《化妆品 温和刺激性实验（斑马鱼）实验方法》

团体标准

标准编号：

化妆品温和刺激性实验（斑马鱼）实验方法

xxxx-xx-xx发布xxxx-xx-xx实施

XXXX发布

目次

前言..........................................................3

化妆品温和刺激性实验（斑马鱼）实验方法.....................7

1.范围......................................................4

2.定义......................................................4

3.规范性引用文件............................................4

4.检测原理..................................................4

5.实验材料与试剂............................................4

5.1.材料..................................................4

5.2.试剂..................................................4

5.3.对照品....................................错误！未定义书签。

6.实验仪器与设备............................................5

7.实验步骤..................................................5

7.1.实验准备..............................................5

7.2.样品处理..............................................5

7.3.对照组溶液............................................5

7.4.实验方法..............................................6

8.结果计算..................................................6

9.质量控制..................................................7

前言

本标准按照GB/T1.1-2020给出规则起草。

本标准提出和归口：

本标准起草单位：

本标准主要起草人：

1.范围

本标准规定了化妆品温和刺激性检测斑马鱼鱼胚实验的实验原理、实验准

备、实验方法、实验结果和实验报告。

本标准适用于评价液态水基类化妆品原料及其产品温和刺激性检测。

2.定义

hourspost-fertilization（hpf）：受精后小时数

3.规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅

注日期的版本适用于本文件，凡不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所

有的修改单）适用于本文件。

化妆品安全技术规范（2015版）

4.检测原理

受试样品配置成溶液孵育鱼胚至24h，在体式显微镜下观察并记录（拍照

和视频）鱼胚的摆动次数、鱼胚死亡（凝结）数量。

5.实验材料与试剂

5.1.材料

5.1.1.斑马鱼交配盒

5.1.2.鱼胚收集器

5.1.3.细胞培养板：6孔细胞培养板

5.2.试剂

5.2.1.十二烷基硫酸钠（SDS）标准储备溶液（5mg/mL）：称取十二烷基硫酸

钠（SDS）标准品50mg（精确至0.01mg），用斑马鱼系统养殖水溶解

并定容至10mL容量瓶，于4℃保存。

5.2.2.十二烷基硫酸钠（SDS）标准储备溶液（1mg/mL）：称取十二烷基硫酸

钠（SDS）标准品10mg（精确至0.01mg），用斑马鱼系统养殖水溶解

并定容至10mL容量瓶，于4℃保存。

5.2.3.十二烷基硫酸钠（SDS）标准储备溶液（0.1mg/mL）：称取十二烷基硫

酸钠（SDS）标准品1mg（精确至0.01mg），用斑马鱼系统养殖水溶解

并定容至10mL容量瓶，于4℃保存。

6.实验仪器与设备

6.1.斑马鱼养殖系统

6.2.连续变倍体式显微镜（带拍照功能）

6.3.恒温培养箱

6.4.天平：精密度0.00001g

6.5.软件：SPSS统计分析软件

7.实验步骤

7.1.实验准备

7.1.1.鱼胚品系：野生型AB系斑马鱼自然交配的胚胎；

7.1.2.鱼胚要求：以斑马鱼开始交配受精为0hpf，选用46~56hpf健康、无畸

形、正常发育的鱼胚用于实验；

7.1.2.1.胚胎刺激反应的表现形式为：刺激摆动，死亡（凝结）等。

7.1.3.鱼胚孵育温度：28±1℃；

7.2.样品处理

7.2.1.水溶性样品：使用斑马鱼系统养殖水将受试样品稀释成0.01、0.1、1、

10、100%实验浓度，混匀，放置4℃保存备用。

7.3.对照组溶液

7.3.1.空白对照组：斑马鱼系统养殖水

7.3.2.阳性对照组：十二烷基硫酸钠（SDS）标准储备溶液（5、1

和0.1mg/mL）

7.4.实验方法

随机挑选46~56hpf健康、无畸形、正常发育的鱼胚用于实验。使用6孔

细胞培养板为实验载体，每孔加入鱼胚20枚，实验溶液5mL。另设空白对照

和阳性对照组，每个浓度设置3个平行组。在体式显微镜下观察，并记录鱼胚

的刺激摆动，死亡（凝结）数量。

8.结果计算

8.1.统计并计算鱼胚的刺激摆动，死亡（凝结）数量。跟据终点反应

对刺激性等级进行评分分类。

终点反应终点评分刺激性分类评价指标

D=0.0%；

D＜50%与空白对照组无显著性差

-无刺激性异；

W＜空白对照组且与空白对照组

无显著性差异

D＜50%（与空白对照组有显著性

差异）；

鱼胚+轻微刺激性

W＜空白对照组且与空白对照组

（死亡或凝结率)和/

无显著性差异

或(摆尾次数)

D＞50%（与D=50%组无显著性差

（D和/或W）

异）；

++轻度刺激性

W与空白对照/阳性对照相比有显

著性差异

D=50.0%；

D＞50%（与阳性对照组有显著性

+++中度刺激性

差异）；

W与空白对照组/阳性对照相比有

显著性差异

D=100.0%；

D＞50%（与阳性对照组无显著性

++++强刺激性差异）；

W与空白对照/阳性对照相比有显