病原微生物基因检测技师考试试卷及答案

病原微生物基因检测技师考试试卷及答案病原微生物基因检测技师考试试卷及答案一、填空题（10题，每题1分）1.PCR反应的基本步骤包括变性、______、延伸。答案：退火（复性）2.核酸提取中消化蛋白质的常用酶是______。答案：蛋白酶K3.实时荧光定量PCR的荧光探针类型包括TaqMan和______。答案：SYBRGreenI（或分子信标）4.细菌16SrRNA基因检测常用于______鉴定。答案：菌种（细菌种类）5.核酸电泳的常用指示剂是______。答案：溴化乙锭（EB）或核酸染料6.Taq酶的核心特点是具有______活性。答案：热稳定（耐高温）7.引物Tm值一般控制在______℃范围。答案：55-658.RNA样本长期保存温度为______℃。答案：-809.qPCR的Ct值是荧光信号达到______时的循环数。答案：阈值10.人类样本常用内参基因是______。答案：β-actin（或GAPDH）二、单项选择题（10题，每题2分）1.病原微生物基因检测常用方法是（）A.ELISAB.qPCRC.血常规D.镜检答案：B2.酚氯仿法不用于（）A.裂解细胞B.去蛋白C.沉淀核酸D.灭活酶答案：C3.SYBRGreenI结合的是（）A.单链DNAB.双链DNAC.RNAD.蛋白答案：B4.不适合基因检测的样本是（）A.血液B.甲醛固定组织C.痰液D.粪便答案：B5.dNTP在PCR中的作用是（）A.模板B.引物C.合成原料D.酶答案：C6.靶基因选保守区的目的是（）A.提高灵敏度B.覆盖多菌株C.降成本D.缩时间答案：B7.RT-PCR需加入（）A.Taq酶B.逆转录酶C.内切酶D.连接酶答案：B8.Ct值与模板浓度呈（）A.正相关B.负相关C.无关D.不确定答案：B9.防RNA降解需加（）A.DNase抑制剂B.RNase抑制剂C.蛋白酶KD.乙醇答案：B10.绝对定量的方法是（）A.常规PCRB.qPCRC.数字PCRD.电泳答案：C三、多项选择题（10题，每题2分，多选/少选不得分）1.基因检测样本类型包括（）A.血液B.脑脊液C.粪便D.尿液答案：ABCD2.PCR体系成分包括（）A.模板B.引物C.Taq酶D.dNTP答案：ABCD3.qPCR技术包括（）A.TaqManB.SYBRGreenIC.分子信标D.焦磷酸测序答案：ABC4.假阳性原因包括（）A.样本污染B.引物非特异C.核酸降解D.抑制物残留答案：AB5.核酸提取方法包括（）A.酚氯仿法B.磁珠法C.硅胶膜法D.煮沸法答案：ABCD6.病原靶基因包括（）A.16SrRNA（细菌）B.衣壳蛋白（病毒）C.β-actin（人类）D.内毒素基因（细菌）答案：ABD7.qPCR临床应用包括（）A.载量检测B.耐药基因C.感染诊断D.疗效监测答案：ABCD8.引物设计原则（）A.特异性高B.Tm值相近C.无发夹D.18-25bp答案：ABCD9.数字PCR优点（）A.无标准曲线B.绝对定量C.高灵敏度D.高通量答案：ABC10.内参基因作用（）A.监测提取B.排除抑制物C.判断样本合格D.提高特异答案：ABC四、判断题（10题，每题2分，√/×）1.qPCR可同时检测多种病原（）答案：√2.乙醇沉淀可浓缩核酸（）答案：√3.引物越长特异性越高（）答案：×4.RNA需避免反复冻融（）答案：√5.常规PCR可定量（）答案：×6.TaqMan探针5’端是报告基团（）答案：√7.甲醛固定组织可用于基因检测（）答案：×8.内参可判断抑制物存在（）答案：√9.Ct值越小载量越高（）答案：√10.数字PCR灵敏度比qPCR高（）答案：√五、简答题（4题，每题5分）1.简述核酸提取基本步骤答案：①样本裂解：用含去污剂、蛋白酶K的裂解液破坏细胞，释放核酸；②去杂质：酚氯仿抽提/磁珠吸附去除蛋白、多糖；③纯化：乙醇洗涤残留杂质；④洗脱：用无酶水/TE溶解核酸，得到模板。2.简述Ct值定义及临床意义答案：Ct值是荧光信号达阈值时的循环数，与初始模板浓度负相关。意义：①定量载量（Ct小=载量高）；②辅助诊断感染；③监测疗效（Ct升高=载量下降）；④判断预后（低Ct提示病情重）。3.引物设计注意事项答案：①特异性：与靶基因互补，避免非靶结合；②Tm值：引物对差≤5℃，55-65℃；③长度：18-25bp；④结构：无自身发夹、引物二聚体；⑤位置：位于保守区，覆盖多菌株。4.RNA样本保存方法答案：①短期（<1周）：-20℃；②长期（>1周）：-80℃/液氮；③注意：无酶耗材、加RNA稳定剂、避免反复冻融、干冰运输。六、讨论题（2题，每题5分）1.如何避免假阴性？答案：假阴性原因：样本采集不当、核酸降解、抑制物、引物不佳。应对：①规范采样（深部痰、抗凝全血）；②提取加内参监测；③优化引物/探针，加UNG防污染；④设置阳/阴性对照；⑤定期校准仪器。2.qPCR与数字PCR差异答案：①定量：