T∕GDPPS 038-2026 格斯特乳白蚁检疫鉴定方法

ICS65.020.01CCSB16T/GDPPS038—2026格斯特乳白蚁检疫鉴定方法InspectionandidentificationofCoptotermesgestroi（Wasmann，1896）2026‑01‑14发布2026‑01‑14实施广东省植物保护学会发布ⅠT/GDPPS038—2026前言 Ⅲ1范围 12规范性引用文件 13术语和定义 14基本信息 25方法原理 26仪器、器具和试剂 27现场检测 38形态学特征鉴定 39分子序列特征鉴定 410结果判定 411标本保存方法和保存期限 5附录A（资料性）格斯特乳白蚁其他信息 6附录B（资料性）格斯特乳白蚁形态特征 7附录C（资料性）格斯特乳白蚁体部量度 9附录D（资料性）格斯特乳白蚁线粒体分子标记16SrRNA基因片段和COII基因的序列 11附录E（规范性）格斯特乳白蚁线粒体分子标记16SrRNA基因片段和COII基因的特征性序列 12参考文献 13ⅢT/GDPPS038—2026本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由广东省植物保护学会提出并归口。本文件起草单位：广东省科学院动物研究所。1T/GDPPS038—2026格斯特乳白蚁检疫鉴定方法本文件规定了格斯特乳白蚁Coptotermesgestroi（Wasmann，1896）的现场检测、实验室形态学鉴定、分子生物学鉴定和样品保存的方法。本文件适用于格斯特乳白蚁的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T28104—2011小楹白蚁检疫鉴定方法SN/T1105—2019大家白蚁检疫鉴定方法3术语和定义GB/T28104—2011和SN/T1105—2019界定的以及下列术语和定义适用于本文件。头壳背面在头盖缝的横、纵缝汇合处呈凹下或突起的部分，是额腺的开口处。［来源：SN/T1105—2019，2.1］后颏postmentum在白蚁等某些咀嚼式口器的类群中，由亚颏和颏两部分组成的下唇的基部区域。［来源：GB/T28104—2011，2.1］头长至上颚基（头长不连上颚）lengthofheadwithoutmandible上颚基部关节处至头后缘的长度。头宽widthofhead在工蚁和兵蚁是指头部最宽处的宽度，在有翅成虫是指包括复眼在内的头宽度。后颏中长medianlengthofpostmentum头部腹面向上且水平放置时，后颏前缘中部至后缘中部中纵线段的长度。后颏狭（后颏最小宽度）minimumwidthofpostmentum头部腹面向上且水平放置时，后颏两侧最窄处的宽度。2T/GDPPS038—2026前胸背板中长medianlengthofpronotum前胸背板背面向上且水平放置时，其前缘中部至后缘中部中纵线段的长度。前翅或后翅关节基部至翅肩缝之间的直线距离（即翅鳞的最大长度）。分飞季节白蚁成熟群体产生有翅成虫时，在蚁巢上方或附近地面、树干或木材表面出现的一种由泥土堆积而成的临时结构。蚁巢外表层及附近分布的一些微小而隐蔽的，具有调节巢内温度和湿度的作用的小孔。4基本信息中文名：格斯特乳白蚁。哈维兰乳白蚁CoptotermeshavilandiHolmgren，1911；爪哇乳白蚁CoptotermesjavanicusKemner，1934；勐仑乳白蚁CoptotermesmenglunensisTsaietHuang，1985；斜孔乳白蚁CoptotermesobliquusXiaetHe，1986；崖县乳白蚁Coptotermesyaxian格斯特乳白蚁是一种土木栖性白蚁，主要分布于热带、亚热带地区，可为害城市房屋建筑。其分布和传播途径见附录A。5方法原理现场经肉眼和放大镜检测发现为疑似格斯特乳白蚁的标本，通过体视显微镜观察，以兵蚁的形态特征作为主要依据，以有翅成虫的形态特征为参考，进行形态学检疫鉴定，并通过分子生物学方法对标本的线粒体16SrRNA和COII序列进行比对分析，以确保形态学检疫鉴定的准确性。6仪器、器具和试剂心机、PCR仪、紫外分析仪、电泳仪、DNA测序仪。3T/GDPPS038—20266.3主要试剂75%乙醇，无水乙醇，基因组DNA提取试剂盒，蒸馏水，PremixTaq，ddH2O，引物（见表1）。表1引物序列基因名称方向序列参考文献扩增片段长度COIIC2F2正向5′-ATACCTCGACGWTATTCAGA-3′约1070bpCOIITKN3785反向5′-GTTTAAGAGACCAGTACTTG-3′16SrRNALR-J-13007正向5′-TTACGCTGTTATCCCTAA-3′Simonetal.，1994；Kamb-hampati&Smith，1995约430bp16SrRNALR-N-13398反向5′-CGCCTGTTTATCAAAAACAT-3′7现场检测首先检查木材表面及与外界接触的部位有无明显的蚁路、泥被、通气孔、分飞孔及活动的白蚁等外露危害迹象。若检疫物为带树皮的原木，还需用树皮铲或螺丝刀掀开树皮，观察树皮内侧和木质部表层是否有白蚁危害状或虫体。其次用解锥敲打检疫物表面，听取内部是否有空洞回声。若有异常声响，应撬开空洞或用锯子、小斧头等工具进行剖木检查，必要时取样带回实验室内。另外，装载检疫物的运输工具也需要仔细检查是否有白蚁活动迹象或虫体。发现的白蚁虫体可用具柔韧弹性的软镊子小心夹取放入指形管或离心管内，也可用细毛笔将白蚁及其排泄物碎屑、木屑、土壤等一起拨入培养皿内。现场采集的样品须附上寄主名、产地、数量、采集人、送检人等信息，及时送实验室检疫鉴定。8形态学特征鉴定8.1乳白蚁属鉴定兵蚁特征如下：a）头部：卵形，前端明显变狭；囟为大型孔口，位于头前端，呈短管延出，朝向前方；上颚细而弯曲，除基部的矩形缺刻外，内缘光滑无齿；上唇长大于宽，端部收缩变窄；b）触角：13节~17节；有翅成虫特征如下：a）头部：宽卵形，后唇基极短而平，囟位于头中部；b）触角：18节~25节；c）前胸背板：扁平，狭于头部；4T/GDPPS038—2026d）翅：翅面具毛，翅脉有极浅淡的网状纹；前翅鳞大于后翅鳞且覆盖于后翅鳞之上；前翅中脉由肩缝处独立伸出，后翅中脉由径分脉基部分出，中脉距肘脉极近。8.2格斯特乳白蚁鉴定兵蚁特征如下：a）体色：活体或新鲜标本头部灰黄至深黄色，上唇褐黄色，上颚红褐色，触角淡褐色，前胸背板淡褐色，且淡于头色，足和腹部淡色；b）毛被：头部被毛情况见附录B中图B.1，即囟孔两侧各具1根明显刚毛，触角窝与囟孔间无毛；前胸背板中区几无毛；c）头部形状：见图B.1，长卵圆形，长大于宽，中部最宽；d）囟孔：宽卵形至近圆形，背面观能见孔口；e）上唇和上颚：上唇窄尖形，长大于宽，尖端透明，窄而短；上颚军刀状，颚端中度弯曲，左上颚基半部具4个小齿突和1个颚基突起；f）后颏：后颏长，其长为最宽部的2.5倍，前缘宽为后缘宽的1.5倍，最宽部与后缘间收窄为腰形；g）触角：见图B.1，14节~15节，第2节长于第3节，第3节、第4节长度近乎相等；h）前胸背板：见图B.1，宽超过长的2倍，前缘中央凹入明显，后缘中部稍凹，侧缘宽圆形；j）体部重要测量指标：见附录C中表C.1。有翅成虫特征如下：a）体色：活体或新鲜标本头部、前胸背板和腹部背面深褐色，触角黄褐色；b）头部：见图B.2，近圆形，两单眼前方内侧半月形淡色触角斑清晰可见；c）复眼和单眼：复眼近圆形，突出；单眼长卵形，显著；d）触角：19节~21节，第3节、第4节较e）前胸背板：略宽于头部，前后缘中部稍凹，四角匀圆；f）翅：见图B.2，透明，淡黄褐色；翅面密布细短毛；前翅中脉（M）在肩缝处独立伸出，距肘脉（Cu）近于距径分脉（RsCu脉约有11个~12个分支；g）体部重要测量指标：见表C.2。9分子序列特征鉴定使用基因组DNA提取试剂盒对待检测标本进行DNA提取，电泳检测质检合格的样本用于PCR反应。PCR扩增引物序列见表1。反应体系总体积50μL，其中模板溶液2μL（含50ngDNA上下游引物各2μL（10μMPremixTaq25μL。反应条件为：972℃延伸30s，共31个循环；循环结束后42℃延伸10min。扩增产物电泳检测后进行纯化、双向测序。10结果判定10.1形态学方法以兵蚁形态学鉴定特征为主要依据，有翅成虫特征为参考，观察测量3头或3头以上标本，符合8.25T/GDPPS038—2026可鉴定为格斯特乳白蚁。10.2分子生物学方法10.2.1线粒体16SrRNA基因片段长度约430bp（见附录D中表D.1具2段特征性序列（符合附录E中表E.1使用序列比对分析软件进行多重序列比较，同种不同种群之间遗传分歧为0%~0.80%，与乳白蚁属其他种之间遗传分歧为1.80%~7.00%。10.2.2线粒体COII基因长度约680bp（见表D.1具3段特征性序列（符合表E.2使用序列比对分析软件进行多重序列比较，同种不同种群之间遗传分歧为0%~1.43%，与乳白蚁属其他种之间遗传分歧为4.4%~11.5%。实验重复2次或2次以上，结果符合10.2.1或10.2.2的可鉴定为格斯特乳白蚁。若同时使用形态学方法和分子生物学方法鉴定，二者出现分歧时，以分子生物学方法的鉴定结果为准。11标本保存方法和保存期限11.1保存方法标本保存时需包含以下信息：编号、中文名、拉丁学名、货物来源、寄主、采集时间、采集地点及采集人。用于形态学鉴定的标本需浸泡于75%乙醇中，-20℃冰箱保存。用于分子生物学鉴定的标本需浸泡于无水乙醇中，-40℃或-70℃冰箱保存。取样时一次取够量，尽量避免多次反复冻融，以减少DNA降解。11.2保存期限定期更换乙醇（每年1次可使标本长期保存。6T/GDPPS038—2026附录A（资料性）格斯特乳白蚁其他信息A.1分布格斯特乳白蚁最早描述于采自缅甸的标本，目前报道分布于以下国家和地区（Krishnaetal.，2013——非洲区：马达加斯加、毛里求斯；——新北区：美国；——新热带区：安提瓜、巴巴多斯、巴西、开曼群岛、古巴、大特克岛和普罗维登西亚莱斯岛、牙买加、墨西哥、梦塞拉特岛、波多黎各；——澳洲区：法属波利尼西亚。A.2传播途径格斯特乳白蚁易于通过原木、枕木、木制品、木质包装材料等被人为携带而远距离传播。7T/GDPPS038—2026附录B（资料性）格斯特乳白蚁形态特征兵蚁形态特征见图B.1，有翅成虫形态特征见图B.2。图B.1格斯特乳白蚁兵蚁特征（A—头部背面；B—头部腹面；C—头部侧面；D—囟孔；E—触角；F—胸部背板）8T/GDPPS038—2026图B.2格斯特乳白蚁有翅成虫特征（引自Scheffrahn&Su，2008）（A—头部；B—右前翅）9T/GDPPS038—2026附录C（资料性）格斯特乳白蚁体部量度兵蚁测量值见表C.1，有翅成虫测量值见表C.2。表C.1不同地点格斯特乳白蚁兵蚁测量值单位为毫米项目分布地原产地中国传入地参考文献参考文献（黄复生等，2000；Tsai&Chen，2003）头长至上颚基1.12~1.531.24~1.54头最宽0.95~1.501.06~1.32头在颚基宽0.46~0.780.64~0.80头高（至后颏）0.80~0.850.80~1.00左上颚长0.90~0.980.80~1.05上唇长0.26~0.430.30~0.43上唇宽0.23~0.340.20~0.35后颏中长0.67~1.150.72~1.10最宽0.33~0.450.35~0.44最狭0.18~0.280.22~0.31前胸背板最长0.27~0.500.39~0.53最宽0.64~1.060.76~0.97后胫长—0.90~1.14表C.2格斯特乳白蚁有翅成虫测量值*单位为毫米项目分布地（原产地）泰国、马来西亚（Kirton&Brown，2003）触角节数20~23单眼长0.13~0.18单眼宽0.10~0.13复眼长0.39~0.46复眼宽0.34~0.40T/GDPPS038—2026表C.2格斯特乳白蚁有翅成虫测量值*（续）项目分布地（原产地）泰国、马来西亚（Kirton&Brown，2003）单复眼间距0.00~0.03复眼至头下缘距离0.08~0.14头最大高度0.50~0.71头最宽1.34~1.53头宽（不连复眼）1.15~1.44头在颚基宽0.96~1.08头至上唇端长1.34~1.66前胸背板宽1.10~1.44前胸背板最长0.76~0.94前翅长连翅鳞8.70~10.55后胫长1.20~1.38*中国传入地未见有翅成虫量度值的文献报道。T/GDPPS038—2026附录D（资料性）格斯特乳白蚁线粒体分子标记16SrRNA基因片段和COII基因的序列格斯特乳白蚁线粒体分子标记16SrRNA基因片段和COII基因的序列见表D.1。表D.1格斯特乳白蚁线粒体分子标记16SrRNA基因片段和COII基因的序列分子标记碱基序列序列长度bp16SrRNA基因片段TAACGCTGTTATCCCTAAGGTAATTTAGTCTTATAATCAAAATAAATGGATCAAACAATTATAAATCAATATAACCAAAACTAAGAGGAGTTAAGTACATTCCTCCCATCACCCCAACAAAACAAAAAGCCCACTCACCAAAAATAAACAAACAACAAACAAGTAAATAAACCAAATGTCAAACTCTATAGGGTCTTCTCGTCCCACAAAAACATCTAAGAATTTTAACTCAAAGACCAAATTCAATAAAACATTCAACACTAAGACAGCCCGTGCCTCGTCAAGCCATTCATTCCAGATCACAATTAAAGAACTAATGATTATGCTACCTTTGCACGGTCAAAATACCGCGGCCCTTCAACACCAAATGTCAGCGGGCAGGCCATACTTCAAAAACTAACAAGAAAAGATGTTTTTGTTAAACAGGCG约430COII基因ATGACAACATGATTAAACATAAGACTACAAGATGGAGCGTCCCCCATTATAGAACAATTAGTCTTCTTTCACGACCATGTGCTAATAATTATACTAATAATTACAACAACCGTATCATACATAATAATTACCCTAATCCGAAATAAACAAACAAGACGATTCATACTAGAAGGACAAATAATCGAAACCACATGAACCATCGCACCAGCAATCATCCTTGTATTCATCGCCATACCGTCTCTACGACTTCTATACCTAATAGACGAAGTTCACAACCCAACACTAACACTAAAAGCAGTTGGGCACCAATGATATTGAAGTTATGAGTATTCAGACTTTACTAAACTAGAATTTGACTCATACATAATTCCTCAAGAAGAACAACAAGAAAGAACATTCCGACTACTAGACACAGACAACCGAATCGTTCTACCAATAAACTCACCAATTCGACTAATTGTAACAGCAGCAGACGTCCTACACTCATGAACTATCCCAAGACTGGGGGTAAAAACAGATGCCACGCCAGGACGATTAAACCAAACAAGATTCTCAATTAGCCGTCCTGGCATCTTATATGGACAATGTTCAGAAATTTGCGGGGCAAACCACAGATTCATACCCATCACAATTGAGAGAGTACCAGCAAAATACTTTATTAACTGAGTTTCAAAGATAAGAGAAT约680T/GDPPS038—2026附录E（规范性）格斯特乳白蚁线粒体分子标记16SrRNA基因片段和COII基因的特征性序列16SrRNA基因片段特征性序列见表E.1，COII基因特征性序列见表E.2。表E.1格斯特乳白蚁线粒体16SrRNA基因片段特征性序列序列编号特征序列序列长度bpCG16S_1TTATAAATCAATATAACCAAAACTAAGAGGAGTTAAGTAC40CG16S_2CCCACTCACCAAAAATAAACAAACAACAAACAAGT35表E.2格斯特乳白蚁线粒体COII基因特征性序列序列编号特征序列序列长度bpCGCOII_1TCACGACCATGTGCTAATAATTATACTAATAATTACAACAACCGTATCATACATAATAATTACCC65CGCO