循环肿瘤DNA学习培训课件

循环肿瘤DNA医科大学检验医学院《临床分子生物学检验技术》进展篇2018年全球癌症报告全球癌症新发病例达到1810万人，因癌症死亡人数达960万。21.0%48.4%23.4%1.4%5.8%57.3%7%7.3%14.4%20.3%早诊断，早治疗是抗击癌症的最优选择。传统的肿瘤诊断技术传统肿瘤诊断技术病理检验诊断影像学检查病理组织检查（HE，IHC）血清标志物检测（CEA,PSA)核磁共振成像（MRI）正电子成像术（PET-CT）X射线断层扫描术（XRAY,CT）超声波检测（B超）内窥镜（Endoscope）分子病理检测（FISH,RT-PCR,NGS）传统而又崭新的检测技术--“液态活检”液态活检是通过非侵入性的取样方式，获得肿瘤信息，辅助癌症治疗的无损检测技术。与传统的肿瘤诊断技术相比，液态活检具备实时动态监测、克服肿瘤异质性、提供全面检测信息、无创等独特优势,能够实现肿瘤早期诊断的目标。什么是循环肿瘤DNA？循环肿瘤DNA（circulatingtumorDNA，ctDNA），是由肿瘤细胞在坏死或凋亡过程中产生并释放至外周血循环的DNA。正常序列突变序列（肿瘤）基因AACTGCATTGC对于特定的肿瘤，独特的突变就是一个特异的生物标记，通过该标记把肿瘤细胞和正常细胞辨别出来。如何检测？ctDNA检测分子癌变阶段8-10年细胞癌变阶段3-5年癌症早期1-2年癌症中晚期ctDNA检测先进的影像学检查常规肿瘤诊断ctDNA的环境血细胞：RBC,WBC,PLT,免疫细胞游离DNA（cell-freeDNA，cfDNA）循环肿瘤细胞（CTC）循环肿瘤DNA（ctDNA）ctDNA的特征高度碎片化：碎片大小范围分布在从30-250bp，多数在140bp-160bp。含量少且变化大：cfDNA中多数为来自健康细胞的DNA，ctDNA含量为0.01%~10%；半衰期短超早期检测，但缺少组织和器官特异性ctDNA高度片段化片段大小范围为30-250bp，多数在140bp-160bp与核小体相关DNA长度相符，与凋亡机制一致FragmentLengthofCirculatingTumorDNA.PLoSGenet12(7):2016染色质核小体ctDNA的含量少且变化大正常人血浆cfDNA大部分来自于健康细胞不同ctDNA片段的含量占cfDNA0.01%-10%不同种类的肿瘤ctDNA含量不同不同肿瘤ctDNA的含量差异SciTranslMed.

2014Feb19;6(224):224ra24.ctDNA的半衰期有研究表明，ctDNA的半衰期为15min-2.5h，这也是ctDNA可以用来对癌症患者进行治疗效果实时监测的理论依据。CirculatingmutantDNAtoassesstumordynamics.2008.Nat.Med.14:985–90ctDNA的临床应用早期筛查：早期评估罹患肿瘤的风险肿瘤诊断监测治疗效果实时监控疾病进展判断预后动态监测ctDNA的重要应用领域便是“动态监测”。需要“动态监测”的主要是两类人群晚期肿瘤患者：可借助ctDNA动态监测评估治疗效果，及时发现耐药，判断耐药机制，及早调整治疗方案；早中期肿瘤患者：治疗后采用ctDNA动态监测，其灵敏度高于影像学检查，有助于监控疾病的发展。晚期肿瘤患者：组织+ctDNA联合检测vs单纯组织检测ctDNA与组织进行联合检测可以提高患者靶向用药相关基因的总体检出率，与ctDNA和组织单独检测相比分别提高7%和15.3%早中期肿瘤患者：接受治疗后ctDNA监测+影像学--AM.Newman,etal.NatMed2014ctDNA的分析方法目前ctDNA的分析方法主要有三种：以ARMS为代表的定量PCR技术数字PCR技术：ddPCR