CN113755443B 自身免疫性脑炎抗体瞬转与稳转检测方法及其应用 （陈向军）

AutoantibodyAgainsttheN-Methyharboringdisease-associatedmpermitsNMDArecepto自身免疫性脑炎抗体瞬转与稳转检测方法本发明提供了自身免疫性脑炎抗体瞬转与一种表达突变型NMDAR的重组细胞，所述重组细胞表达外源的突变型NMDAR和荧光蛋白的融合蛋检测自身免疫性脑炎相关的抗体，包括NMDAR、B染细胞系通过间接免疫荧光法来检测抗自身免23.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述重组细胞表达NMDAR突变蛋白，所述述的NMDAR突变蛋白以膜蛋白形式存在于重组细胞的9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的试剂盒中还含有选自下组的额外试所述重组细胞C2表达AMPAR2蛋白与GFP绿色荧光蛋白的融合蛋所述重组细胞C3表达LGI1蛋白与GFP绿色荧光蛋白的融合3所述重组细胞C4表达Caspr2蛋白与GFP绿色荧光蛋白的融合所述重组细胞C5表达GABABR蛋白与GFP绿色荧光蛋白的融合4[0002]自身免疫性脑炎(Autoimmuneencephalitis,AE)是近10余年来新进被认识的一者中检测出一种N_甲基_D_天冬氨酸受体(N_methyl_D_aspartatereceptor，NMDAR)的特被命名为抗NMDAR脑炎(Anti_NMDA组表达和纯化的NMDAR构象与天然状态下的NMDAR构象存在差异，导致灵敏度和特异性较5[0012]所述的第一质粒含有第一表达盒，所述第一表达盒用于表达式I所示的融合蛋白[0018](b)将所述的第一质粒和第二质粒转入所述的待转染的细胞，从而获得所述的重[0020]在另一优选例中，所述的重组的NMDAR蛋白由式I所示的融合蛋白P0和NMDAR亚基[0029]在另一优选例中，所述的突变型NMDAR突变蛋白以跨膜蛋白形式存在于所述重组[0036](Y1)用于表达AMPAR1蛋白的重组细胞C1,或用于制备所述重组细胞C1的转染试[0037](Y2)用于表达AMPAR2蛋白的重组细胞C2，或用于制备所述重组细胞C2的转染试6[0039](Y4)用于表达Caspr2蛋白的重组细胞C4，或用于制备所述重组细胞C4的转染试[0040](Y5)用于表达GABABR蛋白的重组细胞C5，或用于制备所述重组细胞C5的转染试[0052](Y1)用于表达AMPAR1蛋白的重组细胞C1,或用于制备所述重组细胞C1的转染试[0053](Y2)用于表达AMPAR2蛋白的重组细胞C2，或用于制备所述重组细胞C2的转染试[0055](Y4)用于表达Caspr2蛋白的重组细胞C4，或用于制备所述重组细胞C4的转染试[0056](Y5)用于表达GABABR蛋白的重组细胞C5，或用于制备所述重组细胞C5的转染试[0058]在本发明的第五方面，提供了一种检测样本中是否存在抗NMDAR蛋白的抗体的方7[0076]优选地，本发明提供一种将编码SEQIDNo:2所示的NMDAR的亚基的cDNA,转染细8[0082]atgagcaccatgcgcctgctgacgctcgccctgctgttctcctgctccgtcgcccgtgccgcgtgcgaccccaagatcgtcaacattggcgcggtgctgagcacgcggaagcacgagcagatgttccgcgaggccgtgaaccaggccaacaagcggcacggctcctggaagattcagctcaatgccacctccgtcacgcacaagcccaacgccatccagatggctctgtcggtgtgcgaggacctcatctccagccaggtctacgccatcctagttagccatccacctacccccaacgaccacttcactcccacccctgtctcctacacagccggcttctaccgcatacccgtgctggggctgaccacccgcatgtccatctactcggacaagagcatccacctgagcttcctgcgcaccgtgccgccctactcccaccagtccagcgtgtggtttgagatgatgcgtgtctacagctggaaccacatcatcctgctggtcagcgacgaccacgagggccgggcggctcagaaacgcctggagacgctgctggaggagcgtgagtccaaggcagagaaggtgctgcagtttgacccagggaccaagaacgtgacggccctgctgatggaggcgaaagagctggaggcccgggtcatcatcctttctgccagcgaggacgatgctgccactgtataccgcgcagccgcgatgctgaacatgacgggctccgggtacgtgtggctggtcggcgagcgcgagatctcggggaacgccctgcgctacgccccagacggcatcctcgggctgcagctcatcaacggcaagaacgagtcggcccacatcagcgacgccgtgggcgtggtggcccaggccgtgcacgagctcctcgagaaggagaacatcaccgacccgccgcggggctgcgtgggcaacaccaacatctggaagaccgggccgctcttcaagagagtgctgatgtcttccaagtatgcggatggggtgactggtcgcgtggagttcaatgaggatggggaccggaagttcgccaactacagcatcatgaacctgcagaaccgcaagctggtgcaagtgggcatctacaatggcacccacgtcatccctaatgacaggaagatcatctggccaggcggagagacagagaagcctcgagggtaccagatgtccaccagactgaagattgtgacgatccaccaggagcccttcgtgtacgtcaagcccacgctgagtgatgggacatgcaaggaggagttcacagtcaacggcgacccagtcaagaaggtgatctgcaccgggcccaacgacacgtcgccgggcagcccccgccacacggtgcctcagtgttgctacggcttttgcatcgacctgctcatcaagctggcacggaccatgaacttcacctacgaggtgcacctggtggcagatggcaagttcggcacacaggagcgggtgaacaacagcaacaagaaggagtggaatgggatgatgggcgagctgctcagcgggcaggcagacatgatcgtggcgccgctaaccataaacaacgagcgcgcgcagtacatcgagttttccaagcccttcaagtaccagggcctgactattctggtcaagaaggagattccccggagcacgctggactcgttcatgcagccgttccagagcacactgtggctgctggtggggctgtcggtgcacgtggtggccgtgatgctgtacctgctggaccgcttcagccccttcggccggttcaaggtgaacagcgaggaggaggaggaggacgcactgaccctgtcctcggccatgtggttctcctggggcgtcctgctcaactccggcatcggggaaggcgcccccagaagcttctcagcgcgcatcctgggcatggtgtgggccggctttgccatgatcatcgtggcctcctacaccgccaacctggcggccttcctggtgctggaccggccggaggagcgcatcacgggcatcaacgaccctcggctgaggaacccctcggacaagtttatctacgccacggtgaagcagagctccgtggatatctacttccggcgccaggtggagctgagcaccatgtaccggcatatggagaagcacaactacgagagtgcggcggaggccatccaggccgtgagagacaacaagctgcatgccttcatctgggactcggcggtgctggagttcgaggcctcgcagaagtgcgacctggtgacgactggagagctgtttttccgctcgggcttcggcataggcatgcgcaaagacagcccctggaagcagaacgtctccctgtccatcctcaagtcccacgagaatggcttcatggaagacctggacaagacgtgggttcggtatcaggaatgtgactcgcgcagcaacgcccctgcgacccttacttttgagaacatggccggggtcttcatgctggtagctgggggcatcgtggccgggatcttcctgattttcatcg9agattgcctacaagcggcacaaggatgctcgccggaagcagatgcagctggcctttgccgccgttaacgtgtggcggaagaacctgcaggatagaaagagtggtagagcagagcctgaccctaaaaagaaagccacatttagggctatcacctccaccctggcttccagcttcaagaggcgtaggtcctccaaagacacgcagtaccatcccactgatatcacgggcc[0084]atgagcaccatgcgcctgctgacgctcgccctgctgttctcctgctccgtcgcccgtgccgcgtgcgaccccaagatcgtcaacattggcgcggtgctgagcacgcggaagcacgagcagatgttccgcgaggccgtgaaccaggccaacaagcggcacggctcctggaagattcagctcaatgccacctccgtcacgcacaagcccaacgccatccagatggctctgtcggtgtgcgaggacctcatctccagccaggtctacgccatcctagttagccatccacctacccccaacgaccacttcactcccacccctgtctcctacacagccggcttctaccgcatacccgtgctggggctgaccacccgcatgtccatctactcggacaagagcatccacctgagcttcctgcgcaccgtgccgccctactcccaccagtccagcgtgtggtttgagatgatgcgtgtctacagctggaaccacatcatcctgctggtcagcgacgaccacgagggccgggcggctcagaaacgcctggagacgctgctggaggagcgtgagtccaaggcagagaaggtgctgcagtttgacccagggaccaagaacgtgacggccctgctgatggaggcgaaagagctggaggcccgggtcatcatcctttctgccagcgaggacgatgctgccactgtataccgcgcagccgcgatgctgaacatgacgggctccgggtacgtgtggctggtcggcgagcgcgagatctcggggaacgccctgcgctacgccccagacggcatcctcgggctgcagctcatcaacggcaagaacgagtcggcccacatcagcgacgccgtgggcgtggtggcccaggccgtgcacgagctcctcgagaaggagaacatcaccgacccgccgcggggctgcgtgggcaacaccaacatctggaagaccgggccgctcttcaagagagtgctgatgtcttccaagtatgcggatggggtgactgg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