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文档简介
犌犅/犜40251—2021
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Ⅰ
书
犌犅/犜40251—2021
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AP:ëÈìíî(alkalinephosphatase)
BCIP:5ï4ð3ñòìíóôõö(5bromo4chloro3indolylphosphateptoluidinesalt)
DAFA:÷øùúûüýþÿúí!7"(davidson’salcoholformalinaceticacidfixative)
DIG:#$(digoxigenin)
EDTANa2·2H2O:%\&ú%õ'úí%((Ethylenediaminetetraaceticacid,disodiumdi
hydrate)
MgCl2·6H2O:)\&ð(*(magnesiumchloridehexahydrate)
NaCl:ð(((sodiumchloride)
Na2HPO4·12H2O:+%\&ìí,%((sodiumphosphatedibasicdodecahydrate)
Na3C6H5O7·2H2O:%\&-.í/((sodiumcitratedihydrate)
NBT:ð(01'234(4Nitrobluetetrazoliumchloride)
KH2PO4:ìí%,5(potassiumphosphatemonobasic)
KCl:ð(5(potassiumchloride)
PBS:ìíö67"(phosphatebuffersalinebuffer)
SSC:89í(67"(salinesodiumcitratebuffer)
Tris:/:ó1;1ó<(Tris[hydroxymethyl]aminomethane)
1
犌犅/犜40251—2021
TritonX100:=ú%û1ô1>(Polyethyleneglycoltertoctylphenylether)
5ABCDE
5.1?@AÚBw,´/CPÒD²ºEF/CG0¡¢3HI\£JK\£LMG·0\。
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5.12BCIP。
5.13NuîK。
5.14O=P;í(L/QR25000)。
5.15=úSû(L/QR30000~70000)。
5.16öíTUV3。
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5.18[\~uNu。
5.19=]^400。
5.20=úS_`<a360。
5.21b=cdíeMSX1347,fÄ:5’ATGTGTTGGTGACGCTAACCG3’,&Ëg²DIG
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2
犌犅/犜40251—2021
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3
犌犅/犜40251—2021
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Ô)、95%úû(2Ô,10s/Ô)、80%úû(2Ô,10s/Ô)、50%úû(1Ô,10s),3Ų¹H\742Ô
(*Ô3min)。
8.2.2âúû´â®¯°¬P,5Ç500μL100μg/mLNuîKÙ",67*+ßàâÿ,
37℃¯°15min。
8.2.38ßàâÿ0NuîKÙ"59,3Åè»ÕÖó!74℃00.4%óÙ"P5min。
8.2.4:ÁÃ,²2×SSCÕ4ßàâ5min。
8.2.58ßàâúû´â®¯°¬P,;6500μL67"â*+ßàâ,42℃¯°
60min。
8.2.6;6500μL<2ng/μLDIG&h0b=cdíeÞ&"â*+ßàâ,þ³90℃~
95℃ú=´âGÿÁ10min。
8.2.7èßàâþ³ú.0yøÿ>!1min。
4
犌犅/犜40251—2021
8.2.8´â®¯°¬=42℃ï°16h~18h。
8.2.9ÓÔ²67"2×SSC(5min,:Á)、2×SSC(5min,:Á)、1×SSC(5min,:Á)、1×SSC
(5min,:Á)、0.5×SSC(10min,42℃)、0.5×SSC(10min,42℃)Õ4ßàâ,3ÅèßàâûÖ
67"Ⅰ(1min~2min,:Á)。
8.2.106500μL67"Ⅱ?Íßàâ,37℃Á²30min。
8.2.11²67"ⅡèAPDIG@Aâ0.75U/μL(1μL0.75U/μLAPDIG671mL67"Ⅱ
P),;6250μLâ*+ßàâ,´®ìP37℃Á²3h。
8.2.12²67"Ⅱ(2Ô,5min/Ô,:Á)、67"Ⅲ(2Ô,5min/Ô,:Á)Õ4ßàâ。
8.2.135500μLx"³*+ßàâÿ,´BC³:Áûþ1h~3h,DgEFxGH,MsÈ
%Úwxx£zÈ%IJ«KZL@ MÈx,NOPQx。
8.2.148ßàâþ³67"ⅣP15minPQRÔ。
8.2.15ßàâÓÔ´¹H\(1Ô,10s)、0.5%WXYZY(1Ô,1min)、95%úû(3Ô,10s/Ô)、
\úû(3Ô,10s/Ô)、%óô(4Ô,10s/Ô)PÕ4。
8.2.16STU3VWÅ,X62XPÈ,?â。
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5
犌犅/犜40251—2021
qr犃
(,35)
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6\7>â950mL
Þg,:Ái½。
犃.450%vw
95%úû500mL
6\7>â950mL
Þg,:Ái½。
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O=P;í(L/QR25000)5mg
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àápHâ7.0
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\900mL
6
犌犅/犜40251—2021
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20×SSC50mL
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犃.90.5×犛犛犆
20×SSC50mL
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KCl0.2g
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/n³mKopP(0.25mL/p),-20℃ý。
犃.12100μ犵/犿犔}~犓
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²qrg
,Þg,4℃½û。
犃.130.4%
ó(37%)5.4mL
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êsq?tuD²4Ô,²qó!。
犃.1401u
20×SSC10mL
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7
犌犅/犜40251—2021
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MgCl2·6H2O101.6g
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10×67"Ⅲ100mL
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10×67"IV100mL
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8
犌犅/犜40251—2021
犃.23 u
67"Ⅲ90mL
öíTUV324mg
10%=úSû10mL
4℃½
²q´*1mLÿÞ&"P6Ö:
NBT4.5μL
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WXYZY2.5g
\500mL
8¶¥Ù³\P,Æ。:Ái½。
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NBT100mg
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,-20℃i½。
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BCIP100mg
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,-20℃i½。
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[\~uNu0.4g
=]^4000.4g
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í=^25g
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犃.2910犿犵/犿犔犇犖犃
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\25mL
èDNA(ö6Ö\P,²1xâ[Ùj。²6]09§Ru¼Ô。
´100℃\²P610min,NOû³y²P>!,/n³m¡pP,-20℃½。D²q´
100℃\²P65min,3Å>!。
9
犌犅/犜4
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