法。化学合成法：即根据某一蛋白质的氨基酸序列，通过密码子推算出其基因序列，然后直接合成目的基因。即运用DNA合成仪人工合成高温变性中温延伸低温复性PCR加热变性退火复性延伸PCR循环PCR技术PCR反映体系中目的基因成指数(2n)形式扩增细胞内复制.VS.PCR扩增DNA母链4种dNTPTaqDNA聚合酶引物（2个snDNA）温度控制1）模板：2）原料：3）酶：DNA母链4种dNTP解旋酶DNA聚合酶引物酶DNA连接酶DNA增殖4）特点:半保存复制边解旋边复制(不用DNA连接酶)半保存复制全解旋再复制？1、基因体现载体的操作目的是什么？2、基因体现载体涉及哪些必需组分？其作用分别是什么？3、如何进行构建重组载体？二、基因体现载体的构建——基因工程的核心1、目的：所需物质：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且能够遗传给下一代，同时使目的基因能够体现和发挥作用。它们各自的作用是什么?基因体现载体的构建基因表达载体的模式图抗生素抗性基因基因体现除含有目的基因外，还需要下列元件：启动子终止子标记基因启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才干驱动基因转录出mRNA，最后获得蛋白质终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中与否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来对构建基因体现载体的阐明1、形成重组DNA分子的过程中，必修用同一种限制酶切割目的基因和载体。2、目的基因插入载体或者是插入受体细胞的染色体DNA中并不能阐明基因工程操作成功，还要使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且能够遗传给下一代。3、目的基因在受体细胞中体现，产生对应性状的因素是不同生物共用一套遗传密码。4、构成基因体现载体的四部分互相协作，缺一不可，共同维持目的基因的体现。5、基因体现载体即使都由四部分构成，但由于受体细胞不同（动物、植物、微生物），它们也是有差别的。①载体与体现载体的区别：两者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。体现载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分构造②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键③启动子、终止子对于目的基因体现必不可少④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以体现载体的方式携带进去。注意基因体现载体的构建过程质粒DNA分子限制酶解决两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种一种切口两个黏性末端三将目的基因导入受体细胞（一）转化：目的基因进入_________内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程受体细胞稳定体现（二）办法：1.将目的基因导入微生物细胞3）惯使用方法：2）惯用菌：1）微生物作受体细胞因素：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少4）过程：Ca2+解决大肠杆菌感受态细胞体现载体与感受态细胞混合感受态细胞吸取DNA大肠杆菌Ca2+解决2.将目的基因导入植物细胞1）农杆菌转化法①特点:能感染双子叶植物和祼子植物,对单子叶植物无感染能力②过程：Ti质粒的T—DNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上2、将目的基因导入动物细胞①办法：显微注射法②程序：目的基因体现载体提纯取卵（受精卵）显微注射受精卵新性状动物目的基因的检测与鉴定——检查与否成功目的基因的检测和鉴定1.检测1）检测转基因生物染色体的DNA上与否插入了目的基因办法——基因探针：15N15N14N14N探针转基因生物的DNA变性变性DNA分子杂交技术放射性同位素等标记的DNA分子2）检测目的基因与否转录出了mRNA办法——分子杂交技术15