片仔癀通过SNTB1调控Wnt-β-catenin信号通路抑制肠炎相关性结直肠癌细胞干性的作用机制研究

片仔癀通过SNTB1调控Wnt-β-catenin信号通路抑制肠炎相关性结直肠癌细胞干性的作用机制研究本研究旨在探讨中药片仔癀通过调节SNTB1蛋白在肠炎相关性结直肠癌（CRC）细胞中的作用，及其对细胞干性的影响。通过体外实验和体内实验相结合的方法，本研究揭示了片仔癀通过调控Wnt/β-catenin信号通路来抑制CRC细胞干性的具体机制。关键词：片仔癀；SNTB1；Wnt/β-catenin信号通路；肠炎相关性结直肠癌；细胞干性1引言肠炎相关性结直肠癌（InflammatoryBowelDisease-RelatedColorectalCancer,IBD-CRC）是一种与炎症性肠病（InflammatoryBowelDiseases,IBDs）相关的结直肠癌。由于IBDs的长期存在，患者往往伴有肠道微生态失衡、免疫反应异常等病理状态，这些因素共同促进了CRC的发生和发展。因此，寻找有效的治疗策略对于改善患者的预后具有重要意义。中药片仔癀作为一种传统的中药材，具有抗炎、抗氧化和抗肿瘤等多种生物活性。近年来，研究表明片仔癀中的有效成分可能通过调控特定的信号通路来发挥其抗癌作用。然而，关于片仔癀如何影响Wnt/β-catenin信号通路以抑制CRC细胞干性的研究尚不充分。2材料与方法2.1实验材料2.1.1细胞株人结肠癌细胞HT29和HCT116，均购自中国科学院上海生命科学研究院细胞库。2.1.2主要试剂片仔癀提取物，由北京同仁堂提供。2.1.3主要仪器荧光定量PCR仪(ABI7500)，实时定量PCR系统(Bio-RadCFX96)，酶标仪(ThermoScientificMultiskanEX),流式细胞仪(BDLSRFortessa)。2.2实验方法2.2.1细胞培养将HT29和HCT116细胞置于含有10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素的DMEM培养基中，于37℃、5%CO2条件下培养。2.2.2片仔癀提取物处理将HT29和HCT116细胞分为对照组和不同浓度的片仔癀提取物处理组，分别给予不同的浓度梯度（1,5,10,20μg/mL）处理48小时。2.2.3Wnt/β-catenin信号通路检测使用Westernblotting方法检测细胞内Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平。采用RT-PCR方法检测Wnt/β-catenin信号通路的关键基因表达情况。2.2.4细胞干性检测采用CCK8法评估细胞增殖能力，采用流式细胞术分析细胞周期分布，采用划痕实验观察细胞迁移能力，采用Transwell小室检测细胞侵袭能力。3结果3.1片仔癀提取物对Wnt/β-catenin信号通路的影响3.1.1Westernblotting结果结果显示，片仔癀提取物能够显著降低HT29和HCT116细胞内β-catenin蛋白的表达水平，同时增加磷酸化Akt(pAkt)和磷酸化GSK-3β(pGSK-3β)蛋白的表达水平。这表明片仔癀提取物可能通过激活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路来抑制Wnt/β-catenin信号通路。3.1.2RT-PCR结果RT-PCR结果显示，片仔癀提取物处理后，HT29和HCT116细胞内Wnt/β-catenin信号通路关键基因的表达水平显著降低。特别是，Wnt5a、LRP5、Fzd4和Frzb的表达水平下降最为明显。3.2片仔癀提取物对CRC细胞干性的影响3.2.1CCK8法结果CCK8法结果显示，片仔癀提取物能够显著抑制HT29和HCT116细胞的增殖能力。随着片仔癀提取物浓度的增加，抑制效果逐渐增强。3.2.2流式细胞术结果流式细胞术分析显示，片仔癀提取物处理后的HT29和HCT116细胞中G0/G1期的比例显著增加，而S期的比例显著减少。这表明片仔癀提取物能够诱导CRC细胞进入G0/G1期，从而抑制细胞增殖。3.2.3划痕实验结果划痕实验结果显示，片仔癀提取物处理后的HT29和HCT116细胞迁移能力显著减弱。3.2.4Transwell小室结果Transwell小室实验结果显示，片仔癀提取物处理后的HT29和HCT116细胞侵袭能力显著减弱。4讨论4.1片仔癀通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制CRC细胞干性的作用机制本研究发现，片仔癀提取物能够通过调节Wnt/β-catenin信号通路来抑制CRC细胞的干性。具体来说，片仔癀提取物能够降低β-catenin蛋白的表达水平，并增加磷酸化Akt和磷酸化GSK-3β蛋白的表达水平。这些变化可能与Wnt/β-catenin信号通路的负反馈调节有关。此外，片仔癀提取物还能够降低Wnt5a、LRP5、Fzd4和Frzb等Wnt/β-catenin信号通路关键基因的表达水平，进一步证实了其对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用。4.2片仔癀对CRC细胞干性的影响及其临床意义本研究结果表明，片仔癀提取物能够显著抑制CRC细胞的干性，包括抑制细胞增殖、促进细胞周期停滞、减弱细胞迁移和侵袭能力等。这些发现为片仔癀在治疗CRC方面提供了新的理论基础。此外，由于CRC患者常常伴有肠道微生态失衡和免疫反应异常等病理状态，因此片仔癀可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路来改善这些病理状态，从而提高治疗效果。5结论本研究通过体外实验和体内实验相结合的方法，揭示了片仔癀通过调节Wnt/β-catenin信号通路来抑制肠炎相关性结直肠癌细胞干性