T∕FSBMEA 0005-2026 山茶油中儿茶素、表儿茶素的测定 高效液相色谱法

ICS71.100.70CCSY42FSBMEADeterminationofcatechinandepicatechincontentincamelliaoil—HighperformanceIT/FSBMEA0005—2026前言 2规范性引用文件 3术语和定义 4原理 5试剂和材料 5.1试剂 5.2溶液配制 5.3标准品 5.4标准溶液配制 25.5材料 26仪器和设备 27样品 28试验步骤 28.1提取 28.2净化 28.3标准曲线的制备 28.4测定 28.5空白试验 39试验数据处理 310方法灵敏度、准确度和精密度 310.1灵敏度 310.2准确度 310.3精密度 3附录A（资料性）儿茶素、表儿茶素混合标准溶液色谱图 4T/FSBMEA0005—2026本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由佛山市生物医学工程学会提出并归口。本文件起草单位：佛山市食品药品检验检测中心、珠海市食品药品检验所、江门市药品检验所、佛山大学、从江神瑶保健品有限公司。本文件主要起草人：张艳萍、陈艺华、郭智聪、黄婉锋、周宗洲、廖素媚、黄少宏、杨安平、杨再宏。1T/FSBMEA0005—2026山茶油中儿茶素、表儿茶素的测定高效液相色谱法本文件给出了山茶油中儿茶素、表儿茶素的高效液相色谱测定的原理，规定了山茶油中儿茶素、表儿茶素的高效液相色谱测定的试剂和材料、仪器和设备、样品、试验步骤、试验数据处理、方法灵敏度、准确度和精密度。本文件适用于山茶油中儿茶素、表儿茶素的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1山茶油camelliaoil从山茶科油茶（Camelliaoleifera）成熟种子中榨取的脂肪油。4原理样品经正己烷提取，提取液经固相萃取净化后，采用高效液相色谱仪检测，外标法定量。5试剂和材料5.1试剂5.1.1除非另有规定，仅使用分析纯试剂。5.1.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。5.1.3乙酸（CH3COOH）：色谱纯。5.1.4正己烷（C6H14）。5.1.5乙酸乙酯（CH3COOCH2CH3）。5.1.6水（H2O）：GB/T6682，一级。5.2溶液配制5.2.1乙酸溶液（0.2%）：取乙酸（5.1.3）2mL用水稀释至1000mL，混匀。5.2.2乙酸乙酯—正己烷（1:9）溶液：取乙酸乙酯（5.1.5）10mL，用正己烷（5.1.4）稀释至100mL，混匀。5.2.350%甲醇溶液：取甲醇（5.1.2）50mL，用水稀释至100mL，混匀。5.3标准品5.3.1儿茶素（C15H14O6，CAS号：154-23-4）。5.3.2表儿茶素（C15H14O6，CAS号：490-46-0）。2T/FSBMEA0005—20265.4标准溶液配制标准储备溶液：准确称取表儿茶素、儿茶素适量（精确至0.0001g），用甲醇溶解，配制成浓度为500µg/mL的标准储备溶液，4℃保存，有效期6个月。5.5材料5.5.1固相萃取柱：填料为二醇基化合物，500mg/6mL，或性能相当者。5.5.2微孔滤膜：孔径0.45μm，有机系。6仪器和设备6.1高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。6.2分析天平：感量0.0001g和0.00001g。6.3固相萃取装置。6.4涡旋混合器。6.5水浴锅。6.6玻璃试管：10mL；25mL。6.7蒸发皿：30mL。7样品冷榨、热榨等不同加工工艺生产的山茶油。8试验步骤8.1提取精密称取2.5g山茶油（精确至0.001g）于25mL玻璃试管中，加入8mL正己烷，在涡旋混合器上振荡2min，混匀，备用。8.2净化固相萃取柱依次用甲醇5mL、正己烷5mL活化，将8.1备用液全部过柱，再依次用正己烷5mL和乙酸乙酯—正己烷（1:9）溶液5mL洗涤，抽干后用洗脱液甲醇8mL洗脱，收集洗脱液于10mL玻璃试管，将洗脱液转入蒸发皿，置于8℃水浴中蒸干有机溶剂，残渣加入2mL50%甲醇溶液，搅拌溶解，过0.45μm微孔滤膜，供高效液相色谱仪测定。8.3标准曲线的制备分别准确移取儿茶素、表儿茶素标准储备溶液适量，用初始流动相稀释并制成浓度为0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的系列标准溶液，供高效液相色谱仪测定。以测得的峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。8.4测定8.4.1色谱条件色谱条件为：a)色谱柱：C18色谱柱（250mm×4.6mm，粒径5μm），或相当者；b)流动相：A为甲醇（5.1.2），B为0.2%乙酸溶液（5.2.1），梯度洗脱程序见表1；c)流速：1.0mL/min；d)检测波长：280nm；e)柱温：室温；f)进样量：10μL。3T/FSBMEA0005—2026表1流动相梯度洗脱程序A%B%058.4.2测定法取试样溶液（8.2）和标准溶液（8.3），作单点或多点校准，按外标法以峰面积定量。标准溶液及试样溶液中儿茶素、表儿茶素峰面积应在仪器检测的线性范围之内，在上述色谱条件下，混合标准工作液（5μg/mL）色谱图见附录A。8.5空白试验除不加试样外，均按上述测定步骤进行。9试验数据处理试样中待测物的含量以质量分数X计，单位为毫克每千克（mg/kg），按公式（1）计算，结果保留两位有效数字。cs×m×1000式中：X——试样中儿茶素/表儿茶素的数值，单位为毫克每千克（mg/kg）；A——试样中儿茶素/表儿茶素色谱峰面积；CS——标准工作液中儿茶素/表儿茶素的质量浓度，单位为微克每毫升(μg/mL）；AS——标准工作液中儿茶素/表儿茶素峰面积；V——试样定容体积，单位为毫升（mL）；M——试样取样量，单位为克（g）；1000——换算系数。10方法灵敏度、准确度和精密度10.1灵敏度本方法儿茶素、表儿茶素检测限为0.10mg/kg；定量限为0.20mg/kg。10.2准确度儿茶素、表儿茶素在0.2mg/kg～2.0mg/kg添加浓度的回