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犌犅/犜40251—2021

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BCIP:5ï4ð3ñòìíóôõö(5bromo4chloro3indolylphosphateptoluidinesalt)

DAFA:÷øùšúûüýþÿúí!7"(davidson’salcoholformalinaceticacidfixative)

DIG:#$‚(digoxigenin)

EDTANa2·2H2O:%\&ú%õ'úí%((Ethylenediaminetetraaceticacid,disodiumdi

hydrate)

MgCl2·6H2O:)\&ð(*(magnesiumchloridehexahydrate)

NaCl:ð(((sodiumchloride)

Na2HPO4·12H2O:+%\&ìí,%((sodiumphosphatedibasicdodecahydrate)

Na3C6H5O7·2H2O:%\&-.í/((sodiumcitratedihydrate)

NBT:ð(01'234(4Nitrobluetetrazoliumchloride)

KH2PO4:ìí%,5(potassiumphosphatemonobasic)

KCl:ð(5(potassiumchloride)

PBS:ìíö67"(phosphatebuffersalinebuffer)

SSC:89í(67"(salinesodiumcitratebuffer)

Tris:/:ó1;1ó<(Tris[hydroxymethyl]aminomethane)

犌犅/犜40251—2021

TritonX100:=ú%û‚1ô1>(Polyethyleneglycoltertoctylphenylether)

5ABCDE

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5.3Na3C6H5O7·2H2O。

5.4KCl。

5.5Na2HPO4·12H2O。

5.6KH2PO4。

5.7Tris。

5.8TritonX100。

5.9MgCl2·6H2O。

5.10EDTANa2·2H2O。

5.11NBT。

5.12BCIP。

5.13NuîK。

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犌犅/犜40251—2021

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5.452×SSC:$A.7Ÿ

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5.5367"Ⅱ:$A.17Ÿ

5.5467"Ⅲ:$A.19Ÿ

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犌犅/犜40251—2021

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Ô)、95%úû(2Ô,10s/Ô)、80%úû(2Ô,10s/Ô)、50%úû(1Ô,10s),3Ų¹H\742Ô

(*Ô3min)。

8.2.2€âúû´€â­®¯°¬P,5Ç500μL100μg/mLNuîKÙ",67*+ßà€âÿ,

37℃¯°15min。

8.2.38ßà€âÿ0NuîKÙ"59,3Åè»ÕÖó!74℃00.4%ó–Ù"P5min。

8.2.4:ÁÃ,²2×SSCÕ4ßà€â5min。

8.2.58ßà€âúû´€â­®¯°¬P,;6500μLœ67"â*+ßà€â,42℃¯°

60min。

8.2.6;6500μL<2ng/μLDIG&h0b=cdíe—œÞ&"â*+ßà€â,þ³90℃~

95℃ú=´âGÿ­Á10min。

8.2.7èßà€âþ³ú.0yøÿ>!1min。

犌犅/犜40251—2021

8.2.8´€â­®¯°¬=42℃ï°16h~18h。

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(5min,:Á)、0.5×SSC(10min,42℃)、0.5×SSC(10min,42℃)Õ4ßà€â,3Åèßà€âûÖ

67"Ⅰ(1min~2min,:Á)。

8.2.106500μL67"Ⅱ?Íßà€â,37℃Á²30min。

8.2.11²67"ⅡèAPDIG@Aâ0.75U/μL(1μL0.75U/μLAPDIG671mL67"Ⅱ

P),;6250μLâ*+ßà€â,´®ìP37℃Á²3h。

8.2.12²67"Ⅱ(2Ô,5min/Ô,:Á)、67"Ⅲ(2Ô,5min/Ô,:Á)Õ4ßà€â。

8.2.135500μLx”"³*+ßà€âÿ,´BC³:Áûþ1h~3h,DgEFx”GH,MsÈ

˜%Úwxx”£zȘ%IJ«KZL@…MÈx”,NOPQx”。

8.2.148ßà€âþ³67"ⅣP15minPQRÔ。

8.2.15ßà€âÓÔ´¹H\(1Ô,10s)、0.5%WXYZY(1Ô,1min)、95%úû(3Ô,10s/Ô)、

•\úû(3Ô,10s/Ô)、%óô(4Ô,10s/Ô)PÕ4。

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犌犅/犜40251—2021

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犃.72×犛犛犆

20×SSC100mL

\900mL

犌犅/犜40251—2021

犃.81×犛犛犆

20×SSC50mL

\950mL

犃.90.5×犛犛犆

20×SSC50mL

\1950mL

犃.10犘犅犛

KCl0.2g

NaCl8g

Na2HPO4·12H2O2.9g

KH2PO40.2g

6\7>â1000mL

犃.1110犿犵/犿犔}~犓

NuîK100mg

6\7>â10mL

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犃.12100μ犵/犿犔}~犓

10mg/mLNuîK0.25mL

PBS24.75mL

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犃.130.4%€

ó–(37%)5.4mL

\500mL

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20×SSC10mL

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Tris121.1g

NaCl87.7g

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犌犅/犜40251—2021

6\7>â1000mL

$kHTlm,4℃i½。

犃.16‚ƒuⅠ

10×67"Ⅰ100mL

\900mL

Þg,0.45μm˜ÑƘ?m,4℃i½。

犃.17‚ƒuⅡ

TritonX1000.3g

Š‹\~2mL

67"Ⅰ100mL

´60℃~80℃\²PÙj,H‘vw,xâyzÙj。4℃?i½2&。

犃.1810ׂƒuⅢ

Tris121.1g

NaCl58.4g

6\Ùjâ800mL

²ŒHClàápHâ9.5

MgCl2·6H2O101.6g

6\7>â1000mL

Þg,0.45μm˜ÑƘ?m,4℃i½,ZL{|Å}~。

犃.19‚ƒuⅢ

10×67"Ⅲ100mL

\900mL

Þg,0.45μm˜ÑƘ?m,4℃i½,ZL{|Å}~。

犃.2010ׂƒuⅣ

Tris12.1g

EDTANa2·2H2O3.7g

6\Ùj,^7>â1000mL

²HClàpHâ8.0,$klm。4℃i½。

犃.21‚ƒuIV

10×67"IV100mL

\900mL

Þg,0.45μm˜ÑƘ?m。4℃i½。

犃.2210%yv„w

=úSû(L˜/QR30000~70000)10g

6\Ùjâ100mL

€ÙjÅ,/n10mL/p,-20℃i½。

犌犅/犜40251—2021

犃.23…†u

67"Ⅲ90mL

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10%=úSû10mL

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NBT4.5μL

BCIP3.5μL

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WXYZY2.5g

\500mL

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犃.25犖犅犜‹Su

NBT100mg

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BCIP100mg

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犃.2910犿犵/犿犔’“犇犖犃

†‡DNA250mg

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´100℃\²P6†10min,NOû³y²P>!,/n³•m¡pP,-20℃­½。D²q´

100℃\²P6†5min,3Å>!。

犌犅/犜4

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