《微生物检验技术培训课程》课件-需氧和兼性厌氧革兰氏阳性杆菌检验

需氧和兼性厌氧革兰氏阳性杆菌检验AEROBICANDFACULTATIVEANAEROBICGRAMPOSITIVEBACTERIATEST需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验白喉棒状杆菌炭疽芽胞杆菌产单核李斯特菌白喉棒状杆菌第一节白喉棒状杆菌形态与染色菌体直或微弯，一端或两端膨大G+杆菌。无鞭毛、荚膜和芽胞。排列不规则，呈X、L、V字形，栅栏状。有异染颗粒（形态学鉴定意义）。异染颗粒染色第一节白喉棒状杆菌培养特性需氧或兼性厌氧，最适生长温度35℃，pH7.2~7.8。营养要求高，采用吕氏血清斜面，生长迅速，涂片染色形态典型，有异染颗粒。亚碲[dì]酸钾血琼脂平板。还原碲元素，形成黑色菌落二、临床意义致病物质白喉外毒素：抗原性强，毒性强烈，甲醛脱毒后作为疫苗。传染源和途径传染源：人是唯一宿主，白喉患者、带菌者。通过飞沫、污染物品和食品传播。患者咽喉部黏膜形成灰白色假膜锡克试验(Schicktest)检测人体对白喉棒状杆菌的免疫力原理：白喉毒素与抗毒素中和反应。方法：受试者皮内注射少量白喉外毒素。结果：48小时观察局部皮肤反应。无红肿阴性反应体内有抗毒素，有免疫力。有红肿阳性反应体内无抗毒素，无免疫力。三、微生物学常规检验1.标本采集：无菌棉拭子采集患者疑为假膜边缘分泌物。带菌者采集鼻咽部或扁桃体黏膜分泌物。2.直接涂片染色：革兰染色和异染颗粒染色。检出具有异染颗粒的革兰氏阳性杆菌初步报告三、微生物学常规检验3.分离培养与鉴定鉴定要点：①G+，菌体细长，弯曲，一端或两端膨大，呈V、X、栅栏状排列，有异染颗粒；②吕氏血清斜面细小灰白的菌落，亚碲酸钾血平板有黑色菌落；③触酶和硝酸盐试验+、脲酶-、分解葡萄糖和麦芽糖产酸不产气。黑色菌落灰白色菌落灰白色

无溶血环亚碲酸钾血平板吕氏血清斜面血平板标本37℃48h37℃48h37℃4~12h挑取可疑菌落进行鉴定三、微生物学常规检验4.Elek平板毒力试验：无毒株不出现沉淀线，有毒株有沉淀线ElekTest沉淀线（阳性）含白喉抗毒素滤纸片白喉杆菌菌苔产生外毒素扩散观察在接种线两侧距滤纸条约1cm处有无与接种线呈45°角的白色沉淀线出现。有沉淀者，白喉杆菌毒力试验阳性，该菌株产生白喉外毒素；无沉淀线者，白喉杆菌毒力试验阴性，该菌株不产生白喉外毒素。第二节炭疽芽胞杆菌形态与染色致病菌中最大的G+杆菌，菌体两端截平，无鞭毛，呈竹节状排列；芽胞椭圆形小于菌体，位于中央。第二节炭疽芽胞杆菌培养特性需氧或兼性厌氧，30~35℃，pH7.0~7.4。营养要求不高，普通琼脂平板呈干燥型菌落，低倍镜下边缘呈卷发状（重要鉴别特征）。生化反应液化明胶：沿穿刺线扩散生长，使明胶表面液化成漏斗状或沿穿刺线生长呈倒松树状。抵抗力芽胞抵抗力很强，如在干燥土壤和毛皮中。一旦牧场被污染，传染性可维持十年以上。（细菌战，炭疽邮件案）。高压蒸汽灭菌可杀死芽孢，对碘和氧化剂较敏感。二、临床意义传染源和途径传染源：患病的食草动物，如牛、马、羊等。通过直接或间接接触含有芽胞的皮革、肉类、奶制品或气溶胶。所致疾病：根据传播途径分类，皮肤炭疽、肺炭疽、肠炭疽。三、微生物学常规检验标本采集：两点原则抗生素治疗之前采集标本。严禁室外尸解获得标本，所需血液和组织标本均以穿刺方式获得。检验方法涂片染色：G染色、荚膜染色、芽胞染色—初步报告。核酸检测：核酸杂交。分离培养：2%兔血清肉汤增菌→分离培养；BAP、戊烷脒多粘菌素B平板。明显荚膜，两端截平呈竹节状G+大细菌，芽孢椭圆形位于菌体中央三、微生物学常规检验鉴定试验：形态和菌落特征；生化试验三、微生物学常规检验串珠试验：将待测菌接种于含0.05~0.5U/ml青霉素的培养基37℃6h，炭疽杆菌细胞壁合成抑制，变成大而均匀的圆球形，呈串珠链状生长。串珠试验—较高鉴别价值串珠和青霉素抑制联合试验第三节产单核李斯特菌G+短小杆菌，单个、双或短链排列，无芽胞，一般不形成荚膜。在含血清的葡萄糖蛋白胨水中形成荚膜。有1~5根鞭毛，在湿片中呈翻筋斗运动。革兰染色鞭毛染色第三节产单核李斯特菌培养特性需氧或兼性厌氧，营养要求不高。最适温度30~37℃，但4℃仍能生长，又称冷增菌。冷增菌（左）和对照（右，大肠杆菌）第三节产单核李斯特菌血平板：灰白色菌落，β溶血环第三节产单核李斯特菌食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一。第三节产单核李斯特菌临床意义传染途径：粪-口途径肠道感染，胎盘和产道传给新生儿。所致疾病：流产、败血症、脑膜炎。第三节产单核李斯特菌微生物学常规检验血液、脑脊液、分泌物、脓液、尿液、羊水G+球杆形，无芽孢和荚