天蚕素对大口黑鲈脑神经递质相关基因及酶类的影响研究

天蚕素对大口黑鲈脑神经递质相关基因及酶类的影响研究摘要：天蚕素（Cecropins）是从昆虫体内分离出的动物抗菌肽，由30余个氨基酸构成，拥有独特双螺旋结构。它不仅对革兰氏阳性菌及部分阴性菌有显著杀伤作用，且有研究表明对鱼类的抗菌抗病也有一定影响。为了探究天蚕素对大口黑鲈脑神经递质相关基因及酶类的影响，本研究选取实验室饲养的同一批体重相近的健康大口黑鲈共48尾，共设置1个对照组和3个处理组，处理组饲料中添加的天蚕素浓度分别为L（50mg/kg）、M（100mg/kg）、H（150mg/kg），处理时间为50d。采用荧光定量PCR测定Grik1和RNF38基因，使用生化试剂盒测量AChE、GDH和LDH酶。实时定量PCR检测结果表明，与对照组相比，天蚕素处理组大口黑鲈脑组织中Grik1和RNF38基因的表达量均有显著变化。其中，Grik1基因在M和H组天蚕素处理组表达量显著升高（P<0.05），RNF38基因在H处理组表达量也显著升高（P<0.05）。生化试剂盒检测结果显示，与对照组相比，L组AChE活性无显著变化，而M和H组AChE活性显著降低（P<0.05）；GDH和LDH在L组活性无显著变化，在M组GDH活性有降低趋势，但未达到显著水平，LDH活性在M和H组均无显著变化。综上所述，饲料中添加天蚕素的浓度在M（100mg/L）和H（150mg/kg）时可显著影响大口黑鲈脑神经递质相关基因的表达，并对AChE活性产生抑制作用，表明天蚕素对大口黑鲈神经系统具有潜在的调节作用。关键词：天蚕素；大口黑鲈；脑；神经递质StudyontheEffectsofCecropinonNeurotransmitter-RelatedGenesandEnzymesintheBrainofMicropterussalmoidesABSTRACT:Cecropinsareanimalantimicrobialpeptidesisolatedfrominsects,composedofover30aminoacidswithauniquedouble-helicalstructure.TheyexhibitsignificantbactericidaleffectsnotonlyagainstGram-positivebacteriaandsomeGram-negativebacteria,butstudieshavealsoshowntheyexertcertaininfluencesonantibacterialanddiseaseresistanceinfish.ToinvestigatetheimpactofCecropinsonneurotransmitter-relatedgenesandenzymesinthebrainofMicropterussalmoides,thisstudyselected48healthymicropterussalmoidesofsimilarbodyweightfromthesamelaboratorybatch.Thefishweredividedintoonecontrolgroupandthreetreatmentgroups,withCecropinsaddedtothefeedatconcentrationsofL(50mg/kg),M(100mg/kg),andH(150mg/kg),respectively.Thetreatmentdurationwas50days.FluorescentquantitativePCRwasusedtodeterminetheGrik1andRNF38genes,andbiochemicalkitswereemployedtomeasureAChE,GDH,andLDHenzymes.Thereal-timequantitativePCRresultsshowedthatcomparedwiththecontrolgroup,theexpressionlevelsofGrik1andRNF38genesinthebraintissueoflargemouthbasstreatedwithcecropinexhibitedsignificantchanges.Real-timequantitativePCRresultsrevealedsignificantchangesintheexpressionlevelsofGrik1andRNF38genesinthebraintissuesoftheCecropins-treatedgroupscomparedtothecontrolgroup.Specifically,theexpressionoftheGrik1genesignificantlyincreasedintheMandHtreatmentgroups(P<0.05),whiletheRNF38genealsoshowedasignificantupregulationintheHtreatmentgroup(P<0.05).ELISAresultsindicatedthat,comparedtothecontrolgroup,AChEactivityintheLgroupdidnotchangesignificantly,whereasitsignificantlydecreasedintheMandHgroups(P<0.05).ForGDHandLDH,nosignificantchangeswereobservedintheLgroup.IntheMgroup,GDHactivityexhibitedadecreasingtrendbutdidnotreachstatisticalsignificance,whileLDHactivityremainedunchangedinboththeMandHgroups.Insummary,theadditionofCecropinstofeedatconcentrationsofM(100mg/kg)andH(150mg/kg)significantlyinfluencedtheexpressionofneurotransmitter-relatedgenesinthebrainofmicropterussalmoidesandexertedinhibitoryeffectsonAChEactivity.ThesefindingssuggestthatCecropinsmayhavepotentialregulatoryeffectsonthenervoussystemofmicropterussalmoides.KEYWORDS:Cecropin;Micropterussalmoides;Brain;Neurotransmitter目录TOC\o"1-3"\h\u132971前言 159211.1研究背景 1122441.1.1天蚕素 132991.1.2大口黑鲈 1303201.1.3鱼类脑神经递质相关基因 253891.2研究意义 2202452材料与方法 2103252.1大口黑鲈饲喂试验 2275832.2样品的采集与处理 2175242.3生化试剂盒实验制备 2246182.3.1乙酰胆碱酯酶（AchE）测定 2121542.3.2谷氨酸脱氢酶（GDH）测定 3241612.3.3乳酸脱氢酶（LDH）测定 3119292.4总RNA的提取和cDNA的合成 3196722.5实时荧光定量PCR（qRT-PCR） 452082.6数据分析与整理 4108383结果 5269573.1不同浓度天蚕素对大口黑鲈脑神经递质相关酶类影响 556953.2不同浓度天蚕素对大口黑鲈脑神经递质相关基因影响 5194164讨论 6184165结论 718030参考文献 822100致谢 101前言1.1研究背景1.1.1天蚕素天蚕素（Cecropin）是1980年由波曼REF_Ref22139\r\h[1]等科学家从天蚕蛹中成功分离出来的一类最早被发现、研究较为明确、具有广谱抗菌活性、对多种细菌和病毒均有抑制作用的抗菌肽REF_Ref22139\r\h[1]。这种源于蚕丝，具有抗菌、抗炎、抗病毒等多种生物活性的肽类物质可以促进伤口愈合REF_Ref7882\r\h[2]。CecropinP1也是1989年由Lee等人从猪小肠中分离得到的REF_Ref7973\r\h[3]，这一发现暗示了动物世界中可能存在广泛的天蚕素分布REF_Ref7973\r\h[3]。近年来，鱼病防治普遍重视使用天蚕素。研究结果表示，天蚕素抗菌肽B（CecropinB）对多种鱼类致病菌，如嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌等有较强的抑制作用REF_Ref22780\r\h[4]。另外，天蚕素抗菌肽对鱼类的存活率和抗病性都有显著的改善作用。如王自蕊REF_Ref22838\r\h[5]等研究人员发现，通过注射嗜水气单胞菌活菌液在湘云鲫的鳍部，添加了天蚕素抗菌肽B的组分比对照组存活率更高REF_Ref10061\r\h[6]。在被维氏气单胞菌感染的鱼类中，林鑫等人添加了天蚕素抗菌肽B，结果发现锦鲤的累积死亡率明显降低了REF_Ref10061\r\h[6]。除此之外，对多种鱼类病毒性疾病有抑制作用的还有天蚕素抗菌肽B，LoJH等发现，天蚕素抗菌肽B对感染性造血坏死病毒（IHNV）、病毒性出血性败血病病毒（VHSV）REF_Ref10061\r\h[6]等重要鱼类病毒性病原体的入侵有明显的抑制作用。这些研究结果都传递了一个信息，天蚕素抗菌肽在防治鱼类疾病方面有很广阔的利用空间。现代研究普遍认为，抗菌肽是抗菌素的潜在替代品之一，作为其中研究较为透彻的一类，天蚕素（Cecropin）已经引起了广泛的重视。天蚕素的化学结构通常由31至39个氨基酸残基组成，而由其组成的天蚕素类多肽类抗生素其N端呈现强碱性，可形成双亲螺旋结构REF_Ref10130\r\h[7]，而C端则形成疏水螺旋，两者之间的铰接区含有甘氨酸和脯氨酸REF_Ref10152\r\h[8]，而大部分多肽的C端都被酰胺化REF_Ref10175\r\h[9]，对于天蚕素的抗菌活性来说，这种酰胺化结构是必不可少的。1.1.2大口黑鲈大口黑鲈（Micropterussalmoides）是一种起源于北美洲的淡水鱼类，在20世纪80年代引入中国，凭借其自身显著优势，在中国迅速跻身为淡水养殖的重要特色鱼类REF_Ref24223\r\h[10]。其适温性广REF_Ref25013\r\h[11]、生长速度快、肉质鲜美紧实，且无肌间刺，适宜加工，深受消费者青睐，市场需求旺盛。在2023年，我国大口黑鲈产量高达90.12万吨，养殖规模与产量呈现逐年上升的良好态势，产业发展潜力巨大REF_Ref24971\r\h[12]。大口黑鲈是一种具有独特生物学特征的鱼类。作为一种变温动物REF_Ref25167\r\h[13]，大口黑鲈在温水中代谢率更高，春季常迁移至15-18℃的温暖水域栖息。日常活动呈现出明显的昼夜节律REF_Ref27211\r\h[14]，白天偏好于睡莲叶下或树荫下休憩，夜晚则活跃觅食，且通常在小于2.5米的低水域进行捕食活动，觅食结束后又会游向较深水域休息。其繁殖方面，属于“一妻多夫”的多配制，性成熟与体重关联紧密REF_Ref26868\r\h[15]。发情期特征明显。在营养代谢学、繁殖生物学REF_Ref27280\r\h[16]、遗传学等多个领域的研究中，鉴于大口鲈鱼在中国水产养殖业中的重要地位，以及其丰富的生物学特性，已成为研究的重要对象。对其深入探究，有助于解决当前产业面临的种质资源退化、病害多发等问题，推动大口黑鲈产业的可持续、高质量发展。1.1.3鱼类脑神经递质相关基因神经系统是其生命活动的核心调控系统，负责感知外界环境、协调身体各部分的活动以及维持正常的生理功能。中枢神经系统的重要组成部分是大脑，其主要职能是对各类神经信号进行加工与整合。研究表明，研究表明，天蚕素可以通过调节5-HT的合成和代谢相关基因的表达来影响鱼类的行为和生理功能REF_Ref27923\r\h[17]。例如，天蚕素能够显著上调5-HT合成酶（TPH）基因的表达REF_Ref27959\r\h[18]，从而增加5-HT的合成。此外，天蚕素还可通过调节5-HT转运体（SERT）基因的表达，进而影响突触间隙中5-HT的浓度，从而调节5-HT的再摄取过程。鉴于此，本试验研究了其对大口黑鲈脑神经递质相关基因及酶类的影响，通过添加不同浓度天蚕素来揭露大口黑鲈鱼脑神经递质有关基因。1.2研究意义本文以大口黑鲈为研究对象，对大口黑鲈脑神经递质的相关基因表达及酶类的影响，通过添加不同浓度的用天蚕素饲料，对不同浓度天蚕素的作用机理进行研究，以探究了解大口黑鲈中天蚕素对大口黑鲈的神经递质相关基因的表达及对酶类的影响。2材料与方法2.1大口黑鲈饲喂试验试验用鱼大口黑鲈，为山西农业大学水产科学系实验室所养殖。在测试开始前，在装有120升曝气水的玻璃鱼缸中暂时饲养大口黑鲈鱼，以降低压力反应。试验设1个对照组、3个处理组，分别为0mg·L-1对照组、50mg·L-1处理组、100mg·L-1处理组和150mg·L-1处理组，饲喂50d。每组包含12条鱼，分别放入四个水族箱中。每天上午9时、下午5时饲喂各对应饲料，饲喂量为鱼缸中所有鱼重量的3%（取样前1d停止饲喂）。日常饲养所用的是经过24h曝气的自来水，光照与黑暗的比例设定为14h:10h（光/暗），pH范围控制在7.2，水温范围在（25±2）℃。每天下午更换鱼缸中1/2的水，并加入等量的水，换水时清理食物饵料残渣和排泄物，以保证鱼缸中的水质、水温一致。2.2样品的采集与处理在饲喂试验结束后，每组去除最大重量和最小重量的大口黑鲈鱼，测量剩余样品生理指标，包括体长和重量。随后提取脑部组织，迅速用液氮冷冻，并储存在-20℃的环境下以备后续使用。2.3生化试剂盒实验制备2.3.1乙酰胆碱酯酶（AchE）测定将大口黑鲈脑组织清洗、匀浆后，置于裂解液中。保持匀浆低温，离心后取上清液作为样本。后续步骤需严格遵循AchE检测套装的操作指南进行：实验开始前，将药剂盒放置在室温中平衡30分钟。取酶标板，样品孔加50μl待测样品，设置标准品孔和零度孔，分别加50μl稀释后的标准品和标准品/样品稀释液。各孔加50μlBiolin抗原工液，摇匀后封板，37℃孵育30分钟。孵育后弃液，清洗5次，拍干。再加50μl亲和素-HRP工作液，重复37℃孵育30分钟，清洗5次。每孔加50μl显色剂A和B，37℃避光显色10分钟，加50μl终止液，反应结束。在450nm波长下，以空白孔调零，测定各孔吸光度(OD值)，10分钟内完成。根据OD值和标准曲线计算待测样本中AchE含量。2.3.2谷氨酸脱氢酶（GDH）测定样本制备：取新鲜的大口黑鲈脑组织，迅速分离出脑神经组织。在pH=7.4的PBS缓冲液中按1g:9ml的比例加入，用手工或匀浆器充分搅拌，使组织细胞破碎。然后在2000-3000rpm条件下将匀浆液离心20分钟，小心将上清液收集起来，即为待测样品。如果不能马上检测，需要将样本放在-20℃的范围内保存，但要避免反复冻融。试剂准备：从“GDH检测试剂盒”取试剂，室温平衡30分钟。制备工作液：将25倍浓缩洗涤液稀释定容至500ml。配制标准品原液：加150μl稀释液至标准品干粉，混合30秒。依次稀释制备不同浓度标准品溶液。配制工作液：稀释生物素抗原和亲和素-HRP，一周内使用。检测操作：设置空白孔、标准品孔、0孔、样品孔。空白孔加显色剂A、B和终止液。标准品孔加50μl稀释后的标准品和50μl生物素抗原工液。0孔加50μl稀释液和50μl生物素抗原工液。样品孔加50μl试样和50μl生物素抗原工液。孵育30分钟后洗板，加50μl亲和素HRP，再孵育30分钟，重复洗板。加显色剂A、B，显色10分钟后加终止液。结果计算：调整空白孔为零点，用酶标仪测OD值，推断GDH浓度。结果计算：在加完终止液后10分钟内，在450nm的波长下，用酶标仪对每个孔位的吸光度(OD值)进行测量，以空白孔调零。然后在大口黑鲈脑神经递质中得到GDH的含量。2.3.3乳酸脱氢酶（LDH）测定将大口黑鲈脑组织冲洗干净后，放入裂解液中匀浆，离心后收集清液作为待测样本。根据试剂盒说明书，进行LDH测定：试剂盒在室温下静置30分钟后，向酶标板的测定孔加入16µl样本，标准孔加16µl丙酮酸钠溶液，空白孔加20µl双蒸水。各孔加20µl试剂一，摇匀后37℃孵育15分钟。加入4µl试剂二，再孵育15分钟。接着加20µl试剂三，继续孵育15分钟。最后加200µl试剂四，摇匀后室温静置5分钟。用酶标仪在440nm波长下测量各组吸光度。利用所测得的吸光度以及标准曲线，推算出待检测样本中LDH的浓度。2.4总RNA的提取和cDNA的合成将脑组织从-80℃的冰箱中取出置于冰块上，Trizol一步法提取RNA，用1%琼脂糖凝胶电泳检测脑组织RNA完整性，测定浓度与OD值，使用的仪器为分光光度计（OD值范围在1.8-2.1为正常）。测定结果正常后，每份组织的RNA样本取5µl，进行反转录，合成cDNA。为保证后续试验可以顺利进行，我们需要将得到的cDNA模板保存于-80℃环境中。2.5实时荧光定量PCR（qRT-PCR）使用PrimerPremier5.0软件，依据Grik1、RNF38基因的mRNA序列，设计特异性引物，同时选取β-actin作为内参基因引物。引物设计遵循以下原则：引物长度18-25bp，GC含量40%-60%，Tm值在58-62℃之间，避免引物二聚体及发夹结构形成。由上海生物工程有限公司合成设计完成的引物序列。使用标准PCR验证设计的引物以确保其特异性。PCR反应体系（20µl）包括：2µlcDNA模板，10µlTaqPCRMasterMix，各0.5µl上下游引物，以及7µl无菌无酶水。反应程序为：95℃预变性3分钟；95℃变性30秒，58℃退火30秒，72℃延伸30秒，共35个循环；最后72℃延伸5分钟。接着95℃变性30秒，58℃退火30秒，72℃延伸30秒，循环35次；最终72℃延伸5分钟。PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，用照胶仪观察胶图，目的条带明确单一，且无杂带，则表明引物序列设计得当。使用TBPremixExTaq™Ⅱ（TliRNaseHPlus）试剂盒进行实时荧光定量PCR实验。该试剂盒内含所需的TaqDNA聚合酶、dNTPs、反应缓冲液等配以荧光染料SYBRGreenI,用于荧光信号检测，每个实验组设置3个生物学重复，PCR反应体系总量为15µl。具体组成如下：根据反应体系，在冰上准备混合试剂，用移液枪准确加入八连管。向每管加1µlcDNA模板，加样后立即盖上管盖，短时离心（3000rpm，1min）确保混合均匀。将八管放入实时荧光定量PCR设备。依照下列实验步骤执行扩增反应：预变性：95℃，30s；40个循环：95℃，5s，60℃，30s（采集荧光信号）；熔解曲线分析：95℃，15s；60℃，1min；95℃，15s。2.6数据分析与整理使用实时荧光定量PCR仪器配套软件收集原始数据，获取每个样本的Ct值（循环阈值）。运用2＾-ΔΔCt法来确定Grik1和RNF38基因的表达相对水平。具体步骤如下：计算目的基因与内参基因的ΔCt值（ΔCt=Ct目的基因-Ctβ-actin）；计算实验组与对照组的ΔΔCt值（ΔΔCt=ΔCt实验组-ΔCt对照组）；计算相对表达量，公式为2＾-ΔΔCt。在处理qPCR数据时，我们使用了SPSS24.0和GraphPadPrism等统计软件。通过单因素方差分析（One-wayANOVA）来评估数据间的统计学差异，并采用Duncan检验法进行多重比较。在本研究中，P值<0.05被认为具有显著差异，P值<0.01则表示存在极显著差异，而P值>0.05则表示无显著差异。此外，我们使用GraphPadPrism8.0软件生成统计分析图表，并以柱状图的形式展示基因相对表达水平的结果。（引物序列见表1）基因引物序列（5’-3’）M.s-Grik1F：AGCACGCAAGCCAGCATTR：GCGGAACAGGTCGGCATTAM.s-RNF38F：TAAAGTCTGGCTGGTTCTCGTAAR：CTCATCATCCAAAAGAGGTCGTM.s-β-actinF：AGCCTTCCTTCCTTGGTATGGAATR：TGTTGGCGTACAGGTCCTTACG表SEQ表\*ARABIC1大口黑鲈基因引物合成序列Table1:PrimersynthesissequencesforMicropterussalmoidesgenes3结果3.1不同浓度天蚕素对大口黑鲈脑神经递质相关酶类影响采用生化试剂盒对经50d喂食不同浓度天蚕素的样本进行检测，对大口黑鲈脑神经递质相关酶类（AChE、GDH和LDH）活性的影响可以看出，对照组大口黑鲈脑组织中AChE、GDH和LDH酶活性处于基础水平。经50mg·L-1天蚕素处理后，AChE活性略有下降，但无显著变化；GDH和LDH活性变化不明显。发现在100mg·L-1天蚕素饲喂处理下的大口黑鲈，AChE活性显著下降（P<0.05），GDH活性呈现下降态势，虽未达到统计学显著性，而LDH活性则未观察到明显差异。而在150mg·L-1天蚕素处理组，AChE和GDH活性均显著降低（P<0.05），LDH活性仍无显著变化。这表明天蚕素对大口黑鲈脑内AChE和GDH酶活性具有显著的抑制作用，且这种抑制作用在一定浓度范围内随着浓度增加而增强，但对LDH酶活性的影响REF_Ref4643\h图1不同浓度天蚕素对大口黑鲈脑中神经递质相关酶类表达的影响Figure1:Effectsofdifferentconcentrationsofcecropinontheexpressionofneurotransmitter-relatedenzymesinthebrainofMicropterussalmoides.3.2不同浓度天蚕素对大口黑鲈脑神经递质相关基因影响通过使用实时定量PCR技术检测天蚕素不同浓度处理对大口黑鲈脑神经递质相关基因（Grik1和RNF38）表达的影响。研究揭示，在未处理的大口黑鲈脑组织中，Grik1和RNF38基因的表达量相对较低且保持稳定。经50mg·L-1天蚕素处理后，Grik1基因表达量略有上升，但变化不显著；RNF38基因表达量同样无显著变化。而在100mg·L-1天蚕素处理组，Grik1基因表达量显著升高（P<0.05），RNF38基因表达量也开始出现上升趋势；到了150mg·L-1天蚕素处理组，Grik1和RNF38基因表达量均显著升高（P<0.05），尤其是Grik1基因，其表达量随着天蚕素浓度的增加呈现明显的剂量依赖性上升趋势。这表明天蚕素能够显著影响大口黑鲈脑神经递质相关基因的表达，且这种影响在一定浓度范围内具有浓度依赖性。图2不同浓度天蚕素对大口黑鲈脑中神经递质相关基因表达的影响Figure2:Effectsofdifferentconcentrationsofcecropinontheexpressionofneurotransmitter-relatedgenesinthebrainofMicropterussalmoides.4讨论作为鱼类神经系统与免疫功能调节的核心器官之一，大脑聚集了一系列紧密关联神经递质代谢过程及信号传导机制的酶类，例如，AChE、GDH、LDHREF_Ref11276\r\h[19]。这些酶类在保障神经系统正常运作、信息传递及细胞代谢等方面扮演着关键角色。乙酰胆碱酯酶（AChE）通过分解乙酰胆碱来调控神经信号的传输，其活性的波动会直接影响到神经元间的信息传递效率REF_Ref18527\r\h[20]。不仅GDH在谷氨酸的代谢中扮演着核心角色，而且谷氨酸也是中枢神经系统内关键的兴奋性神经递质之一。因此可以推测AChE、GDH、LDH在维持鱼类神经系统的健康和功能方面扮演着不可或缺的角色。本试验结果表明，在50mg·L-1天蚕素处理时，大口黑鲈脑组织中AChE、GDH、LDH活性相较于对照组变化不显著。在100mg·L-1天蚕素处理时，AChE活性显著降低（P<0.05），表明天蚕素在100mg·L-1应用浓度时可能开始抑制乙酰胆碱的代谢，这表明天蚕素对乙酰胆碱可能具有一定的增强信号效应。GDH活性在100mg·L-1天蚕素处理时虽然表现出下降的趋势，但变化并不显著。结果表明，天蚕素可能对谷氨酸代谢有一些影响，但是需要更高的浓度或者更长的作用时间才表现出来。LDH活性在100mg·L-1天蚕素处理时无显著变化，表明天蚕素在100mg·L-1应用浓度时对细胞能量代谢的影响不明显。总之，这些发现可能有助于进一步阐明不同浓度天蚕素对大口黑鲈神经递质代谢及细胞功能的影响。结果表明，高低不同的天蚕素浓度对大口黑鲈脑神经递质酶存在显著影响，天蚕素可以显著抑制AChE和GDH活性，且对LDH活性无显著影响，表明天蚕素可能通过影响神经递质代谢及信号传递，发挥其神经保护和免疫调节作用；该实验结果或将为天蚕素在水产养殖中的早日应用提供部分可行依据。5结论本次试验结果表明，100mg·L-1和150mg·L-1天蚕素会显著影响大口黑鲈脑内神经递质相关酶类活性，进而调节神经信号传递。参考文献BomanHG,etal.Cell-freeimmunityininsects[J].Nature,1981,292(5820):246-248.LiY,etal.Antimicrobialpeptides:structures,functionsandapplications[J].Protein&Cell,2017,8(1):31-48.​LeeWJ,etal.Aporcineantibacterialpeptidewithsequencesimilaritytocecropins[J].FEBSletters,1989,256(1-2):111-114.​WangX,etal.Antimicrobialpeptides:apromisingalternativetotraditionalantibiotics[J].FrontiersinMicrobiology,2016,7:951.王自蕊,谯仕彦,李波,等.饲料中添加天蚕素抗菌肽对湘云鲫生长性能、非特异性免疫功能及抗病力的影响[J].动物营养学报,2014,26(7):1856-1863.罗阳瑞,王晗,代奉林,等.天蚕素抗菌肽B在鱼类疾病控制中的应用[J].中国兽医杂志,2020,56(03):83-85+139.HuH,WangC,GuoX,etal.Broadactivityagainstporcinebac-terialpathogensdisplayedbytwoinsectantimicrobialpeptidesmoricinandCecropinB[J].Moleculesandcells,2013,35(2):106-114.WangJ,MaK,RuanM,etal.AnovelCecropinB-derivedpep-tidewithantibacterialandpotentialanti-inflammatoryproperties[J].Peerj,2018,6:e5369.AnderssonM,etal.StructureandfunctionofcecropinA(1-8)-magainin2(1-12)hybridsinrelationtoantibacterialactivity[J].EuropeanJournalofBiochemistry,1999,266(1):264-272.杨淞,等.大口黑鲈养殖生物学及养殖技术研