天冬氨酸对猴头和珊珊状猴头菌丝生长的影响

1关键词 1引言 2.1试验材料 3 2.3试验设计 4 42.4.1氨基酸母液的制备及灭菌 4 4 5 5 52.5.2多糖的测定 5 63.1固体培养基中不同浓度天冬氨酸对猴头菌丝生长的影响 6 6 8 103.2三种猴头菌的生长对比以及分析 3.3液体发酵后对猴头菌丝体蛋白含量和多糖含量的测定 3.3.2多糖含量的分析 4结论与讨论 16 1天冬氨酸对猴头和珊珊状猴头菌丝生长的影响通过添加不同浓度(0mg/L,60mg/L,100mg/L,140mg/L,160mg/L,180mg/L,200mg/L,400mg/L,800mg/L,1500mg/L共10个浓度)的天冬氨酸，对猴头菌丝关键词：天冬氨酸；猴头菌丝；固体培养；液体发酵培养2猴头菌(学名：Hericiumerinaceus)又称花菜菇，是齿菌科、猴头菇属真菌，营养丰富1。其主要分布在北温带的阔叶林或针阔混交林中，在日本、北美、俄罗斯、西欧等地以及中国的大部分省份均有分布。猴头菌的蛋白质含量高达20%-25%,含天冬氨酸是一种非必需氨基酸，属于酸性氨基酸，化学式为C₄H₇NO₄。32材料与方法所使用的主要试验试剂如表2.1。表2.1试验试剂天冬氨酸蛋白胨上海麦克林生化科技有限公司七水硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)磷酸二氢钾(KH₂PO₄)国药集团化学试剂有限公司2.2试验仪器4电热鼓风干燥箱上海一恒科学仪器有限公司超净工作台苏州苏洁净化设备有限公司高压蒸汽灭菌锅致微厦门仪器有限公司电子天平梅特勒-托利多仪器有限公司武汉瑞华仪器设备有限公司紫外分光光度计屹谱仪器有限公司北京时代北利离心机有限公司本试验采用梯度浓度实验设计，通过外源添加天冬氨酸溶液(设置10个浓度梯度),探究其对猴头菌菌丝生长发育的影响，旨在筛选最适生长浓度并解析其剂量效封口于高压蒸汽灭菌锅121℃,灭菌20min,同时注意及时使用防止冷凝。液体发酵培养基同以上配方和配比，但不需要加入琼脂，用蒸馏水定容至500mL,再用每个容积为250mL的锥形瓶分装150mL液体发酵培养基，高压蒸汽灭菌5备好的猴头911菌株、猴头-6号菌株、玉珊瑚状猴头菌种分别接种到含有不同浓度天冬氨酸的PDA平板中央，每个处理设置3个重复，每个菌种设置三个对照，在(25士1)℃恒温培养箱中培养，菌丝生长8整天为一个周期，周期结束后以十字交叉法佳生长天冬氨酸浓度的液体培养基，用1mL枪头尾部将把各个菌种切出圆形的菌种块，每个培养基里均接15个菌种块，每个品种设置三个重复，每个菌种设置一个对取干粉0.4g与6mL蒸馏水混合于10mL离心管中。55℃水浴2.5h。取出放凉后取7mL蒸馏水与0.1g干粉于10mL离心管中混合均匀，90℃下水浴2.5h。取出放凉后放入离心机，4000r/min离心15min。取上清液得待测溶液。浓硫酸500μL,充分摇匀后室温静置6min,然后放入水浴中反应15min。将1至763.1固体培养基中不同浓度天冬氨酸对猴头菌丝生长的影响观察表3.1和图3.1、3.2,不同天冬氨酸浓度培养基中的“猴头911”经过8天培养后菌丝生长呈现显著差异。最适浓度(即A5)条件下，菌丝生长速率达到峰值，浓度达到A6时，菌丝的生长速度有所下降，高浓度的天冬氨酸对菌丝生长有抑制作观察菌丝长势，发现其呈现先减小再增大，随后再减小的趋势。达到A5时菌丝A6A77编号浓度(mg/L)菌丝直径(mm)菌丝长势菌丝生长速度(mm/d)0十十+十十A1A2A3A4A1A2A3A4A5A6A78B₆9编号浓度(mg/L)菌丝直径(mm)菌丝长势菌丝生长速度(mm/d)0++十+十而，超过C5后，随着天冬氨酸浓度升高，菌丝生长受到较为显著的抑制，表编号浓度(mg/L)菌丝直径(mm)菌丝长势菌丝生长速度(mm/d)0+十+十冬氨酸浓度梯度培养实验观察，其生长响应呈现出显著的品种特异性与浓度依赖性初期响应相对较大，有较好的促进生长现象，但其在达到140mg/L的最适浓度后， 猴头911猴头6号猴头玉珊瑚3.3.1蛋白质含量的分析优化的天冬氨酸培养条件下开展蛋白质合成能力对比分析，并设置未添加外源天冬条件下呈现出微弱的抑制效应，其蛋白质含量较对照组的生物学差异虽未达显著阈蛋白质标准曲线方程为y=4.215x+0.003,该方程线性关系良好猴头911猴头6号猴头玉珊瑚Basp(0mg/L)□asp(最佳浓度)优天冬氨酸浓度进行定向培养，系统比较了外源天冬氨酸对菌丝体多糖合成的调控多糖标准曲线方程为y=0.7763x+0.2085,该方程线性关系良好。猴头911猴头6号猴头玉珊瑚Basp(0mg/L)□asp(最佳浓度)本次试验通过设置十种不同浓度梯度的天冬氨酸进行固体培养，然后筛选出适合菌丝体生长的天冬氨酸最佳浓度进行液体发酵培养。实验研究显示在固