细胞治疗样本制备技师考试试卷及答案

细胞治疗样本制备技师考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.细胞治疗样本制备前，需核对患者姓名、ID、样本类型、______及抗凝剂类型。2.细胞离心常用转速单位为______（rpm或g）。3.细胞计数常用的活细胞染色剂为______（台盼蓝）。4.无菌操作的核心是避免______污染。5.细胞冻存保护剂中常用的渗透性成分是______（DMSO）。6.流式细胞术检测样本常用的固定液为______（多聚甲醛）。7.细胞复苏时需______解冻（37℃水浴快速）。8.样本制备中需避免的主要污染类型为细菌、真菌和______（支原体）。9.CAR-T制备中T细胞分选常用的方法是______（磁珠分选）。10.短期运输细胞样本的温度通常为______（4℃）。二、单项选择题（每题2分，共20分）1.下列不属于样本制备前核对项的是（）A.患者IDB.样本采集时间C.实验室仪器型号D.样本量答案：C2.台盼蓝染色后，活细胞呈现（）A.蓝色B.无色C.紫色D.红色答案：B3.细胞离心后，上清液应（）A.全部弃除B.留1-2mlC.留5ml以上D.随意处理答案：B4.无菌超净台使用前，紫外照射时间应为（）A.5minB.10minC.20-30minD.60min答案：C5.细胞冻存的理想降温速率是（）A.1℃/minB.5℃/minC.10℃/minD.快速降温答案：A6.下列哪种抗凝剂不用于血液样本制备？（）A.EDTAB.肝素C.柠檬酸钠D.生理盐水答案：D7.细胞计数时，计数板每个大格的细胞数应取（）A.单次值B.2次平均值C.4次平均值D.8次平均值答案：C8.CAR-T制备中，T细胞激活常用的刺激因子是（）A.IL-2B.IL-4C.IFN-γD.TNF-α答案：A9.样本制备中，避免支原体污染的关键是（）A.戴手套B.用无菌耗材C.定期检测D.紫外照射答案：C10.细胞复苏后，需立即（）A.离心洗涤B.直接培养C.冻存备用D.染色计数答案：A三、多项选择题（每题2分，共20分）1.样本制备无菌操作要求包括（）A.戴无菌手套B.超净台开启紫外30minC.75%酒精消毒双手D.使用无菌耗材答案：ABCD2.影响细胞冻存存活率的因素有（）A.降温速率B.冻存液浓度C.细胞浓度D.解冻时间答案：ABC3.细胞计数的常用方法包括（）A.手动计数板法B.自动细胞计数仪法C.流式细胞术法D.显微镜直接观察法答案：ABC4.血液样本制备中，红细胞裂解的常用试剂是（）A.氯化铵溶液B.碳酸氢钠溶液C.裂解液（商业化）D.生理盐水答案：AC5.CAR-T细胞制备的关键步骤包括（）A.T细胞分选B.病毒转导C.细胞扩增D.质量检测答案：ABCD6.样本运输的注意事项包括（）A.低温保存B.防震C.及时送检D.标注生物危害答案：ABCD7.细胞培养的无菌要求包括（）A.培养基无菌B.培养瓶无菌C.操作环境无菌D.人员无菌意识答案：ABCD8.下列属于细胞治疗样本质量控制指标的是（）A.细胞活力B.细胞纯度C.细菌/真菌检测D.支原体检测答案：ABCD9.磁珠分选T细胞的优点是（）A.操作简单B.成本低C.纯度高D.通量高答案：ABD10.细胞复苏的正确步骤包括（）A.37℃水浴快速解冻B.立即加入培养基稀释C.离心洗涤去除DMSOD.接种培养答案：ABCD四、判断题（每题2分，共20分）1.样本制备中，离心转速越高越好。（×）2.台盼蓝染色后，死细胞呈蓝色。（√）3.细胞冻存液中DMSO的浓度通常为10%。（√）4.样本制备前无需核对申请单信息。（×）5.无菌操作时，可直接用手接触超净台内耗材。（×）6.细胞复苏后，可直接冻存备用。（×）7.流式细胞术可用于细胞纯度检测。（√）8.血液样本采集后应立即制备，避免细胞凋亡。（√）9.支原体污染可通过紫外照射彻底清除。（×）10.CAR-T细胞制备中，病毒转导后无需检测转导效率。（×）五、简答题（每题5分，共20分）1.简述样本制备前的核心核对内容。答案：需核对5项核心内容：①患者信息（姓名、ID、性别、年龄）；②样本基本信息（类型：血/组织/细胞悬液、采集时间、数量）；③抗凝/保存条件（抗凝剂类型、保存温度）；④申请单信息（制备目的、实验要求）；⑤样本状态（有无溶血、凝固、污染迹象）。核对需双人确认，确保信息准确匹配，避免差错。2.简述无菌操作在细胞治疗样本制备中的重要性。答案：无菌操作是细胞治疗安全的核心保障：①防止细菌/真菌污染，避免细胞失效或临床感染；②避免支原体/内毒素污染，保证细胞活性和功能；③防止交叉污染，确保样本特异性；④符合GMP规范，满足临床应用的质量要求。若无菌操作不当，将直接导致样本报废，无法用于后续治疗。3.简述细胞计数的基本步骤。答案：细胞计数步骤：①制备细胞悬液（确保单细胞分散）；②台盼蓝染色（细胞与染液1:1混合，静置2-3min）；③加载计数板（取10μl混合液加入计数板凹槽）；④显微镜计数（计数4个大格的活细胞数，死细胞呈蓝色）；⑤计算（细胞浓度=（4个大格总活细胞数×10⁴）/4）；⑥重复2次取平均值，确保准确性。4.简述细胞冻存的基本流程。答案：细胞冻存流程：①准备冻存液（基础培养基+10%FBS+10%DMSO）；②调整细胞浓度（1×10⁶-1×10⁷/ml）；③分装冻存管（1ml/管）；④程序降温（-80℃冰箱过夜，或用程序降温盒）；⑤转移至液氮罐长期保存（-196℃）。注意：冻存管需标注信息（细胞类型、冻存时间、浓度），避免混淆。六、讨论题（每题5分，共10分）1.讨论细胞复苏过程中影响细胞存活率的因素及应对措施。答案：影响因素及应对：①解冻速率：过快（>37℃）或过慢（<30℃）均降低存活率，应对：37℃水浴快速解冻（1-2min，至剩余少量冰）；②冻存液成分：DMSO浓度不当（过高/低），应对：使用10%DMSO+90%FBS的标准冻存液；③洗涤时机：解冻后未及时洗涤去除DMSO，应对：解冻后立即加入5-10ml培养基稀释，离心（1500rpm×5min）弃上清；④细胞浓度：冻存浓度过低，应对：调整浓度至1×10⁶-1×10⁷/ml。此外，复苏后短期培养（24h）观察细胞贴壁/活性，及时调整培养条件。2.讨论CAR-T细胞制备中T细胞分选的常用方法及优缺点。答案：常用方法及优缺点：①磁珠分选（MACS）：优点是操作简单、成本低、通量高，适合临床批量制备；缺点是纯度中等（约90%），可能残留磁珠；