临床微生物实验室血培养操作标准课件

临床微生物实验室血培养操作标准仅供学习交流使用适用范围与术语定义适用范围与术语定义标本采集标本运送与接收流程1血培养检出微生物的临床意义判断结果报告规范质量控制与安全防护实验室检测234导管相关血流感染5678血培养标准：适用范围与核心术语适用范围界定全流程技术规范要求标准规定了血培养标本采集和运送、实验室检测、结果报告、质量评价和改进等技术要求。适用机构与检测范畴标准适用于医疗机构临床实验室开展血培养及相关的血流感染病原学检测。关键核心术语解析血流感染(BSI)由病原微生物侵入血流导致的感染性疾病。脓毒症(Sepsis)因感染引起的宿主反应失调导致的危及生命的器官功能障碍。核心术语详解卫星血培养在微生物实验室以外，如急诊检验科和/或临床科室设立血培养系统，保证标本在规定时间内上机培养，以满足血培养的质量要求。导管相关血流感染(CRBSI)植入血管内的导管（如外周静脉导管、中心静脉导管、动脉导管等）相关的血流感染，是留置血管导管期间及拔除血管导管后48h内发生的原发性且与其他部位感染无关的感染。一套血培养同一穿刺点采集的血液标本，通常分别注入一个需氧和一个厌氧血培养瓶。污染菌从血培养标本中分离出的但并非引起患者血流感染的微生物，可能在标本采集或处理过程中被带入血培养瓶，皮肤定植菌是常见污染菌。标本采集标本采集指征：宜与不宜的临床决策宜采集血培养的临床指征患者存在以下一个或多个情况时，宜采集血培养标本：a)发热性中性粒细胞减少；b)不明原因的白细胞增多；c)无明确感染源的发热；d)可疑CRBSI；可疑感染性心内膜炎；可疑脓毒症或脓毒性休克；存在可能合并血流感染的情况，包含但不限于：腹腔感染，重症社区获得性肺炎，医院获得性肺炎，复杂性肺部感染（如合并脓胸等），老年或免疫力低下患者肺部感染，复杂性皮肤和软组织感染（如烧伤、浸泡损伤、动物咬伤、中性粒细胞减少或其他免疫功能不全患者的感染、脓性肌炎、坏疽、坏死性筋膜炎和肌坏死），脑膜炎，骨髓炎，肾盂肾炎，化脓性关节炎等。不宜常规采集血培养的情况以下列情况合并血流感染的可能性较低，不宜常规采集血培养：a)非重症社区获得性肺炎；b)儿童哮喘或支气管炎；无并发症或危险因素的皮肤软组织感染（如蜂窝织炎）；单纯性膀胱炎。采血时机与套数采血时间：尽早采集，严控用药节点临床怀疑血流感染时应尽快采集，且宜在使用抗菌药物前进行。若患者已用药，可选择在下一次用药前采集标本，或使用含抗菌药物吸附剂的培养瓶以提高检出率。成人采集：多部位采集2-3套标本每次需成人患者每次应在不同穿刺点采集2套～3套血培养标本，一般2d～5d内不需重复采集。疑似血流感染的患者血培养报告阴性时，可重复采集血培养标本送检。对于重症患者、严重免疫缺陷患者、金黄色葡萄球菌菌血症患者、感染性心内膜炎、感染性主动脉炎和CRBSI患者等，可进行随访监测采集血培养标本，其余情况不推荐随访监测采集血培养标本。儿童采集：常规需氧，高危加采厌氧儿童通常仅采集需氧瓶，有以下高危因素时考虑采集厌氧瓶：母亲产褥期患腹膜炎的新生儿，患儿有慢性口腔炎或鼻窦炎、蜂窝组织炎、腹腔感染症状和体征、咬伤、接受类固醇治疗的粒细胞缺乏等。对于疑似血流感染的儿童，除采集血培养标本外，可根据临床情况同时采集脑脊液、尿液或其他标本送检培养。采血量要求与标本规范01/成人采血量标准推荐每瓶采集10mL血液。采血量是影响检出率的核心关键，若采集量不足会显著降低病原体检出概率，易导致假阴性结果。03/儿童体重分层采血管控≤1kg穿刺1点总采2mL；＞1-2kg穿刺2点总采4mL；＞2-12.7kg穿刺2点总采6mL；>12.7-36.3kg总采10-20mL；>36.3kg按成人标准采40mL，需严格按体重阶梯执行。02/儿童采血量原则需严格根据患儿体重分层精准计算采血量。过量采集会因血液中抗菌物质浓度过高抑制细菌生长，反而可能引发假阳性或假阴性偏差。04/其他体液标本采集规范关节液、胸腔液、腹腔液、心包液和脑脊液等处于封闭腔隙的体液，也可接种血培养瓶检测。当标本量达3mL～10mL时，推荐接种于成人血培养瓶；若标本量＜3mL，可接种儿童血培养瓶；若标本量＜0.5mL，建议接种固体培养基及肉汤增菌管进行培养。患者体重（kg）穿刺点（个数采血量（mL)总采血量（mL）） 第一套血培养第二套血培养≤112不建议做2>1～22224>2～12.72426>12.7～36.325～105～1010～20>36.32202040采血量要求与标本规范不同体重婴幼儿、儿童患者血培养的推荐采血量采集方法与消毒规范采血部位与皮肤消毒3岁以上儿童和成人患者，选择双侧上肢静脉采集血培养标本；新生儿及小于4个月的婴儿，可选择颈外静脉或头皮浅静脉采集。仅在评估导管相关性血流感染时采集导管血。血培养标本宜单独采血，与其他检测项目同时采血时，应先接种血培养瓶。检查血培养瓶是否完好无损、是否过期。采集前在瓶身做好采血量标记。采血前做好手卫生，静脉穿刺点选定后，去除血培养瓶的塑料瓶帽，切勿打开金属封口环和胶塞，使用70％异丙醇或75％乙醇消毒，自然干燥60s。采集方法与消毒规范皮肤消毒皮肤消毒完成一步法：2％葡萄糖酸氯己定作用30s（适用于2个月以上患者）；或70％异丙醇消毒后自然干燥（适用于2个月以内的患儿）。三步法：70％异丙醇或75％乙醇擦拭静脉穿刺部位，待干30s以上；采用1％～2％碘酊从穿刺点向外画圈消毒，消毒区域直径大于3cm，自然干燥30s以上；c)75％乙醇擦拭碘酊消毒过的区域进行脱碘。对碘过敏的患者，在第一步基础上再用75％乙醇消毒60s，待乙醇挥发干燥后采血。碘伏皮肤消毒效果弱于碘酊和葡萄糖酸氯己定，不推荐用作常规血培养标本采集前消毒，如采用碘伏，则需要作用1.5min～2min。如使用其他商品化消毒剂，需要进行消毒性能和适用性验证，严格按说明书要求进行皮肤消毒，保证消毒时间。注1：如消毒时长不满足要求，会影响消毒效果，导致血培养污染。注2：穿刺点消毒后不可再触碰。采集方法与消毒规范血液注入与标本标识管理分工具分情况注入顺序注射器采血：血足先厌氧后需氧，血少优先需氧；蝶翼针采血则先需氧后厌氧，严格遵循工具适配原则。注入后即时混匀操作血液注入培养瓶后，需立即轻轻颠倒混匀，使血液与培养基充分融合，防止凝血并保证细菌均匀分布。可追溯的标本标识体系标签需包含患者姓名、唯一标识，同时记录采集时间、部位，确保标本全流程可追溯。PART03标本运送与接收流程标本运送与接收标本运送关键要求转运严控时效与温度：采集后2小时内送达实验室，全程室温运送，不应冷藏或冷冻，不应置于35℃进行预培养。上机与卫星血培养：实验室接收后30分钟内上机培养；无法24小时接收标本的实验室，建议设立“卫星血培养”系统保障检测时效。标本接收与质量管控严格评估与拒收：应尽快接收并评估和记录标本质量（如采集时间、采血量、瓶数、转运时间和条件、标本标识等），评估合格后立即上机孵育。若血培养瓶因延迟送检提示已有微生物生长，宜直接涂片镜检和转种。血培养瓶标识错误或无标识，血培养瓶破碎、损坏、渗漏，有凝块，含有聚茴香脑磺酸钠（SPS）以外的抗凝剂等情况，应拒收并尽快告知申请医师。灵活执行让步检验：针对采血量不足、血培养套数或瓶数不够等轻微不合格情况，可接收检测，但必须在最终检验报告中明确备注说明，提示结果局限性。实验室检测血培养的培养与观察自动化监测系统应用采用自动化血培养仪连续监测，培养条件设定为35℃~37℃，大幅提升微生物检测的效率与准确性。病原体培养时限规范细菌培养5天；真菌宜选专用瓶培养3-4周；分枝杆菌专用瓶培养需延长至6周。卫星血培养安全管理仪器阳性报警后，标本需转送至符合生物安全要求的实验室，进行涂片、鉴定等后续检测操作。血培养瓶抗凝剂选择推荐采用SPS（聚茴香脑磺酸钠）作为抗凝剂，需严格避免使用肝素、EDTA等抗凝物质，此类成分会抑制微生物生长，导致假阴性结果。吸附剂—树脂血培养瓶中含抗菌药物吸附剂如树脂，可提升微生物（特别是葡萄球菌和酵母菌）的检出率阳性报警后处理流程危急值报告01阳性报警后1小时内完成涂片、革兰染色及阅片，并立即电话报告临床。报告需明确革兰染色特性、菌体形态与排列等02转种培养与菌种鉴定先将阳性培养液转种至血琼脂、巧克力琼脂等培养基做纯培养；再利用纯菌落开展生化鉴定或MALDI-TOFMS质谱鉴定，精准确定病原菌的具体种类03抗菌药物敏感性试验针对临床感染相关病原体开展规范化药敏试验，测定药物抑菌或杀菌活性，为临床制定个体化抗感染治疗方案提供科学依据。快速检测技术在血流感染诊断中的应用01病原菌快速鉴定利用MALDI-TOFMS（基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱）等技术，无需传统大量培养，可直接采用阳性血培养液或转种后4-6小时的小菌落进行快速鉴定，能够大幅缩短鉴定周期，可作为二级报告及时提供给临床参考。0102快速药敏试验检测可采用早期培养的小菌落，或直接利用阳性血培养液开展纸片扩散法等快速药敏试验，能有效提前获取病原菌的药物敏感性结果，为临床医师早期精准选择抗菌药物提供重要参考，减少经验性用药的盲目性。0203血液直接核酸检测针对疑似血流感染的危急重症患者，mNGS（宏基因组测序）、ddPCR（数字PCR）等核酸检测技术可作为血培养的重要补充手段。需注意其结果解释需结合患者临床症状、体征及其他实验室检查综合判断，不能完全替代传统血培养。03血培养特殊病原体处理01

/

营养苛求菌的识别与培养乏养菌/颗粒链菌需确认“卫星”生长现象或转种巧克力/厌氧血琼脂；巴尔通体自动化难检出，优先推荐血清学和分子生物学方法检测。02

/

高致病性与微需氧菌防控布鲁菌高致病，需氧瓶3-5天报阳，操作需严格生物安全防护；弯曲菌为微需氧菌，革兰染色难见，可采用吖啶橙染色辅助筛查。03

/

特殊营养与环境需求菌培养弗朗西斯菌需含半胱氨酸培养基且培养>10天；HACEK菌群与心内膜炎相关，需5%-10%

CO₂

环境及营养丰富的培养基支持生长。04

/

少见病原体的特殊检测策略螺杆菌需微需氧环境延长培养至7天；军团菌需传种BCYE培养基并用碱性复红复染；钩端螺旋体和支原体则优先选用血清学或分子检测。关键原则与综合诊断思路针对特殊病原体，需结合临床背景延长培养时间、调整气体环境及使用专用培养基；对于自动化系统难以检出的菌株，应及时联合血清学、分子生物学（如PCR）等手段，同时严格执行生物安全防护规范，降低实验室暴露风险。导管相关血流感染CRBSI诊断：短期外周导管的血培养标本采集方法外周静脉血培养采集严格无菌操作采集2套外周静脉血培养，分别从不同部位穿刺，以提高检测的敏感性与特异性。导管尖端培养操作同时无菌拔除导管，取导管尖端5cm，在血琼脂平板上来回滚动4次，进行导管半定量培养检测。实验室结果判读与诊断双阳性且同菌（确诊CRBSI）1

套或多套血培养阳性

+

导管尖端≥15

个菌落且菌种一致，直接提示导管相关血流感染。血阳管阴（疑诊CRBSI）1

套或多套血培养阳性，导管尖端培养阴性，如血培养分离菌为金黄色葡萄球菌或念珠菌属，且无其他明确的感染源，提示CRBSI血阴管阳（导管定植）2

套血培养阴性，但导管尖端培养阳性，提示为导管定植（无论菌落计数多少）。双阴性：基本排除CRBSI诊断，可排除导管相关血流感染的可能性。CRBSI诊断：中心静脉导管及输液港（保留导管）标本采集原则与实验室结果综合判读标准核心采集原则：双份血培养配对送检必须同时采集至少1套外周静脉血培养标本，以及1套等量的导管血培养标本。两套标本需标记明确，同步送检，为后续时间差和定量分析提供依据。确诊/提示性判读（高风险指向）2

套血培养均阳性且分离菌株相同，导管血阳性报警时间较外周血提前≥120min，且无其他明确感染源，提示为CRBSI。两套血培养分离出相同菌种，且临床排除其他感染灶，可确诊CRBSI。03

其他结果分层判读定量差异：导管血定量计数是外周血5倍以上，提示可能为CRBSI。单一阳性：仅导管血阳性多考虑定植/污染；仅外周血阳性需结合菌种（金葡/念珠菌需警惕）。双阴性：基本可排除CRBSI诊断，需重新评估发热原因。CRBSI诊断：拟拔除导管标本采集与判读标本采集规范与结果判读核心逻辑标准化标本采集流程：需无菌操作采集至少2套外周血培养标本；同步拔除导管，剪切尖端约5cm段，进行半定量培养，或涡旋/超声后进行定量培养。临床确诊与鉴别诊断（核心判读）：若血培养与导管尖端培养为同一种病原体，可确诊CRBSI；若仅导管尖端阳性为定植，仅血培养阳性需排除其他感染灶，双阴性则基本排除诊断。特殊病原体警示：当血培养检出金葡菌或念珠菌，即使导管尖端阴性，若无其他明确感染源，仍高度提示CRBSI，需结合临床症状及时干预。结果判读速查双阳=确诊CRBSI尖阳血阴=导管定植尖阴血阳=高度怀疑双阴=排除诊断血培养检出微生物的临床意义判断血培养检出微生物的临床意义判断多考虑为感染菌金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、β-溶血链球菌肠杆菌目细菌、铜绿假单胞菌单核细胞增生李斯特菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌厌氧革兰阴性杆菌（如拟杆菌属、梭杆菌属）念珠菌属、新型隐球菌污染菌或意义不确定多考虑为污染菌：凝固酶阴性葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌、微球菌属、棒状杆菌属、气球菌属、芽孢杆菌属（炭疽除外）。通常为单瓶/套阳性，且在培养3-5天后报阳。临床意义不确定：肠球菌属、草绿色链球菌群、梭菌属。需结合临床情况综合判断。对血培养标本分离出的感染菌和污染菌的鉴别，目前尚无明确标准，但可依据血培养的微生物种类、血培养阳性报警瓶数量、阳性报警时间、患者临床表现和其他实验室或影像学检查结果等综合分析判断结果报告规范阳性血培养分级报告制度危急值报告（一级报告）核心内容为革兰染色镜检结果，需在阳性报警后≤1小时内，通过立即电话报告的方式传达至临床，确保危急信息零延迟传递。(报告内容包括患者姓名、阳性血培养瓶类型、瓶数、阳性报警时间长度、涂片革兰染色特性及形态，宜询问并记录患者目前感染情况和抗菌药物使用情况，应记录报告时间、报告者和接收报告者信息。)快速鉴定和药敏结果报告（二级报告）二级报告内容主要包括初步或快速鉴定结果、快速药敏试验结果和阳性血培养液的核酸检测结果，或实验室信息管理系统（LIS）

自动化智能审核发出的自动药敏检测系统高置信度药敏结果（临床可读但不可打印）。最终报告（三级报告）包含最终菌种鉴定结果、标准药敏试验结果及临床提示信息等完整内容，要求报告内容清晰规范，统一使用标准化术语，为患者的全程诊疗提供权威的实验室结论支撑。阴性血培养报告规范标准化报告格式与动态反馈机制规范报告格式：明确标注培养时长与未生长类型，采用“血培养标本经XX天培养无细菌/真菌/分枝杆菌生长”的标准表述，确保结果描述的准确性与统一性。实施动态阴性报告：通过LIS系统每日向临床传输结果，如“培养1天阴性，标本将延长培养至xx天”，助力临床医生及时调整诊疗方案，避免因等待最终报告而造成的治疗延误与过度用药。质量控制与安全防护生物安全操作规范与防护要求操作环境与核心操作规范BSL-2实验室专属操作处理血培养标本必须在生物安全二级(BSL-2)实验室内完成，确保基础生物安全防护设施完备，环境符合管控标准。生物安全柜内的核心操作阳性报警后的涂片、接种等易产生气溶胶的活动，严禁开放操作，必须在生物安全柜内全程规范完成，阻断感染传播路径。操作区环境监测与管控定期对操作环境进行消杀与生物监测，确保空气、台面等环境无病原微生物残留，保障环境安全。高致病性菌与特殊标本管理高致病性菌的等级防护升级针对布鲁菌、土拉弗朗西斯菌等菌株，活菌操作需转至更高生物安全级别实验室，落实特级防护措施。卫星血培养的合规转运检测卫星血培养阳性报警后，需严格密封包装，规范转运至符合生物安全资质的实验室。全流程的风险管控与溯源建立高风险标本全流程追溯体系，操作人员需持证上岗，做好操作记录与应急处置预案。质量评价与改进核心质量指标血培养污染率控制达标阈值需＜3%，最佳管理目标应控制在＜1%，减少假阳性干扰。关键周转时间(TAT)要求转运TAT≤2小时，上机TAT≤30分钟，一级报告TAT≤1小时，保障检测时效性。综合送检质量指标关注血培养送检率、阳性率及双侧双套送检率，规范采样。标本全流程质量监控把控采集、运输环节，确保样本符合检测标准。质量改进措施多学科协作联动机制感染管理、临床科室与实验室三方协同，建立常态化沟通渠道，及时解决血培养相关质量问题。专业人员能力持续培训定期开展血培养采集、送检及检测全流程培训，规范操作细节，强化医护人员的质量控制意识。信息化赋能与流程优化利用信息化手段实现全流程追踪管理，梳理并优化实验室检测步骤，进一步缩短TAT，提升整体检测效率。血培养相关质量评价指标检验流程活动质量评价指标质量评价指标公式计算及内容解释检验前患者评估血培养送检率a计算公式：单位时间内送检血培养患者例数/符合血培养采集指征应送检患者例数×

100％；可按月、季度、年统计各科特别是感染科、ICU、呼吸科和急诊等科室的血培养送检率。解释：依据本标准第4.1条

采集指征统计分母血培养送检量a计算公式：单位时间内单位有效床位送检血培养瓶数（或套数），如血培养送检瓶数/床位/月，或千张床位送检血培养瓶数/日检验中标本采集标本转运标本接收和处理微生物检测、菌株鉴定、药敏试验、结果可靠性和结果解释血培养污染率a,b,c计算公式：单位时间内血培养污染套数/同期血培养送检总套数×100％；可根据采血地点、采血者等进行分层分析；达标阈值＜3％

，最佳目标＜1%其他质量评价指标单位时间内采血量低于或高于推荐采血量的血培养瓶比例单位时间内只包含一个血瓶的血培养套数的比例单位时间内从留置的血管通路中采集血培养的比例单位时间内由于采集错误造成拒收的血培养比例（如血培养瓶上无标识）等血培养转运TATa计算公式：血培养转运TAT=标本接收时间－标本采集时间（要求≤2h）其他质量评价指标不符合转送要求的血培养比例血培养上机

TATa计算公式：血培养上机TAT=血瓶上机培养时间－标本接收时间（要求≤30min）血培养双侧双套送检率a计算公式：单位时间内送检双侧双套血培养的成人患者例数/所有送检血培养的成人患者例数×100%解释：每个发生血流感染的患者在24h采集2套～3套血培养为1例标本拒收率单位时间内有沟通记录的拒收血培养标本比例。血培养阳性率a计算公式：单