病理科标本处理技术规范与操作规程

病理科标本处理技术规范与操作规程接收标本时需逐项核对送检申请单与标本标识信息，核对内容包括患者姓名、性别、年龄、住院号/门诊号、床号、送检标本部位、标本数量，若申请单信息与标本不符或标本干涸、固定不当，需立即联系送检临床科室退回核对，不得进入后续处理流程，核对无误后将标本信息完整录入病理信息系统，记录送检日期、时间，由接收操作人员签名确认。常规手术标本离体后需在30分钟内放入固定液，固定液选用10%中性缓冲福尔马林，固定液总容量需为标本体积的4-10倍，保证标本完全浸没于固定液中，禁止标本贴靠容器壁，若为体积较大的胃肠切除标本，需沿病灶对侧肠壁剪开，将肠管充分展平后用大头针固定于滤纸板，标记病灶方位后翻转置入固定液，保证病灶切面完全接触固定液，全子宫、乳腺等大标本需沿病灶最大径切开，充分暴露病灶切面，避免病灶挤压变形，需脱钙的骨、钙化标本，固定24小时后将标本修正为0.2-0.3cm厚的薄片，放入5%硝酸脱钙液中，每日更换新鲜脱钙液，直至用不锈钢针可无阻力扎透组织，脱钙完成后用流动清水冲洗15-30分钟，彻底去除残留脱钙液后方可进入取材流程。术中冰冻送检标本禁止预先使用福尔马林固定，接收后立即转运至冰冻取材区，细针穿刺细胞学标本、液基细胞学标本接收后立即置于95%酒精中固定，痰标本需立即涂片后固定。取材操作前需再次核对病理号、患者信息、标本部位与申请单临床提示，肉眼观察标本整体外观，记录标本大小、形状、颜色，测量病灶的大小、数目，观察病灶的形态、边界、包膜情况，记录切面性状，明确病灶与周围正常组织、手术切缘的位置关系，按照规范取材：内镜活检标本全部组织包埋，每块活检组织单独放置，体积过小的标本用标记滤纸包裹后装入包埋盒，避免丢失，不同部位的小标本如宫颈多点活检、分段诊刮标本需分别编号、分开包埋，不得混放；肿瘤切除标本需常规取材肿瘤主体、肿瘤与正常组织交界区、肿瘤远近端手术切缘，肿瘤侵犯最深层面的组织需单独取材，清扫的淋巴结需按照解剖分组全部取材，每组单独包埋并标记分组部位，手术切缘需垂直切缘取材，充分显示切缘与病灶的距离；所有取材组织块大小统一为1.5cm×1.5cm，厚度不超过0.3cm，保证后续脱水浸蜡充分，每更换一份标本需彻底擦拭取材刀、清理取材台残留组织碎屑，避免交叉污染，取材完成后剩余标本需放回原固定容器，添加足量固定液后置于4℃冰箱保存，常规标本剩余组织保留至病理报告发出后2周，疑难病例、需后续加做检测的标本保留至所有检测完成后方可处置。脱水透明浸蜡流程采用全自动脱水机处理，常规程序设置为：70%乙醇15分钟、80%乙醇15分钟、95%乙醇Ⅰ10分钟、95%乙醇Ⅱ10分钟、无水乙醇Ⅰ10分钟、无水乙醇Ⅱ10分钟、二甲苯Ⅰ5分钟、二甲苯Ⅱ5分钟、石蜡Ⅰ10分钟、石蜡Ⅱ15分钟，浸蜡温度控制在60℃-62℃，温度不得超过65℃，避免组织发脆脆变，脱水机试剂每处理500块组织更换一次，若试剂出现浑浊、沉淀需提前更换，每日操作完成后清理脱水机舱内残留组织残渣，避免堵塞管路。包埋操作时需再次核对包埋盒与病理号，确认无误后操作，包埋石蜡温度控制比浸蜡温度高1℃-2℃，保证石蜡完全融化，组织块的最大切面朝下平整放置于包埋模具底部，小块活检组织放置于包埋模具中央，多个小组织排列整齐，间距均匀，方便后续切片，囊壁、皮肤组织需竖直包埋，完整显示组织层次，骨组织脱钙后将硬组织层面朝向包埋底部，方便切片，包埋完成后将蜡块置于室温冷却30分钟或4℃冷却15分钟，待石蜡完全凝固后取出蜡块，修整蜡块边缘多余石蜡，暴露组织边缘，在蜡块侧面清晰标注病理号。切片操作前将修整好的蜡块置于冰台冷却10-15分钟，使蜡块充分变硬，切片选用锋利的一次性刀片，连续切片厚度控制在3μm-4μm，免疫组化、特殊染色切片厚度控制在2μm-3μm，切出完整无皱褶、无刀痕的连续切片后，置于42℃-45℃的恒温水浴箱中展片，待切片完全展平无褶皱后，用粘附载玻片从水中垂直捞起，使组织位于玻片中央区域，捞片后标注对应病理号，将玻片置于60℃烤片机烘烤2小时，或37℃恒温箱烘烤过夜，保证切片粘附牢固，避免染色过程脱片。HE染色流程为：二甲苯Ⅰ脱蜡5分钟、二甲苯Ⅱ脱蜡5分钟，无水乙醇Ⅰ洗去二甲苯1分钟、无水乙醇Ⅱ1分钟、95%乙醇1分钟、80%乙醇1分钟，流动清水冲洗1分钟，Harris苏木素染液染色5-8分钟，流动清水冲去玻片表面多余染液，1%盐酸酒精分化3-5秒，至核质对比清晰后立即停止，流动温水冲洗返蓝10-15分钟，镜下确认核染色深浅合适后，0.5%伊红染液染色2-5分钟，流动清水稍洗去除多余染液，依次经80%乙醇、95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ各脱水1分钟，二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各透明2分钟，中性树胶封片，封片时避免产生气泡，树胶涂抹均匀，擦去玻片边缘多余树胶，染色后保证细胞核呈清晰蓝紫色，细胞质、胶原纤维呈粉红色，红细胞呈鲜红色，核质对比清晰，无染色混浊。术中冰冻切片处理流程为：接收标本后即刻取材，选取病灶最具代表性的区域，修整为1.5cm×1.5cm×0.2cm大小的组织块，放置于冰冻冻头，滴加OCT包埋剂，移入冰冻切片机冷冻舱，温度设置为-20℃至-15℃，冷冻5分钟后切片，切片厚度控制在5μm-6μm，捞片后即刻放入95%酒精固定1分钟，随后行快速HE染色，30分钟内完成制片发出初步诊断。细胞学标本处理中，痰、胸腹水等新鲜标本需立即涂片，95%酒精固定15分钟后行HE或巴氏染色，液基细胞学标本按照试剂说明书离心处理，制备薄层涂片后固定