T-GDPMAA 0023-2025 自发性强直性脊柱炎食蟹猴解剖病理学检查规程

ICS11.100CCSC05GDPMAAStandardproceduresfortheanatomicalpathologicalexaminationofspontaneousankylosingspondylitisinmacacaf（本文件完成时间：2025-10-20）IT/GDPMAA0023—2025前言 2规范性引用文件 3术语和定义 4检查程序 5解剖病理学检查 25.1称重 25.2麻醉 25.3外观检查 25.4安乐死 25.5大体剖检 25.6组织病理学检查 46检查报告 66.1检查报告撰写要求 66.2检查报告内容 6附录A（资料性）大体剖检观察 7附录B（资料性）骨标本病理学组织取材 9附录C（资料性）病理组织制片 10附录D（资料性）病理组织制片（硬组织切片） 12参考文献 T/GDPMAA0023—2025本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件的某些内容可能涉及专利。本文件发布机构不承担识别专利的责任。本文件由广东省生物技术研究院（原广东省实验动物监测所）提出。本文件由广东省精准医学应用学会归口。本文件起草单位：广东省生物技术研究院（原广东省实验动物监测所）、广东春盛生物科技发展有限公司、中山大学附属第一医院、广东省人民医院、广东药科大学、南方医科大学第三附属医院。本文件主要起草人：高洪彬、李文德、万红平、苏乔、贾欢欢、赵志斌、杨玮、官堂明、何懿、关业枝、梁十、刘健新、毕颎、刘长琳、李永锋、唐爽捷、邱剑鸣、陈思羽、成文静、蔡女略、叶晓兰、罗挺、凌雪荧。T/GDPMAA0023—2025强直性脊柱炎（AnkylosingSpondylitis，AS）为以骶髂关节和脊柱附着点炎症为主要症状的一种全身性自身免疫性疾病，其可形成脊柱强直和关节融合，关节外的损伤常累及眼、心脏、肺及肠道等组织脏器，强直性脊柱炎的关节炎症状主要表现为慢性腰背痛、晨僵及脊柱活动受限，晚期可形成脊柱强直和关节融合；关节外表现常累及眼（葡萄膜炎）、心血管（主动脉炎）、肺（肺纤维化）及肠道（炎症性肠病）。该疾病病理特点、发病机制的研究及临床治疗策略的探索需要借助合适的疾病动物模型来模拟人类疾病的病理生理过程。食蟹猴因其与人类在遗传、生理及病理表型上具有高度相似性，成为强直性脊柱炎动物模型研究中备受关注的实验动物之一。为了规范强直性脊柱炎食蟹猴的解剖病理学检查，确保实验数据的准确性和可靠性，制定本文件。本文件的制定旨在明确强直性脊柱炎食蟹猴解剖病理学检查的内容和方法，以期为相关研究人员提供一套科学、系统、规范的操作指导。本文件的制定过程中，吸收了国内外强直性脊柱炎研究的成果和实践经验，并参考了相关的国家标准和行业标准，确保了标准的先进性、科学性和实用性。本文件的实施将有助于提高强直性脊柱炎食蟹猴解剖病理学检查的标准化水平，促进相关研究的纵深推进和有序发展，为指导对强直性脊柱炎患者的临床诊疗提供更加坚实的科学依据。同时，我们也期待各位研究人员在使用过程中积极提出宝贵的意见和建议，以便我们不断完善和更新本文件，更好地服务于科学研究和医学应用的发展。1T/GDPMAA0023—2025自发性强直性脊柱炎食蟹猴解剖病理学检查规程本文件规定了自发性强直性脊柱炎食蟹猴解剖病理学检查的内容和方法，包括检查程序、解剖病理学检查、检查报告。本文件适用于强直性脊柱炎食蟹猴的解剖病理学检查。2规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1实验动物食蟹猴LaboratoryMacacaFascicularis经人工饲育，对其携带的微生物和寄生虫等实行质量控制，遗传背景明确或者来源清楚，用于科学研究、教学、生产和检定以及他科学实验的食蟹猴。[来源：T/CALAS109—2021,定义3.1]3.2强直性脊柱炎AnkylosingSpondylitis(AS)以骶髂关节和脊柱附着点炎症为主要症状的一种全身性自身免疫性疾病。[来源：T/CALAS108—2021,定义2.3]3.3兽医解剖病理学VeterinaryAnatomicalPathology以通过肉眼、显微镜、免疫学等方法对患病动物的机体、器官和组织的形态学进行检查，并对疾病进行诊断的学科。[来源：DB11/T1462.1—2017,定义3.2]4检查程序自发性AS食蟹猴解剖病理学检查程序见图1。2T/GDPMAA0023—2025图1检查程序5解剖病理学检查5.1称重称量动物体重，注意体重是否明显减轻。可先目测动物大小，大体型或配合度差的动物会先予以适度的镇静，再进行抓取操作。5.2麻醉在麻醉前，动物应禁食至少8h~12h，认真核对动物信息无误后，根据动物体重等计算麻醉药使用量，进行常规麻醉。5.3外观检查包括以下内容：a)毛发和皮肤：检查体温是否升高,全身或局部是否出现肿胀等炎症迹象，毛发是否有异常脱落或被污染等；b)脊柱：观察动物脊柱的形态是否发生异常改变，如过度弯曲、变形或僵硬等；c)尾部：观察动物尾部的形态是否发生异常改变，如僵硬、结节、竹节样改变等；d)其它骨关节：观察动物髋部及四肢外周关节是否有隆起、膨胀或畸形等异常改变；e)肌肉：观察动物全身主要肌肉群是否发生异常改变，特别是脊柱附近的肌肉是否萎缩；f)眼球：使用检眼镜检查动物角膜、虹膜、巩膜等部位是否存在充血、水肿或破损等。5.4安乐死在深麻醉状态下，使用腹主动脉或腹股沟动脉放血安乐死。5.5大体剖检5.5.1解剖程序进行体表、皮下、腹腔、盆腔、胸腔、头颈部、中轴关节和外周关节的剖检。3T/GDPMAA0023—20255.5.2检查内容应检查与AS病变密切相关组织脏器。包括最为密切的中轴关节，其次为外周关节、眼球、肠道、心脏、肾脏等，此外，肺脏、肝脏、胸腺、脾脏、淋巴结等其他组织脏器也应进行解剖和观察。5.5.3大体解剖将安乐死后的实验动物放置于负压解剖台，使用手术刀、剪刀、电锯等进行大体解剖，组织脏器的解剖参见附录A。5.5.4解剖检查需重点观察的内容5.5.4.1与AS病变密切相关组织脏器5.5.4.1.1中轴关节包括：a)脊柱：形态学观察：观察脊柱的整体形态，是否有僵硬、畸形或异常弯曲（如脊柱侧凸、前凸或后凸）等。重点检查腰椎和胸椎部分脊柱，观察是否有明显的骨质增生或骨质疏松。仔细检查各脊椎之间的间隙是否正常，有无椎间隙变窄或融合等迹象。活动度评估：尝试轻轻弯曲、伸展和旋转动物脊柱，观察是否有活动受限。周围软组织检查：检查脊柱周围的肌肉组织是否有萎缩、纤维化、脂肪化或充血、肿胀、坏死及钙化等异常改变。检查脊柱周围脂肪垫的大小、形态和质地，是否存在充血、肿胀、坏死或钙化的迹象。检查脊柱周韧带组织是否有增厚、硬化或其他异常改变；b)骶髂关节：检查骶髂关节位置的骨组织是否光滑，注意是否有骨质增生或侵蚀的现象。观察骶髂关节周围的软组织，如韧带、关节囊和肌肉，是否有粘连、增厚或萎缩；c)尾椎：观察尾椎的整体形态，是否有僵硬、畸形或骨结节等。观察尾椎周围的软组织，如韧带、关节囊和肌肉，是否有粘连、增厚或萎缩。5.5.4.1.2外周关节外周关节分布在食蟹猴四肢的关节及周围软组织。应重点关注下肢关节较上肢受累情况，如髋关节、膝关节、踝关节以及肩关节、肘关节、腕关节等关节的受累情况。检查关节是否存在僵硬、畸形等改变。检查关节附近的骨质密度和结构，以评估骨质疏松或骨质增生的情况。尝试轻轻弯曲、伸展和旋转关节，评估关节活动是否受限，以及受限的程度。观察关节周围的肌肉、脂肪组织是否显示肿大、充血、萎缩或其他异常改变。检查肌腱和韧带的附着点是否有炎症和损伤的迹象，可表现为充血、肿胀、坏死或钙化。检查关节囊是否受到炎症或退变的影响，可表现为增厚、纤维化或钙化。5.5.4.1.3其他组织脏器包括：a)眼球：检查眼球壁是否存在充血、出血或渗出等情况；b)肠道：检查肠黏膜是否出现充血、出血、溃疡、糜烂或脱落，肠道壁增厚等情况；c)心脏：观察各心房和各心室大小是否正常，观察心肌及各瓣膜的厚度和形态，需特别留意瓣膜是否有增厚、变形或钙化，是否存在瓣膜狭窄或关闭不全的迹象；d)肾脏：检查是否存在萎缩或肿大，颜色变淡，表面及切面是否有不光滑的情况；e)肺脏：检查肺脏的大小、颜色、质地、表面有无异常，需留意肺叶是否纤维化的迹象；f)肝脏：评估肝脏的形态，注意是否有肿大或缩小，检查肝脏的颜色是否正常，注意是否有异常的苍白、黄疸或暗红色。切面颜色是否均匀，是否有出血、坏死或脂肪变性等；g)胸腺：检查胸腺的形态是否饱满、对称，有无变形、肿大或萎缩。评估胸腺是否有萎缩时，需结合年龄，萎缩也可能是正常的年龄相关性变化；h)脾脏：检查脾脏是否肿大或萎缩，观察颜色是否异常（苍白、暗红），质地是否硬韧或松脆；i)淋巴结：检查肠系膜及颈部淋巴结，注意其大小与质地。4T/GDPMAA0023—20255.5.4.2与AS病变非密切相关组织脏器检查时需注意组织脏器的大小、形态、颜色、质地等是否正常。5.5.5大体标本留样需留样脊柱、骶髂关节及周围的软组织。外周关节、眼球、肠道、心脏、肾脏、胸腺、脾脏、腹股沟淋巴结、颈部淋巴结以及大体解剖检查发现异常的器官和组织等也应留样保存于固定液中进行充分的固定。5.6组织病理学检查5.6.1检查内容需检查脊柱、骶髂关节。外周关节、眼球、肠道、心脏、肾脏、胸腺、脾脏、腹股沟淋巴结、颈部淋巴结以及大体解剖检查发现异常的器官和组织也应检查。5.6.2组织标本取材规范标本的取材，对于有病变的标本，取材应包括病变部位、病变与正常组织的交界处以及正常部位。骨标本的取材，往往需要电锯切割及脱钙处理。实验方法参见附录B。5.6.3病理组织制片包括：a)骨标本：1)进行必要的脱钙及脱钙后的标本脱水后进行常规石蜡包埋和切片，苏木素-伊红（HE）染色，必要时进行特殊染色（如Masson三色染色、番红O-固绿染色及茜素红S染色等）、免疫组织化学、免疫荧光以及原位杂交染色鉴定，实验方法参见附录C；2)未进行脱钙的标本可进行树脂包埋及硬组织切片。实验方法参见附录D。b)非骨标本：常规石蜡切片，苏木素-伊红（HE）染色，必要时进行特殊染色（如Masson三色染色、番红O-固绿染色及茜素红S染色等、免疫组织化学、免疫荧光以及原位杂交染色鉴定），实验方法参见附录C。5.6.4阅片及诊断5.6.4.1脊柱包括：a)附着点：韧带与骨骼相连部位的炎症情况；b)韧带：韧带是否出现变性、坏死、血管新生、炎症细胞浸润和聚集、纤维化、钙化、软骨化和骨化等现象；c)椎体：椎体边缘是否有新生骨质形成，不同椎体之间是否有骨桥形成；椎体内部的骨小梁是否变细、数量减少；软骨板下方与椎体相连的部分是否完整，有无破坏和侵蚀的痕迹；骨髓腔内的细胞成分变化，有无明显的炎症细胞浸润、聚集和纤维化以及病灶内的血管新生等现象；观察椎体骨髓腔内脂肪细胞的数量和分布情况，可使用软件计算脂肪细胞面积占比，进行量化，评估其是否有异常增多；d)椎间盘：观察椎间盘组织的退变情况，特别是纤维环的变性、断裂和纤维化，注意发生纤维化的椎间盘组织内是否有炎症细胞浸润、聚集，血管新生，纤维化，钙化，软骨化和骨化等现象，检查椎骨边缘是否有新生骨的形成，特别是否有连接相邻椎骨的现象；e)脊柱旁肌肉：需关注肌肉萎缩、炎症浸润、纤维化、脂肪浸润等病理学改变，并注意与脊柱病变和其他组织病变的关联；f)脊柱旁脂肪垫：需关注脂肪坏死、炎症细胞浸润、纤维化、新生血管形成等方面的病理学改变，并注意与脊柱病变和其他并发症的关联。5.6.4.2骶髂关节包括：5T/GDPMAA0023—2025a)韧带：观察包括骨间韧带在内的骶髂关节韧带是否出现变性、坏死、血管新生、炎症细胞浸润和聚集、纤维化、钙化、软骨化和骨化等现象；b)韧带附着的骶骨和髂骨：骨组织是否存在侵蚀，是否有新生骨质形成。骨小梁是否变细、数量减少；骨髓腔内的细胞成分变化，有无明显的炎症细胞浸润、聚集和纤维化以及病灶内的血管新生等现象；观察骶骨及髂骨骨髓腔内脂肪细胞的数量和分布情况，可使用软件计算脂肪细胞面积占比，进行量化，评估其是否有异常增多；c)滑膜：观察滑膜是否有细胞增生的现象，并注意是否有大量炎症细胞的浸润；d)关节囊：观察关节囊是否有增厚，并伴有纤维化和钙化现象；e)软骨：观察骶髂关节软骨的破坏情况，包括软骨表面的粗糙化、溃疡形成和软骨基质的丧失；f)软骨下骨：注意软骨下骨质的硬化现象，包括软骨下骨质的增厚和密度增加；g)关节间隙：观察关节间隙的宽度，是否有明显的狭窄或增宽迹象。注意是否有骨桥（骨赘）形成，导致骶髂关节部分或完全融合。5.6.4.3外周关节关注韧带和肌腱骨附着点的炎症、滑膜炎、纤维组织增生、新骨形成和骨质融合等改变。5.6.4.4眼球注意葡萄膜是否有炎症的病理表现，包括炎症细胞浸润和组织增生等。5.6.4.5肠道注意肠壁是否有炎症细胞浸润、聚集和溃疡形成。5.6.4.6心脏注意有无主动脉根部炎症、瓣膜增厚和钙化、骨化。5.6.4.7肾脏观察肾小球基底膜的厚度是否异常，是否有基底膜增厚的现象；注意肾小球内细胞的增生情况，包括内皮细胞和系膜细胞的增生；注意肾间质中是否有炎症细胞的浸润，是否有纤维化现象。5.6.4.8肺脏观察肺泡壁是否有增厚、纤维化或炎症细胞浸润。注意间质组织是否有异常增生或纤维化。5.6.4.9肝脏注意肝细胞、胆管上皮细胞是否发生变性和坏死，汇管区是否有炎症细胞浸润、聚集。5.6.4.10胸腺观察胸腺皮质和髓质的分界是否清晰，髓质中的Hassall小体是否数量正常，形态是否有异常变化。评估胸腺皮质和髓质中胸腺细胞的密度，是否有细胞减少或细胞增生。需注意被检查食蟹猴的年龄，需排除年龄相关性变化。5.6.4.11脾脏观察白髓结构中的淋巴滤泡、动脉周围淋巴鞘及边缘区是否发生增生或萎缩。红髓是否发生血窦扩张、巨噬细胞活化与纤维化，留意是否有炎症细胞浸润、聚集。5.6.4.12淋巴结检查淋巴滤泡的大小、数量及生发中心的活跃程度。评估淋巴结皮质和髓质中淋巴细胞的密度，是否有细胞减少或细胞增生。5.6.4.13其他大体解剖检查发现异常的器官和组织也应进行组织病理学检查。需注意增生或萎缩，变性，坏死，炎症等组织病理学改变。6T/GDPMAA0023—20256检查报告6.1检查报告撰写要求病理检查报告内容的表述和书写应准确、详实、完整、规范，尽量使用病理学规范术语。6.2检查报告内容报告内容应包括：a)动物编号、性别、年龄、体重、组织标本取材部位等；b)解剖病理学检查结果：包括大体解剖的描述、镜下检查描述、综合分析与诊断结果；c)具有动物病理诊断经验和资质的病理学专业人员签名并注明报告时间。7T/GDPMAA0023—2025（资料性）大体剖检观察A.1体表检查猴全身外表及营养状况，被毛光泽、疏密、有无脱毛；皮肤有无皮疹、出血、创口、疤痕；眼、耳、口、鼻、肛门、外生殖器有无分泌物、排泄物、渗出物及粘膜出血；躯体有无肿胀、膨隆、骨折等。A.2胸腔、腹腔及盆腔主要步骤如下：a)沿正中线从颌下至耻骨前缘的皮肤切开，并向两侧分离，检查皮下组织；b)剪开腹部肌肉，打开腹腔，原位检查腹腔脏器；c)去除胸骨肋骨表面的肌肉，打开胸腔，摘取胸骨和肋骨（包括肋骨和软骨交接处），检查胸腔脏器。检查后用生理盐水湿润的纱布覆盖；d)在胸腔脏器的表面或者在组织器官上洒生理盐水，从而防止组织干燥；e)摘取脾脏，称重后保留2块中间部分组织，每块大约5mm厚，检查切面；f)将胃至结肠、胰腺、肠系膜淋巴结、肠系膜和大网膜一同摘出。分离胰腺、肠系膜淋巴结。保留胃和十二指肠（至少长3cm），沿胃大弯将胃和十二指肠剪开，用生理盐水洗去内容物，检查粘膜，如有必要，将其固定在纸板上，粘膜面朝上；g)摘取整个盲肠和约5cm长的空肠、回肠和结肠。空肠取胃和盲肠中间部位，回肠和结肠取靠近盲肠处。Peyer’s节保留在空肠或回肠上。沿肠系膜将各段肠剪开，检查粘膜面。如有必要，将各段肠固定在标记为“J”“I”“C”“Co”的纸板上；h)摘取肝脏和胆囊，使用注射器抽出胆汁，观察胆汁，记录体积，将胆囊切开，观察胆囊粘膜面，称重后，保留肝脏左侧叶、中叶（该部分必须包括胆囊，每叶保留2块肝脏组织，每块肝脏组织大约5mm）。肝脏其他叶需要切开检查；i)摘取肾上腺；摘取输尿管，贴在纸上，可用“P”标示近肾端；摘取肾脏，在左肾一端表面切口标记。称重后，左肾在肾门附近横切，右肾在肾乳头附近纵切，观察切面。固定需要部位，剩余的肾脏组织丢弃；j)雄性：摘取睾丸、附睾区分左右并检查。雌性：摘取卵巢和输卵管并检查；k)切断耻骨联合，暴露盆腔。雄性：摘取膀胱、前列腺和精囊腺。雌性：摘取膀胱、阴道、子宫颈和子宫并检查。分离阴道和子宫颈，打开阴道并检查。将膀胱沿V形打开并检查；l)摘取直肠，剪开检查粘膜面，如必要，固定在标记为“Re”的纸板上；m)摘取胸腺，如果不能辨认胸腺时，取其所在部位组织，如需称重，需用备注说明；n)摘取心脏，从右心房至心尖切开，心尖至肺动脉切开。再将肺静脉至左心房及左心室切开，心尖到大动脉切开。观察肺动脉瓣、乳头肌、三尖瓣、右心房、主动脉瓣、二尖瓣、左心房及心室心内膜；o)在胸腔入口处剪断食管和气管，与主动脉和肺（包括主支气管）一起取出。提交主动脉、食管和气管。肺脏称重时在距离气管分叉处约1cm处切断，称重完成后对肺脏进行灌注固定。A.3头部、脊柱及四肢主要步骤如下：a)分离寰椎与枕骨，取下整条脊柱及周围的韧带、肌肉及脂肪垫等软组织并进行检查；b)摘取眼球和视神经摘取眼睑、瞬膜或第三眼睑。剔除眼球和视神经周围的组织；c)摘取颌下腺和颈部淋巴结，分离颌下腺和颌下淋巴结；摘取腮腺；d)摘取甲状腺和甲状旁腺；摘取舌下腺，将舌、咽、喉、扁桃体一起摘出。舌取中间部；e)去除头盖骨上的皮肤和肌肉，采集脑；摘取垂体；8T/GDPMAA0023—2025f)将动物放置于仰卧位或侧卧位，摘取骨骼肌（股二头肌、股四头肌和/或腓肠肌）坐骨神经，将坐骨神经固定在纸上面。取下并检查四肢关节周围的韧带等软组织。9T/GDPMAA0023—2025（资料性）骨标本病理学组织取材B.1脱钙前取材骨标本固定完全后，脊柱需从颈部开始，至胸部、腰部、尾部，用电锯锯开合适的大小。使用电锯横锯时，应从椎体而不是椎间盘处横切，以尽量保留完整的椎间盘；使用电锯进行纵锯时，应在椎体中央锯开，以保留椎体的最大观察面。四肢关节的取材需保留关节面、关节囊及周围的韧带。需进行常规石蜡包埋制片的标本需置于包埋盒中进行脱钙处理。不需进行常规石蜡包埋制片的标本放回至相应编号含有固定液的原容器中保存备用。B.2脱钙脱钙液选择EDTA脱钙液，脱钙液与骨组织体积比例至少为15:1，一周换2次新鲜的脱钙液，脱钙终点以骨组织无气泡发生或软化，或用大头针轻轻能刺进为标准。B.3脱钙后取材脱钙结束后，从脱钙液中取出骨组织，切取0.3cm～0.5cm厚度，标记好对应位置，放入与其相应编号的包埋盒中，用流水冲洗3～4h，冲洗完成后进入待脱水状态。T/GDPMAA0023—2025（资料性）病理组织制片C.1脱水C.1.1脱水试剂脱水所需试剂包括70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、二甲苯、石蜡（熔点56~58°C）。C.1.2脱水程序70%乙醇（3h）、80%乙醇（2.5h）、95%乙醇I（2h）、95%乙醇II（2h）、无水乙I醇（40min）、无水乙醇II（40min）、无水乙醇III（1h）、二甲苯I（30min）、二甲苯II（40min）、二甲苯III（1h）、石蜡I（1h）、石蜡II（1h）、石蜡III（1h）。C.2包埋注意事项如下：a)温度一般设置在65-70℃左右；b)包埋前应在浸蜡缸中浸泡10min左右；c)根据组织块的大小选择合适的包埋模；d)先将少量石蜡注入包埋模内，迅速将组织块夹入其中，用无齿镊将组织切面轻压至包埋模底，并与之持平，最后将包埋模移至冷却台上冷却，使组织固定于包埋模底；e)将脱水盒放到包埋模上面，再灌注石蜡；f)把包埋模移到冷却台上，冷却后将脱水盒与包埋模分离。C.3切片注意事项如下：a)先修整蜡块，充分暴露所有包埋的组织面，将蜡块放于冰块上冷却5min左右，再进行切片；b)切片厚度一般为3µm~4µm，特殊实验要求除外；c)把切片展平，用毛笔或镊子分离，光滑面朝下，放入冷水槽中伸展。C.4摊片注意事项如下：a)水温控制在37℃~48℃左右，防止蜡片离散；b)捞片使用防脱载玻片，捞取的组织切片贴于载玻片空白区域的中央。一次制备多张切片时，注意组织切片方向的一致性；c)检查玻片有无破损、皱褶、是否完整。C.5烘片注意事项如下：a)贴好切片的载玻片可以置于烘片机上进行烘片；b)烘片机温度调至37℃~48℃,烘片时间一般为30min之内；c)烘干玻片后，检查玻片是否干燥，若未完全干燥则置于鼓风干燥箱内继续烘片，若干燥则置于玻片架，待烤片和染色。C.6烤片注意事项如下：a)使用鼓风干燥箱进行烤片；b)干燥箱的温度控制在65℃左右；T/GDPMAA0023—2025c)烤片至少30min。C.7染色（苏木素-伊红（HE））注意事项如下：a)染色试剂染色所需试剂包括70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、二甲苯、TO透明剂、盐酸乙醇、伊红（醇溶）、苏木素。b)染色程序二甲苯I（20min）、二甲苯II（20min）、无水乙醇I（5min）、无水乙醇II（5min）、95%乙醇I（5min）、80%乙醇（5min）、70%乙醇（5min）、纯水（5min）、苏木素（10min）、自来水浸洗（1min）、盐酸乙醇（5s）、自来水返蓝（15min）、90％乙醇（5min）、醇溶性伊红（1min）、95%乙醇I（8s）、95%乙醇II（8s）、95%乙醇II（8s）、无水乙醇I（5min）、无水乙醇II（5min）、TO透明剂I（20min）、TO透明剂II（20min）。c)染色标准为胞核被染成蓝色，胞浆被染成红色，着色适中，染色均匀，色泽鲜艳，清晰透彻，染色质呈颗粒状。C.8封片注意事项如下：a)染色结束后，取出浸泡在透明剂中的载玻片，拭去过多的透明剂；b)在载玻片上的组织上滴1滴中性树胶；c)根据组织切片选择适当大小的盖玻片；d)将盖玻片斜立在载玻片上适当的位置，轻轻放下，封固，避免产生气泡。操作者避免对着切片呼气；e)核对玻片质量，如是否封片胶过多、封片方向错误、气泡过多，如存在以上问题则重新封片，无则置于通风橱中晾干。T/GDPMAA0023—2025（资料性）病理组织制片（硬组织切片）D.1脱水D.1.1脱水试剂脱水所需试剂包括70%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、二甲苯。D.1.2脱水程序70%乙醇（1d）、95%乙醇I（2d）、无水乙I醇（1d）、无水乙醇II（1d）、二甲苯（1d以上程序均在4℃冰箱进行。D.2渗透包括以下方式:a)渗透液I浸泡（甲基丙烯酸甲酯75ml＋邻苯二甲酸二丁酯25ml搅拌3h），时间2d，4℃冰箱进行；b)渗透液II浸泡（甲基丙烯酸甲酯75ml＋邻苯二甲酸二丁酯