（正式版）DB41∕T 2171-2021 《牛妊娠诊断技术规程》

41河南省市场监督管理局发布I 2 2 5 9本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定1牛妊娠诊断技术规程本文件规定了直肠检查、超声波诊断、妊娠相关糖蛋白（pregnancy-associatedglycoproteins,PAGs）检测等牛妊娠诊断方法的操作技术规程。母牛妊娠后胎盘的滋养层双核细胞与子宫上皮细胞融合后释放的一种蛋白。一般最早可在妊娠4.1动物准备4.2人员准备4.3排空蓄粪2操作人员直检手手指并拢，以45°~60°角缓慢进入直肠，排空蓄粪。4.4确定子宫颈位置4.5妊娠诊断跟踪大小变化情况，从而确定母牛是否妊娠。妊娠期牛子宫变化应符合附录A的规4.6检查结束5.1动物准备5.4开机自检按设备要求进行预热，根据B超仪屏幕影像质量调节灰度、对比度、增益度及近场、远场5.5获取影像妊娠状况进行适当调整，紧贴子宫不断缓慢移动调整探查角度，直至清晰影像出现。5.6妊娠诊断5.7检查结束3采集配种28d后牛只血液并分离血清。采样、运输过程应符合NY用包被液将牛PAGs单克隆抗体稀释至工作浓度，加入酶标板孔中，每35ng），在2℃~8℃放置12h。每孔加入200μL的封闭液，置37℃孵育1h。按6.3.3规定操作。每孔加入50μL样品缓冲液。分别将100μL标准品（A～F）和样品加入到相荡混匀。覆膜，37℃孵育60min或室温（18℃~25℃)孵育90min。孵育后洗板，甩尽酶标板内液体，每孔加300μL洗涤液覆膜，37℃避光孵育60min或室温（18℃~25℃)避光孵育90min。每孔加100μL底物溶液。勿覆膜，室温（18℃~25℃)避光孵育30min。40.99。根据样品的OD值利用标准曲线计算出样被检牛只PAGs检测浓度＞1000pg/mL时，结果判断为妊娠；PAGs检测浓度＜300断为空怀状态；300pg/mL≤PAGs检测浓度≤1000pg/mL时，结果判断为高风险，存5(规范性)直肠检查法不同妊娠时期牛子宫变化示例A.1未孕牛子宫卵巢均位于骨盆腔内，2个子宫角大小相等，形状相似，弯曲如绵羊角状，角间沟清楚明显。触诊子宫有弹性，子宫角有收缩反应。卵巢上无妊娠黄体。A.2.1初期：子宫变化不大，子宫壁有弹性，孕角侧卵巢上有突出于卵巢表面的黄体，同时观察是否返情。A.2.21个月：孕角增厚变粗，不收缩，有弹性，孕角内有液体波动。空角收缩，有弹性，弯曲明显，角间沟清楚。图A.1妊娠1个月子宫情况示例A.2.32个月：角间沟不清楚，分岔明显，子宫角、卵巢向腹腔沉入，孕角比空角大一倍，子宫角壁软而薄，有波动。图A.2妊娠2个月子宫情况示例A.2.43个月：角间沟消失，子宫颈移至耻骨前缘，孕角有明显波动，有胎动。孕侧子宫中动脉开始出现较弱孕脉。6图A.3妊娠3个月子宫情况示例A.2.54个月：子宫沉入腹腔，可清楚摸到子叶，体积稍小于卵巢(如黄豆大小),孕侧子宫中动脉较清楚。A.2.65个月：两侧卵巢全沉入腹腔，不能或只能摸到子宫的一部分，子叶更大(如蚕豆大小),孕侧子宫中动脉明显，非孕侧出现孕脉。A.2.76个月：胎儿进入腹腔，子叶更大(如鸽子蛋大小),子宫中动脉粗大，孕脉明显。A.2.87个月：子叶如核桃大，两侧子宫中动脉均明显。A.2.98个月：子叶更大，两侧中动脉孕脉显著,胎儿上移。A.2.109个月：前置部分进入骨盆入口，两侧子宫动脉有显著孕脉。7(规范性)牛配后各时期B型超声波子宫切面示例出现一个或多个规则的孕囊暗区或者胎儿骨骼影像即可确认为早孕阳性(图B.2),否则为早孕阴图B.4妊娠第30d8图B.5妊娠第32d图B.7妊娠第59d图B.6妊娠第43d图B.8妊娠第66d将下列试剂按次序加入1000mL规格的容器中，加入800mL蒸馏水充分溶解或1mol/L氢氧化钠（NaOH）调节至pH7包被液为碳酸盐缓冲液（0.025mol/L，pH9.