2025年病毒检验标准操作规程培训试题及答案

2025年病毒检验标准操作规程培训试题及答案一、单项选择题（共10题，每题2分，共20分。每题只有1个正确答案）1.根据《医疗机构临床实验室病毒检验管理规范（2024版）》要求，二级及以上医疗机构临床病毒检验实验室开展常规病毒核酸检测工作，生物安全柜需要达到的最低级别是A.Ⅰ级生物安全柜B.Ⅱ级A1型生物安全柜C.Ⅱ级A2型生物安全柜D.Ⅲ级生物安全柜2.进行呼吸道病毒标本采集时，对于需要检测新冠病毒、流感病毒的鼻咽拭子标本，保存液中加入的抗生素终浓度，青霉素/链霉素混合液的标准浓度为A.100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素B.200U/mL青霉素、200μg/mL链霉素C.500U/mL青霉素、500μg/mL链霉素D.1000U/mL青霉素、1000μg/mL链霉素3.2025版病毒核酸提取标准操作规程要求，采用磁珠法提取临床标本中病毒核酸时，洗涤液A洗涤后离心或磁吸附的静置时间应为A.1minB.2minC.3minD.5min4.开展肠道病毒EV71分离培养时，选用的最敏感标准细胞系是A.Vero细胞B.Hep-2细胞C.RD细胞D.MDCK细胞5.实时荧光定量PCR检测病毒核酸时，内标Ct值大于多少时，实验结果判定为标本抑制，需要重新提取核酸检测A.30B.35C.38D.406.病毒检验实验室医疗废物处理要求，一次性采样拭子、保存液容器等感染性废物，需要在多少摄氏度高压灭菌处理后转运处置A.121℃，15minB.121℃，30minC.134℃，10minD.134℃，20min7.对于血清学检测中新冠病毒IgM抗体弱阳性标本，按照2025版SOP要求，正确的处理方式是A.直接报告弱阳性B.重新检测，仍为弱阳性报告弱阳性C.更换试剂品牌重新检测，阴性则报告阴性，仍阳性报告阳性D.采集后3~5天重新采集标本检测，结合核酸结果判定8.病毒核酸扩增实验室分区中，试剂准备区的空气压力要求为A.正压B.负压C.常压D.无要求9.采用血凝试验检测流感病毒时，配制的1%鸡红细胞悬液，需要在多少摄氏度条件下保存，有效期为A.2~8℃，3天B.2~8℃，7天C.-20℃，1个月D.4℃，1个月10.病毒检验实验室人员手部被污染的锐器刺伤后，第一步处理措施是A.立即注射乙肝疫苗、狂犬病疫苗B.从近心端向远心端挤压伤口，挤出损伤处血液C.用75%乙醇消毒伤口D.填写职业暴露登记表上报二、多项选择题（共10题，每题3分，共30分。每题所有选项选对得分，错选、漏选、多选不得分）1.下列病毒标本类型中，运输过程需要维持2~8℃低温，且最长保存时间不超过72小时的标本有A.病毒分离培养用鼻咽拭子标本B.病毒核酸检测用鼻咽拭子标本C.血清学检测用血清标本D.病毒抗原检测用粪便标本2.2025版病毒检验质量控制标准操作规程要求，核酸检测每批次实验必须设置的对照包括A.阴性对照B.阳性对照C.空白对照D.弱阳性质控对照3.下列情况中，病毒核酸检测整批实验结果无效，需要重新检测的情况有A.阴性对照出现典型扩增曲线，Ct值<40B.阳性对照无扩增，Ct值=40C.空白对照出现扩增，Ct值=36D.弱阳性质控检测Ct值超出允许范围4.病毒分离培养操作中，进行细胞传代时需要遵守的SOP要求包括A.传代操作必须在生物安全柜内进行B.倒掉旧培养液后必须用pH7.2的PBS洗涤细胞单层2次C.加入胰蛋白酶消化液后，室温放置时间为1~2min后倒掉多余消化液D.37℃孵育培养后每天观察细胞病变，连续观察不超过10天5.呼吸道合胞病毒抗原快速检测操作中，可能导致假阴性结果的原因有A.标本采集过早，病毒载量低于检测下限B.标本采集后在室温放置超过24小时未处理C.检测时环境温度低于15℃D.采样时拭子沾到大量血液6.生物安全柜日常维护SOP要求，每次使用前后需要进行的操作包括A.用75%医用乙醇擦拭生物安全柜内壁、操作台面B.开启紫外灯照射消毒30minC.开启排风系统运行10min后再进行操作D.更换高效过滤器后必须进行生物安全柜完整性检测7.下列关于病毒核酸检测标本拒收标准，符合2025版SOP要求的有A.标本容器无标识或标识信息与申请单不符B.鼻咽拭子标本未冷藏运输，室温放置超过72小时C.痰标本性状为脓性黏稠，不符合检测要求D.标本量少于要求检测量的1/28.血清学试验中，ELISA法检测病毒抗体时，洗板操作不当会导致的结果异常包括A.假阳性B.假阴性C.本底读数过高D.孔间交叉污染9.新型呼吸道病毒标本处理SOP要求，处理高致病性病毒标本时，个人防护装备必须包括A.N95/KN95防护口罩B.一次性乳胶手套（双层）C.一次性防水隔离衣D.护目镜或防护面屏10.病毒检验实验室原始记录保存SOP要求，需要保存的原始记录内容包括A.标本信息、接收时间、检测时间B.试剂批号、仪器编号、扩增曲线图片C.质量控制结果D.检测人员、审核人员签字三、判断题（共10题，每题1分，共10分。正确打√，错误打×）1.为避免扩增产物污染，病毒核酸检测实验室各区的工作服应当分区放置，不得跨区穿着。2.冻存的病毒分离培养标本，复苏时应当快速融化，融化后立即接种，避免病毒失活。3.进行病毒抗原检测时，剩余的已经打开包装的抗原检测卡可以放在2~8℃冰箱保存，有效期内可继续使用。4.内标检测不出Ct值，说明提取的核酸存在抑制剂，该标本检测结果无效，需要重新检测。5.血清学检测中，ELISA法结果计算时，cutoff值=阴性对照孔平均吸光度值×2.1，该公式符合大多数试剂的标准要求。6.采集水痘疱疹液检测水痘-带状疱疹病毒时，需要先消毒疱疹表面皮肤，再用无菌注射器抽取疱疹液置于无菌离心管中送检。7.病毒检验实验室的医疗废物，可以和普通医疗废物混合后一同处置，不需要单独高压灭菌。8.实时荧光定量PCR反应体系配制时，应当先加模板核酸，再加引物探针和PCR缓冲液，避免气溶胶污染。9.高致病性病毒检测实验结束后，生物安全柜需要开启紫外消毒30分钟，同时排风保持开启状态。10.若同一患者先后两次检测新冠核酸结果均为阴性，即使有明确流行病学史和临床症状，也可以直接排除新冠病毒感染。四、简答题（共3题，每题10分，共30分）1.简述2025版病毒检验SOP中，鼻咽拭子标本采集的标准操作流程。2.简述病毒核酸提取过程中，常见的污染来源及预防控制措施。3.简述实时荧光定量PCR检测病毒核酸后，阳性、阴性、灰区结果的判定标准。五、案例分析题（共1题，10分）某三级医院病毒检验实验室接诊1名有新冠病毒肺炎相关流行病学史、发热伴咳嗽3天的患者，采集鼻咽拭子进行新冠病毒核酸实时荧光定量PCR检测，实验结果为：ORF1ab基因Ct值36.2，N基因Ct值37.1，阴性对照无扩增，阳性对照Ct值分别为26.1和27.0，内标Ct值29.8，符合要求。请结合2025版病毒检验标准操作规程要求，回答以下问题：（1）该结果如何判定？（2）下一步应当如何处理？一、单项选择题1.答案：C解析：根据2024版《医疗机构临床实验室病毒检验管理规范》要求，开展常规高致病性病毒核酸检测工作，最低需要Ⅱ级A2型生物安全柜，能够有效防止气溶胶扩散，保障生物安全，因此选C。2.答案：C解析：2025版病毒标本采集SOP明确要求，病毒标本保存液中青霉素/链霉素混合液的标准终浓度为500U/mL青霉素、500μg/mL链霉素，可有效抑制标本中的细菌、真菌污染，同时不会对病毒活性产生明显影响，因此选C。3.答案：B解析：磁珠法核酸提取SOP要求，洗涤液洗涤后磁珠吸附静置时间为2分钟，保证磁珠充分聚集，避免磁珠流失导致核酸得率下降，因此选B。4.答案：C解析：人横纹肌肉瘤（RD）细胞对肠道病毒EV71敏感性最高，是EV71分离培养的标准指定细胞系，因此选C。5.答案：C解析：2025版实时荧光定量PCRSOP明确要求，内标Ct值大于38时，提示标本存在扩增抑制，核酸提取不合格，需要重新提取核酸后进行检测，因此选C。6.答案：B解析：病毒检验感染性废物的标准高压灭菌条件为121℃30分钟，可完全杀灭包括细菌芽孢在内的所有病原微生物，满足生物安全要求，因此选B。7.答案：D解析：病毒IgM抗体检测容易出现假阳性，对于弱阳性结果，SOP要求间隔3~5天重新采集标本，同时结合核酸检测结果综合判定，避免误报，因此选D。8.答案：A解析：核酸扩增实验室试剂准备区需要保持正压，防止外界含有扩增产物或标本气溶胶的空气进入，避免试剂污染，因此选A。9.答案：A解析：1%鸡红细胞悬液标准保存条件为2~8℃，有效期为3天，超过有效期红细胞会出现溶解，影响血凝试验结果准确性，因此选A。10.答案：B解析：锐器刺伤后第一步处理为立即从近心端向远心端挤压伤口，尽可能挤出污染血液，减少病原体进入体内的载量，之后再进行冲洗消毒、上报处置，因此选B。二、多项选择题1.答案：ABD解析：血清学检测用血清标本可在室温放置不超过24小时，2~8℃可保存7天，-20℃可长期保存，C不符合要求；用于分离培养、核酸检测、抗原检测的活性病毒标本，要求2~8℃运输保存，72小时内处理，因此选ABD。2.答案：ABCD解析：2025版病毒核酸检测质量控制SOP要求，每批次实验必须设置阴性对照、阳性对照、空白对照、弱阳性质控对照四类对照，全面监控实验过程的污染、灵敏度异常等问题，因此选ABCD。3.答案：ABCD解析：阴性对照或空白对照出现扩增提示存在核酸污染，阳性对照无扩增提示试剂或反应体系异常，弱阳性质控超出允许范围提示实验灵敏度不符合要求，以上情况整批结果都需要作废重新检测，因此选ABCD。4.答案：ABD解析：细胞传代时，加入胰蛋白酶后，37℃孵育消化1~2分钟，倒掉多余消化液，而非室温放置1~2分钟，C错误；其余选项均符合病毒分离培养传代操作SOP要求，因此选ABD。5.答案：ABC解析：采样时拭子沾到大量血液会导致假阳性，而非假阴性，D错误；标本采集过早病毒载量不足、标本放置过久病毒抗原降解、环境温度过低导致试剂反应性下降，都会导致假阴性结果，因此选ABC。6.答案：AB解析：更换高效过滤器后的完整性检测是每年定期维护或更换时才需要进行的操作，不属于每次使用前后的操作，D错误；使用前不需要提前开启排风10分钟，C错误；每次使用前后都需要擦拭消毒并开启紫外消毒30分钟，因此选AB。7.答案：ABD解析：脓性痰标本只要处理得当，不影响病毒核酸检测结果，不属于拒收范围，C错误；其余选项均符合标本拒收SOP要求，因此选ABD。8.答案：ACD解析：洗板操作不充分会导致未结合的酶标记物残留，造成本底升高，出现假阳性，还会导致孔间交叉污染；洗板不当不会直接导致假阴性结果，因此选ACD。9.答案：ABCD解析：处理高致病性呼吸道病毒标本时，必须配备全套个人防护装备，包括N95/KN95口罩、双层手套、防水隔离衣、护目镜或防护面屏，因此选ABCD。10.答案：ABCD解析：病毒检验所有原始信息都需要完整记录保存，包括标本基本信息、试剂仪器信息、质控结果、操作人员信息，因此选ABCD。三、判断题1.答案：√解析：跨区穿着工作服会将扩增产物或污染带入试剂区或标本区，造成交叉污染，因此必须分区放置穿着，该描述正确。2.答案：√解析：慢融化会导致病毒衣壳蛋白变性，活性下降，因此冻存病毒标本复苏需要快速融化，融化后立即接种，该描述正确。3.答案：×解析：打开包装的抗原检测卡需要在1小时内使用，未使用的剩余检测卡也不能长时间冷藏保存，容易受潮失效，该描述错误。4.答案：√解析：内参加入到反应体系或裂解液中，若无法检出，提示核酸提取过程存在抑制剂，扩增效率下降，结果不可靠需要重新检测，该描述正确。5.答案：√解析：目前绝大多数ELISA病毒抗体检测试剂的cutoff值计算公式为阴性对照平均吸光度×2.1，当阴性对照吸光度低于0.05时按照0.05计算，该描述正确。6.答案：√解析：采集疱疹液需要先消毒表面皮肤，避免皮肤表面杂菌污染标本，再抽取疱疹液送检，该描述正确。7.答案：×解析：病毒检验产生的感染性废物必须经过高压灭菌处理后，再按照医疗废物流程转运处置，不能和普通医疗废物混合，该描述错误。8.答案：×解析：配制反应体系应当先加试剂，最后再加模板核酸，避免开盖加模板时产生的气溶胶污染已经配好的其他反应体系，该描述错误。9.答案：√解析：实验结束后开启紫外消毒30分钟，同时保持排风开启，可有效排出残留气溶胶，该描述正确。10.答案：×解析：有明确流行病学史和典型临床症状的患者，两次核酸阴性也不能直接排除感染，需要结合血清学抗体检测重新采样复核，该描述错误。四、简答题1.参考答案：鼻咽拭子标本采集的标准操作流程如下：（1）操作前准备：核对患者信息，准备一次性采样拭子、病毒保存液、无菌手套、口罩、手消液；告知患者采集流程，去除鼻腔内杂物，取下口罩。（2分）（2）采集操作：患者头部保持不动，采样者一手扶住患者头部，另一手持拭子沿鼻道底部缓缓伸入，直到鼻咽后壁，停留3~5秒，轻轻旋转拭子2~3圈后缓慢取出，若采集双侧可更换拭子重复操作。（4分）（3）标本处理：将采集后的拭子立即放入含有病毒保存液的采集管中，将拭子头浸入保存液后，在距拭子头1cm处折断拭子，丢弃尾部，旋紧管盖，做好标识。（2分）（4）操作后处理：协助患者戴好口罩，医疗废物按规范处置，送检前将标本置于2~8℃保存，按照要求转运。（2分）2.参考答案：（1）常见污染来源：①扩增产物污染：是最常见的污染来源，既往扩增的核酸产物形成气溶胶扩散污染环境、试剂和耗材；②标本间交叉污染：标本处理过程中开盖操作、移液器枪头更换不及时导致不同标本间核酸交叉污染；③实验室环境引入的外源核酸污染：环境中的病毒核酸残留附着在操作台、移液器表面；④试剂污染：试剂生产过程中引入外源核酸污染。（4分）（2）预防控制措施：①严格执行实验室分区操作，试剂准备、标本制备、扩增分析分区进行，避免跨区操作，使用一次性耗材