细胞治疗细胞制备技师考试试卷及答案

细胞治疗细胞制备技师考试试卷及答案试题部分一、填空题（共10题，每题1分）1.细胞制备常用台式离心机的转速单位是______。2.GMP的中文全称是______。3.细胞冻存核心保护剂是______。4.支原体检测常用分子方法是______。5.细胞培养箱CO₂浓度通常为______%。6.无菌操作的核心原则是______。7.CAR-T制备常用病毒载体是______。8.活死细胞计数染料是______。9.细胞制备洁净区级别一般为______级。10.细胞复苏解冻温度是______℃。二、单项选择题（共10题，每题2分）1.细胞污染的典型表现不包括？A.培养基浑浊B.pH异常C.细胞形态规则D.黑色游动小点2.无菌过滤器孔径通常为？A.0.1μmB.0.22μmC.0.45μmD.0.8μm3.无需生物安全柜操作的是？A.细胞传代B.培养基配制C.冻存管解冻D.台盼蓝计数4.T细胞活化常用刺激因子是？A.IL-2B.IL-4C.IL-6D.IL-105.洁净区温度范围是？A.18-22℃B.20-24℃C.22-26℃D.24-28℃6.细胞活性检测方法是？A.革兰染色B.台盼蓝排斥法C.硝酸银染色D.瑞氏染色7.离心后上清液处理正确的是？A.直接倒下水道B.灭菌后丢弃C.无菌容器保存D.直接丢弃8.复苏活性降低的原因是？A.快速解冻B.立即离心C.慢加培养基D.水浴温度过高9.培养基无菌检测用？A.菌落计数B.内毒素检测C.薄膜过滤法D.支原体PCR10.符合无菌规范的是？A.手触无菌物品B.操作时说话C.开启后24h内用D.物品紧凑摆放三、多项选择题（共10题，每题2分）1.无菌操作关键控制点包括？A.着装规范B.环境消毒验证C.试剂无菌检测D.避免交叉污染2.细胞冻存注意事项？A.含血清+保护剂B.1℃/min降温C.标记清晰D.直接入-80℃3.CAR-T制备步骤？A.T细胞分离B.活化扩增C.慢病毒转染D.质检冻存4.环境监控指标？A.温湿度B.沉降菌C.表面微生物D.压差5.细胞活性下降原因？A.营养不足B.污染C.环境异常D.传代过多6.支原体污染危害？A.影响生长B.改变形态C.干扰结果D.细胞死亡7.细胞分离方法？A.密度梯度离心B.免疫磁珠分选C.流式分选D.过滤8.细胞复苏正确步骤？A.37℃快速解冻B.慢加预热培养基C.离心去冻存液D.计数活性9.GMP对人员要求？A.专业技能B.定期体检C.无菌培训D.无需个人卫生10.常用质检项目？A.活性检测B.无菌检测C.支原体检测D.内毒素检测四、判断题（共10题，每题2分）1.细胞培养基pH维持7.2-7.4。（）2.冻存降温越快存活率越高。（）3.生物安全柜物品放中央，避免挡气流。（）4.支原体污染肉眼可见培养基浑浊。（）5.CAR转染效率越高治疗效果越好。（）6.洁净区保持正压防污染。（）7.台盼蓝染色蓝色为活细胞。（）8.培养基配制后无需灭菌。（）9.胰酶消化时间越长越好。（）10.冻存后立即转液氮。（）五、简答题（共4题，每题5分）1.简述细胞制备无菌操作基本要求。2.简述CAR-T细胞制备主要流程。3.简述细胞冻存与复苏注意事项。4.简述GMP对细胞制备环境的核心要求。六、讨论题（共2题，每题5分）1.如何降低细胞制备支原体污染风险？2.细胞活性下降的常见原因及解决措施？答案部分一、填空题答案1.转/分钟（r/min）2.药品生产质量管理规范3.二甲基亚砜（DMSO）4.PCR法5.56.防止微生物污染7.慢病毒8.台盼蓝9.B10.37二、单项选择题答案1.C2.B3.D4.A5.B6.B7.B8.D9.C10.C三、多项选择题答案1.ABCD2.ABC3.ABCD4.ABCD5.ABCD6.ABCD7.ABCD8.ABCD9.ABC10.ABCD四、判断题答案1.√2.×3.√4.×5.×6.√7.×8.×9.×10.×五、简答题答案1.①穿无菌服/口罩/手套，避免手触无菌物品；②生物安全柜内操作，保持气流稳定；③无菌物品开启后24h内用；④操作前消毒环境/物品；⑤减少说话/咳嗽；⑥不同细胞系分开操作防交叉污染。2.①外周血采集→T细胞分离（密度梯度/磁珠）；②T细胞活化（CD3/CD28+IL-2）；③慢病毒转染CAR基因；④CAR-T扩增培养；⑤质检（活性、无菌、支原体、CAR表达）；⑥冻存或回输。3.冻存：①冻存液=10%DMSO+90%血清/培养基；②1℃/min降温（-80℃过夜→液氮）；③标记细胞名/日期/编号。复苏：①37℃快速解冻；②慢加10倍预热培养基；③离心去冻存液；④重悬计数活性，调整密度培养。4.①洁净度：B级（局部A级）；②温湿度20-24℃/45%-60%；③压差≥10Pa（洁净→非洁净）；④定期检测沉降菌/浮游菌/表面微生物；⑤消毒后验证效果。六、讨论题答案1.①源头：试剂/培养基/血清需支原体检测合格；②环境：生物安全柜定期消毒，洁净区定期监测；③操作：人员避免带菌，减少开放时间；④定期：每2-3周测细胞支原体；⑤污染：立即隔离，销毁污染细胞，排查污染源。2.常见原因：①污染（细菌/真