2026年免疫学免疫技术应用试题及答案解析

2026年免疫学免疫技术应用试题及答案解析一、单项选择题（每题2分，共20分）1.关于单细胞免疫组库测序（scTCR/BCR-seq）技术，以下描述错误的是：A.可同时获取单个免疫细胞的转录组信息与抗原受体序列B.需通过微流控或纳米孔技术实现单细胞分离C.主要用于分析T/B细胞克隆扩增与抗原特异性关联D.无法区分记忆性T细胞与效应性T细胞的受体特征答案：D解析：单细胞免疫组库测序通过结合单细胞转录组数据（如CD45RO、CCR7等表面标记基因表达），可同时解析T/B细胞的受体序列与功能亚群（如记忆性/效应性），因此D错误。A正确，该技术通过10×Genomics等平台实现转录组与受体序列的共捕获；B正确，微流控是主流单细胞分离手段；C正确，克隆扩增的T/B细胞通常对应特定抗原刺激后的增殖。2.新型双特异性抗体（BsAb）设计中，采用“2+1”结构（两个靶标A结合臂+一个靶标B结合臂）的主要目的是：A.增强Fc段介导的ADCC效应B.提高对低表达靶标A细胞的结合效率C.避免与血清中可溶性靶标B的非特异性结合D.降低抗体分子的整体分子量答案：B解析：“2+1”结构中，双价结合靶标A可通过“avidity效应”增强对低表达A的细胞的结合力（如肿瘤细胞表面低丰度抗原），而单价结合靶标B（如T细胞表面CD3）可减少脱靶效应。A错误，ADCC主要与Fc段修饰（如糖基化改造）相关；C错误，可溶性靶标结合更多与单价设计有关，但非“2+1”主要目的；D错误，“2+1”结构分子量通常大于传统IgG（约150kD），如卡妥索单抗分子量约150kD，而某些BsAb可达180kD以上。3.基于CRISPR-Cas9的T细胞基因编辑中，使用AAV病毒作为供体模板时，需敲除的关键基因是：A.TCRα恒定区（TRAC）B.PD-1（PDCD1）C.CD52D.整合酶基因答案：A解析：在通用型CAR-T（UCAR-T）制备中，敲除TRAC基因可消除内源性TCR的表达，避免移植物抗宿主病（GVHD）。AAV作为同源重组模板时，通常用于在TRAC位点定点插入CAR序列（“基因敲入”），因此需先敲除TRAC。B错误，PD-1敲除可增强T细胞活性，但非AAV模板使用的必需步骤；C错误，CD52敲除用于减少宿主免疫排斥（如联合抗CD52抗体清除宿主T细胞）；D错误，整合酶基因与病毒载体无关（AAV为非整合型载体）。4.关于质谱流式细胞术（CyTOF）的技术特点，以下正确的是：A.采用荧光标记抗体，检测参数受荧光光谱重叠限制B.可同时检测40-50个细胞表面/胞内标志物C.细胞处理需严格避免金属离子污染D.数据分辨率低于传统流式细胞术答案：C解析：CyTOF使用重金属同位素（如铕、钇）标记抗体，检测时需避免环境中金属离子（如铁、锌）污染，否则会干扰信号。A错误，CyTOF不依赖荧光，无光谱重叠问题；B错误，目前CyTOF可同时检测约50-100个参数（如FluidigmHelios平台）；D错误，CyTOF通过质谱区分同位素，分辨率高于荧光流式（无串色）。5.用于检测肿瘤患者外周血中循环肿瘤DNA（ctDNA）甲基化状态的常用技术是：A.数字PCR（dPCR）B.全基因组bisulfite测序（WGBS）C.甲基化特异性PCR（MSP）D.焦磷酸测序（Pyrosequencing）答案：B解析：ctDNA甲基化检测需覆盖多个基因位点的甲基化模式（如肿瘤抑制基因启动子区），WGBS通过亚硫酸氢盐处理将未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶，结合高通量测序可全基因组分析甲基化状态，适合ctDNA微量样本的多区域检测。A错误，dPCR主要用于已知突变的绝对定量；C错误，MSP仅能检测特定位点的甲基化状态（如单个基因）；D错误，焦磷酸测序适合短片段的甲基化定量，但通量低。6.纳米抗体（VHH）在肿瘤免疫治疗中的独特优势不包括：A.分子量小（约15kD），组织穿透力强B.可识别传统抗体无法结合的隐蔽表位（如酶活性口袋）C.无需配对轻链，表达纯化成本低D.与Fcγ受体结合能力强，ADCC效应显著答案：D解析：纳米抗体无Fc段（仅含重链可变区），因此无法通过Fc段介导ADCC/CDC效应，其优势在于小分子量（A）、高亲和力（可结合传统抗体难以到达的表位，B）、单域结构易表达（C）。D错误，ADCC需Fc段与效应细胞表面Fcγ受体结合，而纳米抗体无Fc段。7.评价肿瘤疫苗疗效的关键免疫指标不包括：A.外周血中抗原特异性CD8+T细胞频率B.肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）中PD-1阳性率C.血清中抗原特异性IgG抗体滴度D.循环中调节性T细胞（Treg）与效应T细胞（Teff）比值答案：B解析：肿瘤疫苗主要通过激活抗原特异性T细胞应答（尤其是CD8+CTL）发挥作用，因此关键指标包括抗原特异性T细胞频率（A）、抗体滴度（C，部分疫苗诱导体液免疫）、Treg/Teff比值（D，Treg抑制免疫应答）。B错误，PD-1阳性率反映T细胞耗竭状态，但并非疫苗疗效的直接评价指标（耗竭可能由肿瘤微环境导致，而非疫苗本身效果）。8.关于免疫检查点抑制剂（ICI）相关肺炎（CIP）的机制，以下最可能的是：A.药物诱导的T细胞对肺组织自身抗原的交叉反应B.肿瘤抗原脱落引发的Ⅲ型超敏反应（免疫复合物沉积）C.药物抑制PD-1/PD-L1通路后，肺内耗竭T细胞过度活化D.肠道菌群失调导致的内毒素入血诱发肺部炎症答案：C解析：CIP的核心机制是ICI（如抗PD-1抗体）阻断PD-1/PD-L1抑制信号后，肺内原本处于耗竭状态的T细胞（如识别肺组织自身抗原或病毒抗原的T细胞）被过度激活，攻击肺上皮细胞或间质。A错误，交叉反应（自身免疫）是部分免疫相关不良反应（irAEs）的机制，但CIP更常见于T细胞活化失控；B错误，Ⅲ型超敏反应与免疫复合物相关，与ICI作用机制无关；D错误，肠道菌群失调与结肠炎（另一种irAE）更相关。9.用于评估CAR-T细胞治疗后“细胞因子释放综合征（CRS）”严重程度的关键指标是：A.血清IL-6水平B.外周血CAR-T细胞扩增倍数C.乳酸脱氢酶（LDH）活性D.C反应蛋白（CRP）水平答案：A解析：CRS的核心病理是细胞因子风暴，其中IL-6是关键驱动因子（由巨噬细胞、T细胞分泌），其水平与CRS严重程度高度相关（如≥1000pg/mL常提示3级以上CRS）。B错误，CAR-T扩增是CRS的诱因，但非直接评估指标；C错误，LDH升高提示组织损伤（如肿瘤溶解），非CRS特异性；D错误，CRP是炎症急性期蛋白，特异性低。10.基于单细胞ATAC-seq（染色质可及性测序）分析肿瘤微环境时，主要用于解析的是：A.免疫细胞的克隆扩增轨迹B.转录因子与顺式调控元件的相互作用C.免疫检查点分子的表达量D.肿瘤细胞的突变负荷答案：B解析：ATAC-seq通过转座酶切割开放染色质区域，反映染色质可及性（即基因转录活性），可用于推断转录因子结合位点（顺式调控元件）的活性，从而解析免疫细胞（如T细胞、树突状细胞）的功能状态调控机制。A错误，克隆扩增轨迹需通过TCR/BCR测序；C错误，分子表达量需RNA-seq；D错误，突变负荷需全外显子测序（WES）。二、简答题（每题8分，共40分）1.简述流式细胞术（FCM）中“补偿设置”的原理及操作关键。答案：补偿设置的原理是消除不同荧光素之间的光谱重叠干扰。由于不同荧光素的发射光谱存在重叠（如FITC的发射光谱与PE部分重叠），当细胞同时表达两种荧光标记时，某一探测器会误收另一荧光的信号，需通过补偿电路扣除重叠部分。操作关键：①使用单染对照（仅标记一种荧光素的细胞或微球）；②确保对照样本的荧光强度与实验样本一致（如选择阳性细胞或调整抗体浓度）；③通过流式软件计算补偿系数（如FITC→PE的补偿系数=PE探测器在FITC单染样本中的信号强度/FITC探测器在FITC单染样本中的信号强度）；④验证补偿效果（双染样本的双阴性、单阳性、双阳性群体应清晰分离）。2.比较CAR-T细胞与TCR-T细胞在肿瘤识别机制上的差异。答案：①识别对象：CAR-T通过胞外单链抗体（scFv）识别肿瘤细胞表面的膜蛋白（如CD19、Her2），无需MHC分子呈递；TCR-T通过内源性或基因编辑的T细胞受体（TCR）识别MHC-抗原肽复合物（如胞内抗原经MHCI类分子呈递的短肽）。②识别范围：CAR-T仅能靶向膜表面抗原，TCR-T可靶向胞内抗原（如突变蛋白、病毒抗原）。③MHC依赖性：CAR-T无MHC限制，适用于MHC表达下调的肿瘤；TCR-T依赖MHC，受肿瘤MHC表达水平影响（如MHC缺失会导致逃逸）。④亲和力：CAR-T的scFv亲和力通常高于天然TCR（通过抗体工程优化），可能增加脱靶风险；TCR-T的亲和力接近生理水平（避免自身免疫）。3.列举3种用于检测免疫细胞间相互作用的技术，并简述其原理。答案：①邻近连接技术（ProximityLigationAssay,PLA）：利用两对特异性抗体（分别标记短寡核苷酸），当两种蛋白（如T细胞表面CD3与APC表面MHC-肽复合物）在空间上接近（<40nm）时，寡核苷酸互补连接并扩增，通过荧光信号显示相互作用。②实时细胞分析（RTCA）：通过微电极检测共培养的T细胞与肿瘤细胞接触时的阻抗变化，反映细胞黏附与杀伤动态。③单细胞共培养测序：将T细胞与肿瘤细胞按1:1比例封装于微流控芯片的纳升反应室中，培养后分别提取RNA并测序，分析相互作用相关基因（如细胞因子、穿孔素）的表达变化。4.说明免疫组化（IHC）中“抗原修复”的必要性及常用方法。答案：必要性：福尔马林固定会导致蛋白质交联（主要是甲醛与赖氨酸残基的氨基反应形成亚甲基桥），掩盖抗原表位，需通过抗原修复打断交联，暴露表位。常用方法：①热修复：最常用，包括高压热修复（121℃，5-10分钟）、微波修复（95℃，10-15分钟）、水浴修复（95℃，20-30分钟），使用柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）或EDTA缓冲液（pH8.0-9.0）；②酶消化修复：用蛋白酶K、胰酶等消化交联的蛋白质，适用于热敏感抗原（如某些膜蛋白），但需严格控制酶浓度与时间（避免组织过度消化）。5.解释“肿瘤免疫循环”（Cancer-ImmunityCycle）的关键步骤，并说明PD-1抑制剂如何增强该循环。答案：肿瘤免疫循环包括7个步骤：①肿瘤抗原释放（细胞死亡释放新抗原）；②抗原呈递细胞（APC，如DC）摄取并处理抗原；③APC迁移至淋巴结，激活初始T细胞（启动阶段）；④效应T细胞迁移至肿瘤部位；⑤T细胞识别肿瘤细胞表面MHC-抗原肽复合物（识别阶段）；⑥T细胞杀伤肿瘤细胞（效应阶段）；⑦更多肿瘤抗原释放（放大循环）。PD-1抑制剂通过阻断PD-1（表达于活化T细胞）与PD-L1（表达于肿瘤细胞或肿瘤相关巨噬细胞）的结合，解除T细胞的抑制信号（步骤5中的“检查点抑制”），增强T细胞的活化与增殖（步骤3-4），并维持T细胞的杀伤功能（步骤6），从而促进循环的持续进行。三、案例分析题（每题20分，共40分）案例1：患者男性，65岁，诊断为转移性去势抵抗性前列腺癌（mCRPC），既往接受多西他赛化疗、阿比特龙治疗后进展。基因检测显示：TP53突变（p.R273H）、PTEN缺失、PD-L1CPS=8（阳性），TMB=12Mut/Mb（中高负荷）。临床拟采用“抗PD-1抗体（帕博利珠单抗）+新型CTLA-4抗体（卡瑞利珠单抗改良版，Fc段去糖基化）”联合治疗。问题1：分析该联合方案的理论依据。问题2：需监测哪些免疫相关不良反应（irAEs）？简述关键监测指标。答案：问题1：联合方案依据：①PD-1/PD-L1与CTLA-4阻断分别作用于免疫应答的不同阶段：CTLA-4主要在淋巴结中抑制初始T细胞活化（与CD28竞争B7分子），PD-1主要在肿瘤微环境中抑制效应T细胞功能。联合使用可同时增强T细胞的启动（CTLA-4阻断）与效应（PD-1阻断），提高抗肿瘤免疫应答。②患者PD-L1阳性（CPS≥1）提示肿瘤细胞可通过PD-L1抑制T细胞；TMB中高负荷意味着肿瘤抗原丰富，可能产生更多新抗原，联合ICI可增强新抗原特异性T细胞的激活。③CTLA-4抗体Fc段去糖基化可减少与效应细胞（如巨噬细胞）表面Fcγ受体的结合，降低ADCC介导的Treg耗竭（传统CTLA-4抗体通过清除Treg增强免疫，但可能增加irAEs），改良后可能平衡疗效与安全性。问题2：需监测的irAEs及指标：①免疫相关性肺炎：症状（咳嗽、呼吸困难），胸部CT（磨玻璃影、实变），血气分析（氧饱和度）；②结肠炎：腹泻次数（≥3次/日）、粪便常规（白细胞、潜血），肠镜（黏膜充血、溃疡）；③肝炎：ALT/AST（≥3倍ULN）、总胆红素（≥2倍ULN）；④内分泌炎（如甲状腺功能异常）：TSH、FT3/FT4（甲状腺），ACTH、皮质醇（肾上腺）；⑤肾炎：血肌酐（≥1.5倍基线）、尿蛋白（定量≥1g/24h）。关键监测指标为治疗前基线（如肝肾功能、甲状腺功能），治疗期间每2-4周复查实验室指标（血常规、肝肾功能、甲状腺功能），出现症状时立即行影像学（如CT）或内镜检查。案例2：某研究团队