2024-2025学年北京西城区高二(下)期末生物试卷含答案

2024-2025学年北京市西城区高二（下）期末生物试卷一、本部分共15题，每题2分，共30分。在每题列出的四个选项中，选出最符合题目要求的一项。1．（2分）某地区2013﹣2021年生态足迹及生态承载力的变化如图所示。下列叙述错误的是（）A．2021年人类活动带来的环境压力大于2013年 B．2015﹣2021年间出现了生态赤字 C．进行生态修复可提高生态承载力 D．应大力开垦草原、围湖造田以创造生态盈余2．（2分）蟹﹣稻复合生态系统的食物网结构如图所示，相关叙述正确的是（）A．图中全部生物共同构成生态系统 B．浮游动物只能从浮游植物获取能量 C．蟹捕食水稻的竞争者有利于水稻生长 D．该生态系统的生物量金字塔上宽下窄3．（2分）2012年秋长江口水域生态系统各营养级输入能量如表。相关叙述正确的是（）营养级输入能量/（t•hm﹣2•a﹣1）Ⅰ2466Ⅱ950.00Ⅲ30.34Ⅳ4.16Ⅴ0.49A．输入该系统的总能量为各营养级输入能量之和 B．用于次级消费者生长发育、繁殖等生命活动的能量为30.34t•hm﹣2•a﹣1 C．第一与第二营养级之间能量传递效率大于20% D．输入各营养级的能量减去呼吸作用消耗的能量为该营养级的生物量4．（2分）以喜集群的鲫幼鱼为对象，检测化学信息素对鲫幼鱼群体运动速度的影响，结果如图。相关叙述错误的是（）A．信息素通过水体传播，被鲫幼鱼的信息受体接收 B．鲫幼鱼接收的信息都来自生态系统中的其他生物 C．注入食物信息素导致鱼群的群体运动速度下降 D．信息传递能够调节生命活动和生物的种间关系5．（2分）祁连山国家公园是我国十大国家公园之一，主要职责是保护祁连山生物多样性和自然生态系统原真性、完整性。下列叙述错误的是（）A．实验区供参观游览，体现了生物多样性的间接价值 B．搬迁核心区牧民有利于生态保护 C．就地保护是对生物多样性最有效的保护 D．将濒危动物迁移到繁育中心进行保护属于易地保护6．（2分）下列关于利用传统发酵技术制作食品的叙述正确的是（）A．制作葡萄酒时需要对材料用具严格灭菌 B．制作泡菜时需密封泡菜坛以创造无氧环境 C．醋酸菌只能以葡萄糖为底物进行发酵产醋 D．腐乳的制作属于单一菌种发酵7．（2分）尿素分解菌诱导碳酸钙沉积技术已被广泛用于生物封堵和生物粘结。在选育性状优良尿素分解菌的过程中，做法错误的是（）A．利用以尿素为唯一氮源的培养基筛选尿素分解菌 B．在平板中添加酚红作为指示剂以鉴定尿素分解菌 C．利用平板划线法对土壤中的尿素分解菌进行计数 D．使用基因工程改造尿素分解菌以提高其诱导能力8．（2分）石油成分复杂，主要由多种烃类混合而成。将由多种石油降解菌组成的混合菌群添加到石油污染土壤中，检测其修复效果（如图）。相关推测不合理的是（）A．石油为石油降解菌提供碳源和能源 B．将多种石油降解菌构建成混合菌群不利于提高降解效果 C．无机盐溶液可促进石油降解菌繁殖 D．土壤pH和温度影响石油降解菌的降解效果9．（2分）采用“叶肉原生质体+胚性愈伤组织原生质体”融合模式进行育种，获得了柑橘种间杂种植株和少量同源四倍体植株。相关叙述错误的是（）A．采用酶解法获得原生质体时需要无菌操作 B．植物激素的浓度和比例影响愈伤组织形成和分化 C．只有杂种融合细胞能发育形成完整植株 D．采用原生质体融合可克服柑橘远缘杂交不亲和10．（2分）将适应贴壁培养的aMDCK细胞进行驯化，获得适应悬浮培养的sMDCK细胞。相同条件下两种细胞的生长差异如图，对其分析错误的是（）A．aMDCK细胞的生长不受接触抑制的影响 B．168h后sMDCK细胞密度下降可能与营养不足、有害代谢产物积累有关 C．sMDCK细胞更有可能实现高密度培养 D．驯化可能改变了MDCK细胞的基因表达11．（2分）以甲型流感病毒NA蛋白为抗原，采用杂交瘤技术制备单克隆抗体。相关叙述错误的是（）A．需要先用NA蛋白免疫小鼠 B．进行抗体类型筛选后的B淋巴细胞才可用于诱导融合 C．经选择培养的杂交瘤细胞还需克隆化培养和抗体检测 D．该单克隆抗体可用于甲型流感病毒的检测12．（2分）L﹣天冬酰胺酶是治疗儿童白血病的有效药物，但在临床应用中常引起过敏反应。通过蛋白质工程，将细菌来源的L﹣天冬酰胺酶某位置赖氨酸更换为丙氨酸后，免疫原性下降2.5倍。此过程中不需要（）A．依据预期功能设计L﹣天冬酰胺酶的高级结构 B．推测预期的L﹣天冬酰胺酶应有的氨基酸序列 C．改造编码L﹣天冬酰胺酶的野生型基因或合成新基因 D．直接对L﹣天冬酰胺酶进行操作以替换相应氨基酸13．（2分）免疫PCR是一种抗原检测技术，其原理如图所示。下列相关叙述错误的是（）A．图中两种抗体与抗原不同位点特异性结合 B．PCR产物的量与目标抗原的含量正相关 C．检测不同抗原需要用不同的DNA分子 D．该技术特别适用于极微量抗原的检测14．（2分）关于“DNA的粗提取与鉴定”和“DNA片段的扩增及电泳鉴定”两个实验的叙述，正确的是（）A．可利用DNA溶于酒精而蛋白质不溶于酒精来提取DNA B．用二苯胺试剂鉴定DNA时不需要加热 C．PCR反应体系中需加入解旋酶以解开DNA双链 D．在凝胶中DNA分子的迁移速率与DNA分子的大小有关15．（2分）为使生物技术更好地造福人类，我国政府反对够（）A．进口转基因产品 B．生产和使用生物武器 C．利用基因编辑技术治疗癌症 D．对治疗性克隆进行有效监管和严格审查二、本部分共6题，共70分。16．（10分）生物入侵会危害本地生态系统。为更好地保护生物多样性，以本土植物海三棱藨草和外来入侵物种互花米草为材料，研究了生物多样性与入侵抵抗力之间的关系。（1）生物多样性对于维持生态系统稳定性具有重要意义。生物多样性包括、物种多样性和。（2）有证据表明，物种丰富度越高的生态系统，抵御外来物种入侵的能力往往也越强。对解蜘此现象的一种解释是：多样性高的生态系统中，本土生物占据了较多的可用，不能为外来生物提供生存所需条件。（3）选择8种不同基因型的海三棱藨草，设置基因型种类为1种、2种、4种和8种几个处理。首先在花盆中种植海三棱藨草，10个月后去除海三棱藨草，将一半土壤灭菌处理，另一半不灭菌（图1）。再用土壤培养互花米草，4个月后检测其生物量，结果如图2。①研究者用种植过海三棱藨草的土壤来培养互花米草，使两种植物不直接接触，这种隔离处理是为了排除。②实验结果表明。17．（12分）红壤和黄棕壤是我国重要的耕地资源，但普遍存在酸化问题，且有机质含量较低。玄武岩储量丰富。研究者探究了添加玄武岩粉对土壤碳含量和植物生长的影响。（1）生态系统中，碳元素是在生物群落与之间不断循环的。岩石中的硅酸盐与大气/土壤中的CO2和水反应，生成的H2CO3溶于土壤水中，并最终经由地表径流输送到海洋，这体现了碳循环的性。（2）以红壤和黄棕壤为对象，设置对照（CK）和添加玄武岩粉（B）2个处理。9月底播种苋菜，成熟后测定苋菜生物量、土壤pH，结果如图。实验结果显示，表明添加玄武岩粉促进红壤苋菜的生长，而对黄棕壤苋菜的生长无明显促进作用。产生这种差异的原因可能是。（3）采用荧光定量PCR测定土壤细菌含量。提取土壤总DNA，根据细菌16SrRNA基因序列设计引物。在PCR反应体系中加入过量荧光染料SG，SG结合双链DNA后发出荧光信号（SG不与单链DNA结合，游离的SG不发出荧光）。检测达到一定荧光强度时的PCR循环次数（Ct值），结果表明B处理较CK显著增加了红壤细菌含量，对黄棕壤无显著影响。对此过程的叙述正确的有。A.实验测定的土壤细菌包括不同种类的细菌B.与引物互补的序列在不同种细菌间高度相似C.需加入4种核糖核苷酸作为PCR的原料D.红壤B处理Ct值小于对照组Ct值（4）检测发现，添加玄武岩粉对红壤有机碳含量无显著影响。请解释原因。18．（12分）白色念珠菌是一种机会性致病真菌，可引起持续的浅表感染或危及生命的系统性感染。CHS3是其最主要的几丁质合酶，科研人员探究了CHS3影响白色念珠菌致病性的机制。（1）分离白色念珠菌时，可采用法将样品接种到添加青霉素、链霉素的SDA平板上，培养2～3天，平板上长出肉眼可见的，再通过形态学、生化反应等进行鉴定。（2）利用FLP介导的特异位点重组技术构建CHS3缺失菌株（chs3Δ/Δ），过程如图1。①将第1次基因替换后的菌液接种于含有的平板进行选择培养，获得单拷贝缺失菌株。②此过程中两次通过FLP介导的重组敲除诺尔丝菌素抗性基因，目的是。（3）白色念珠菌是一种多态性真菌，可呈酵母态或菌丝态。酵母态一菌丝态转变对其致病性有重要作用，菌丝态更有利于白色念珠菌入侵。对白色念珠菌在小鼠感染模型中的致病性进行检测，发现注射chs3Δ/Δ突变体的小鼠肾脏损伤面积显著小于对照组。将白色念珠菌接种到平板上，观察菌丝生长情况，结果如图2。图2显示，野生型白色念珠菌菌丝长度明显chs3Δ/Δ突变体。综合以上信息，可做出推测。19．（12分）学习以下材料，回答（1）～（4）题。基因捕获大多数真核基因的编码序列（外显子）被非编码序列（内含子）隔开。真核基因转录成前体mRNA，前体mRNA中的内含子通过剪接被去除，外显子连接形成成熟的mRNA（图1）。几乎所有真核基因在剪接位点都有一致性序列，即内含子5'端剪接供体位点SD为RG/GURAGU，3'端剪接受体位点SA为NCAG/G（R代表喋吟，N代表任意一种碱基）。剪接体通过识别剪接位点，将内含子去除。科研人员根据真核基因表达的特点开发出基因捕获的方法。图2为一种基因捕获载体的工作原理图。将基因捕获载体导入体外培养的胚胎干细胞（ES细胞），当载体插入到内源基因X的内含子中时，可激活报告基因表达。筛选出基因中插入捕获载体的ES细胞，提取RNA并合成cDNA。分离出有报告基因信息的cDNA，测序即可获得X基因的外显子序列信息。（1）启动子是识别和结合的部位，有启动子才能驱动转录。（2）图2中重组DNA转录、剪接后的产物有。A.B.C.D.（3）根据基因捕获载体的结构，说明如何筛选出成功捕获到内源基因的ES细胞。（4）筛选出成功捕获内源基因的ES细胞后，提取RNA，经过程获得cDNA库。依据序列设计探针，获取与探针互补的cDNA，测序获得X基因外显子序列信息。20．（14分）外泌体是细胞分泌的内含多种生物活性分子的囊泡。研究表明，干细胞外泌体（Exos）有抗衰老功能。为研究其抗衰老机理，以成纤维细胞和小鼠为材料开展了实验。（1）在体外培养成纤维细胞时，需要保证环境条件。对贴壁生长的细胞进行传代培养时，需要的材料用具有（多选）。A.胰蛋白酶溶液B.细胞培养液C.PEGD.CO2培养箱（2）成纤维细胞在传代30次（PDL30）时处于年轻状态，在PDL50时完全衰老。用Exos处理成纤维细胞，72h后检测细胞中DNA含量（图1），以及细胞周期抑制因子基因Cdkmla和Ccng2的表达（图2）。①细胞周期停滞是衰老细胞的基本特征。图1结果表明Exos可逆转衰老细胞的细胞周期停滞，促进细胞增殖，依据是。②综合图1和图2结果推测，Exos使衰老细胞恢复活力的机理是。（3）实验表明，Exos中的miR﹣302b（一种非编码小RNA）在抗衰老中发挥了关键作用。miR﹣302b可与靶基因mRNA的3'非翻译区（3UTR）结合，诱导其降解或抑制mRNA的，从而调控靶基因表达。（4）双荧光素酶报告基因技术可用于检验miR﹣302b的靶基因。其中，萤火虫荧光素酶可催化荧光素氧化发出黄绿光，海肾荧光素酶可催化腔肠素氧化发出蓝光。将图3所示含有两种荧光素酶基因的表达载体与miR﹣302b共同转入成纤维细胞系，一段时间后裂解细胞，分别检测两种荧光的强度。并以海肾荧光素酶基因作为内参基因，来校正不同组之间细胞数目、裂解效率的差异。①为研究Cdknla是否为miR﹣302b的靶基因，研究者克隆出Cdknla基因中3UTR序列对应片段，将其插入载体中，插入位置应为图3中的位点。②实验结果为，说明Cdknla是miR﹣302b的靶基因。21．（10分）科研人员发现一种新的基因组编辑工具一桥接RNA（bRNA）。bRNA能够与供体序列和靶标序列特异性结合，在IS重组酶作用下，将供体DNA与靶标DNA重组（图1）。（1）bRNA与供体序列和靶标序列特异性结合，遵循原则。（2）研究者提出假设，bRNA可与IS重组酶特异性结合。为验证假设，用不同浓度的特定序列bRNA与一定浓度的IS重组酶混合，检测与bRNA结合的重组酶的比例。对照组的RNA应为。（3）在体外实验中，验证了利用bRNA进行DNA重组的条件。研究者根据靶标序列和供体序列设计引物（图2）进行PCR扩增，以检验重组是否发生，应选择的引物组合有。（4）为了进一步验证bRNA的功能，在大肠杆菌中建立了双质粒重组报告系统（图3）。请在图3中正确位置补充画出GFP基因的启动子，使供体质粒与靶标质粒在发生重组时，可检测到GFP信号；不发生重组，则没有GFP信号。

2024-2025学年北京市西城区高二（下）期末生物试卷参考答案与试题解析一、本部分共15题，每题2分，共30分。在每题列出的四个选项中，选出最符合题目要求的一项。1．（2分）某地区2013﹣2021年生态足迹及生态承载力的变化如图所示。下列叙述错误的是（）A．2021年人类活动带来的环境压力大于2013年 B．2015﹣2021年间出现了生态赤字 C．进行生态修复可提高生态承载力 D．应大力开垦草原、围湖造田以创造生态盈余【分析】生态足迹：又叫生态占用，指在现有技术条件下，维持某一人口单位（一个人、一个城市、一个国家或全人类）生存所需的生产资源和吸纳废物的土地及水域面积。生态足迹越大，代表人类所需的资源越多，对生态和环境的影响越大。【解答】解：A、2021年生态足迹远大于2013年，生态足迹越大，代表人类所需的资源越多，对生态和环境的影响越大，故2021年人类活动带来的环境压力大于2013年，A正确；B、当生态承载力大于生态足迹就会出现生态盈余，当生态承载力低于时出现生态赤字，2015﹣2021年间，生态承载力小于生态足迹，即出现了生态赤字，B正确；C、开展生态修复，可提高环境承载力，能增加当地生物多样性，C正确；D、大力开垦草原、围湖造田会导致生态赤字，D错误；故选：D。【点评】本题考查生态足迹的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。2．（2分）蟹﹣稻复合生态系统的食物网结构如图所示，相关叙述正确的是（）A．图中全部生物共同构成生态系统 B．浮游动物只能从浮游植物获取能量 C．蟹捕食水稻的竞争者有利于水稻生长 D．该生态系统的生物量金字塔上宽下窄【分析】1、食物链是生产者和消费者之间的关系，第一营养级为植物，数量最多，第二营养级为植食动物，数量次之，营养级越高，生物数量越少。2、生态系统中的物质和能量会沿着食物链和食物网流动的，能量最终来源于太阳光能，绿色植物通过光合作用固定太阳能，储存在有机物中。【解答】解：A、生态系统是由生物群落和无机环境构成，图中的全部生物不能构成生态系统，A错误；B、浮游动物能从浮游植物和碎屑获取能量，B错误；C、蟹捕食水稻的竞争者，水稻可以获得更多的资源，如阳光、无机盐等，故有利于水稻生长，C正确；D、由图可知，圆面积代表相对生物量的多少，该生态系统的生物量金字塔上窄下宽，D错误。故选：C。【点评】本题主要考查食物网，意在考查考生理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力，能够运用所学知识，对生物学问题作出准确的判断，难度适中。3．（2分）2012年秋长江口水域生态系统各营养级输入能量如表。相关叙述正确的是（）营养级输入能量/（t•hm﹣2•a﹣1）Ⅰ2466Ⅱ950.00Ⅲ30.34Ⅳ4.16Ⅴ0.49A．输入该系统的总能量为各营养级输入能量之和 B．用于次级消费者生长发育、繁殖等生命活动的能量为30.34t•hm﹣2•a﹣1 C．第一与第二营养级之间能量传递效率大于20% D．输入各营养级的能量减去呼吸作用消耗的能量为该营养级的生物量【分析】除最高营养级外，各营养级生物同化的能量有四个去向：一部分流向下一营养级、一部分流向分解者、一部分用于自身呼吸消耗和一部分储存（未利用）。【解答】解：A．输入生态系统的总能量是生产者固定的太阳能，即营养级Ⅰ的输入能量，A错误；B．次级消费者（营养级Ⅲ）的输入能量30.34t•hm﹣2•a﹣1是其同化量，而用于生长发育、繁殖的能量需减去呼吸消耗，但题目未提供呼吸消耗数据，无法直接得出该值，B错误；C．第一营养级（Ⅰ）到第二营养级（Ⅱ）的能量传递效率为（950÷2466）×100%≈38.5%，大于20%，C正确；D．输入各营养级的能量（同化量）减去呼吸消耗为净生产量，用于生长发育繁殖，这部分能量还有部分流向分解者和下一营养级，剩下的是现存有机物的生物量，D错误。故选：C。【点评】本题考查能量流动的相关内容，要求学生能结合所学知识正确作答。4．（2分）以喜集群的鲫幼鱼为对象，检测化学信息素对鲫幼鱼群体运动速度的影响，结果如图。相关叙述错误的是（）A．信息素通过水体传播，被鲫幼鱼的信息受体接收 B．鲫幼鱼接收的信息都来自生态系统中的其他生物 C．注入食物信息素导致鱼群的群体运动速度下降 D．信息传递能够调节生命活动和生物的种间关系【分析】1、生态系统中信息的种类（1）物理信息：生态系统中的光、声、温度、湿度、磁力等，通过物理过程传递的信息，如蜘蛛网的振动频率。（2）化学信息：生物在生命活动中，产生了一些可以传递信息的化学物质，如植物的生物碱、有机酸，动物的性外激素等。（3）行为信息：动物的特殊行为，对于同种或异种生物也能够传递某种信息，如孔雀开屏。2、信息传递在生态系统中的作用（1）个体：生命活动的正常进行，离不开信息的作用。（2）种群：生物种群的繁衍，离不开信息传递。（3）群落和生态系统：能调节生物的种间关系，维持生态系统的稳定和平衡。【解答】解：A、生态系统中的信息传递需要有信息产生的部位——信息源；有信息传播的媒介——信道；有信息接收的生物或其部位——信息受体。结合题干信息可知，信息素通过水体传播，被鲫幼鱼的信息受体接收，A正确；B、鲫幼鱼接收的信息可来自生态系统中的其他生物，也可来自群体内部，B错误；C、分析数据图可知，注入食物信息素导致鱼群的群体运动速度下降，C正确；D、信息传递能够调节生命活动，还能调节生物的种间关系，维持生态系统的稳定和平衡，D正确。故选：B。【点评】本题考查生态系统中的信息传递，识记生态系统信息传递的种类、信息传递的作用以及信息传递的应用，就会熟练解答本题。5．（2分）祁连山国家公园是我国十大国家公园之一，主要职责是保护祁连山生物多样性和自然生态系统原真性、完整性。下列叙述错误的是（）A．实验区供参观游览，体现了生物多样性的间接价值 B．搬迁核心区牧民有利于生态保护 C．就地保护是对生物多样性最有效的保护 D．将濒危动物迁移到繁育中心进行保护属于易地保护【分析】保护生物多样性的措施：我国生物多样性的保护，可以概括为就地保护和易地保护两大类。就地保护是指在原地对被保护的生态系统或物种建立自然保护区以及风景名胜区等，这是对生物多样性最有效的保护。易地保护是指把保护对象从原地迁出，在异地进行专门保护。例如建立植物园、动物园以及濒危动植物繁育中心等。【解答】解：A、旅游观赏价值属于生物多样性的直接价值，A错误；B、搬迁核心区牧民，减少人类对祁连山国家公园的干扰，有利于生态保护，B正确；C、就地保护是指在原地对被保护的生态系统或物种建立自然保护区以及风景名胜区等，是对生物多样性最有效的保护，C正确；D、易地保护是指把保护对象从原地迁出，在异地进行专门保护，如建立濒危动植物繁育中心，D正确。故选：A。【点评】本题考查生物多样性的价值和保护措施等相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。6．（2分）下列关于利用传统发酵技术制作食品的叙述正确的是（）A．制作葡萄酒时需要对材料用具严格灭菌 B．制作泡菜时需密封泡菜坛以创造无氧环境 C．醋酸菌只能以葡萄糖为底物进行发酵产醋 D．腐乳的制作属于单一菌种发酵【分析】1、果醋制作中起到主要作用的微生物是醋酸菌，醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动，其代谢类型属于异养需氧型。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解为醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。醋酸菌的最适生长温度为30～35℃。2、果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。【解答】解：A、在制作葡萄酒时材料用具是不需要严格灭菌的，发酵的无氧环境和产生的酒精会抑制大部分微生物的生长繁殖，此外酿制葡萄酒的菌种来自葡萄本身携带的酵母菌，故不能对发酵原料进行灭菌，A错误；B、乳酸菌是厌氧菌，制作泡菜时需密封泡菜坛以创造无氧环境，B正确；C、当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解为醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，C错误；D、腐乳发酵是由多种微生物共同发酵的食品，主要菌种是毛霉，D错误。故选：B。【点评】本题考查发酵技术的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。7．（2分）尿素分解菌诱导碳酸钙沉积技术已被广泛用于生物封堵和生物粘结。在选育性状优良尿素分解菌的过程中，做法错误的是（）A．利用以尿素为唯一氮源的培养基筛选尿素分解菌 B．在平板中添加酚红作为指示剂以鉴定尿素分解菌 C．利用平板划线法对土壤中的尿素分解菌进行计数 D．使用基因工程改造尿素分解菌以提高其诱导能力【分析】微生物常见的接种的方法：A、平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。B、稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。【解答】解：A、通常用以尿素为唯一氮源的培养基筛选分解尿素的细菌，A正确；B、由于细菌分解尿素的过程中合成脲酶，脲酶将尿素分解成氨，会使培养基碱性增强，pH升高，平板加入酚红指示剂，指示剂变红，B正确；C、平板划线法不能计数，C错误；D、使用基因工程改造分解尿素细菌的基因，可以提高其分解尿素的能力，D正确。故选：C。【点评】本题考查微生物的分离和培养等知识，要求学生识记微生物的分离和鉴定的相关知识，考查学生对尿素分解菌的分离和鉴定实验的理解。8．（2分）石油成分复杂，主要由多种烃类混合而成。将由多种石油降解菌组成的混合菌群添加到石油污染土壤中，检测其修复效果（如图）。相关推测不合理的是（）A．石油为石油降解菌提供碳源和能源 B．将多种石油降解菌构建成混合菌群不利于提高降解效果 C．无机盐溶液可促进石油降解菌繁殖 D．土壤pH和温度影响石油降解菌的降解效果【分析】1、培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。2、接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。【解答】解：A、石油降解菌是异养微生物，石油可以为石油降解菌提供碳源和能源，A正确；B、将多种石油降解菌构建成混合菌群有利于提高降解效果，B错误；C、无机盐是微生物生长繁殖不可缺少的营养物质，其溶液可促进石油降解菌繁殖，C正确；D、微生物都有各自的最适温度和pH，土壤pH和温度影响石油降解菌的降解效果，D正确。故选：B。【点评】本题主要考查微生物培养基的相关知识，意在强化学生对相关知识的识记和应用。9．（2分）采用“叶肉原生质体+胚性愈伤组织原生质体”融合模式进行育种，获得了柑橘种间杂种植株和少量同源四倍体植株。相关叙述错误的是（）A．采用酶解法获得原生质体时需要无菌操作 B．植物激素的浓度和比例影响愈伤组织形成和分化 C．只有杂种融合细胞能发育形成完整植株 D．采用原生质体融合可克服柑橘远缘杂交不亲和【分析】1、植物体细胞杂交的意义：克服了远缘杂交不亲和的障碍。2、植物细胞工程技术的应用：植物繁殖的新途径（包括微型繁殖，作物脱毒、人工种子等）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用）、细胞产物的工厂化生产。【解答】解：A、去除细胞壁获得有活力的原生质体的过程，可用酶解法（用纤维素酶和果胶酶处理），整个过程需要在无菌条件下进行，A正确；B、生长素和细胞分裂素的浓度及比例相当时有利于愈伤组织形成，生长素和细胞分裂素的比例较大时有利于愈伤组织分化为芽，生长素和细胞分裂素的比例较小时有利于愈伤组织分化为根，B正确；C、由题干信息可知，育种过程获得了少量同源四倍体植株，说明同种融合细胞能发育形成完整植株，C错误；D、植物体细胞杂交（原生质体融合）克服了远缘杂交不亲和的障碍，D正确。故选：C。【点评】本题考查了植物细胞工程技术的应用，意在考查考生构建知识网络的能力，难度适中。10．（2分）将适应贴壁培养的aMDCK细胞进行驯化，获得适应悬浮培养的sMDCK细胞。相同条件下两种细胞的生长差异如图，对其分析错误的是（）A．aMDCK细胞的生长不受接触抑制的影响 B．168h后sMDCK细胞密度下降可能与营养不足、有害代谢产物积累有关 C．sMDCK细胞更有可能实现高密度培养 D．驯化可能改变了MDCK细胞的基因表达【分析】动物细胞培养条件：（1）无菌无毒环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理；在细胞培养液中添加一定量的抗生素。定期更换培养液，防止细胞代谢产物积累对自身造成危害。（2）营养：所需营养物质与体内基本相同，例如需要有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然成分。（3）温度和pH值：哺乳动物多以36.5±0.5℃为宜，多数细胞生存的适宜pH为7.2～7.4。（4）气体环境：通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含95%空气加5%CO2的混合气体的培养箱中进行培养。【解答】解：A、aMDCK细胞适应贴壁培养，当细胞增殖到一定数量会出现接触抑制现象，A错误；B、168h后，由于细胞培养液营养不足、同时有害代谢产物积累，可导致sMDCK细胞密度下降，B正确；C、sMDCK细胞适应悬浮培养，与aMDCK细胞相比，有可能实现更高密度培养，C正确；D、适应贴壁培养的aMDCK细胞进行驯化，获得适应悬浮培养的sMDCK细胞，其原因可能是驯化改变了MDCK细胞的基因表达，D正确。故选：A。【点评】本题考查动物细胞培养的相关知识，意在考查学生的识记和理解能力，难度不大。11．（2分）以甲型流感病毒NA蛋白为抗原，采用杂交瘤技术制备单克隆抗体。相关叙述错误的是（）A．需要先用NA蛋白免疫小鼠 B．进行抗体类型筛选后的B淋巴细胞才可用于诱导融合 C．经选择培养的杂交瘤细胞还需克隆化培养和抗体检测 D．该单克隆抗体可用于甲型流感病毒的检测【分析】单克隆抗体：由单个B淋巴细胞进行无性繁殖形成的细胞系所产生出的化学性质单一、特异性强的抗体。【解答】解：A．制备单克隆抗体时，需用特定抗原（NA蛋白）免疫小鼠，小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞，A正确；B．B淋巴细胞在诱导融合前未经过抗体类型筛选，抗体筛选是在细胞融合后对杂交瘤细胞进行的，B错误；C．选择培养后的杂交瘤细胞需通过克隆化培养（保证单细胞来源）和抗体检测，以筛选出能分泌目标抗体的细胞群，C正确；D．单克隆抗体特异性强，可与甲型流感病毒的NA蛋白结合，因此可用于病毒检测，D正确；故选：B。【点评】本题考查单克隆抗体的相关内容，要求学生能结合所学知识正确作答。12．（2分）L﹣天冬酰胺酶是治疗儿童白血病的有效药物，但在临床应用中常引起过敏反应。通过蛋白质工程，将细菌来源的L﹣天冬酰胺酶某位置赖氨酸更换为丙氨酸后，免疫原性下降2.5倍。此过程中不需要（）A．依据预期功能设计L﹣天冬酰胺酶的高级结构 B．推测预期的L﹣天冬酰胺酶应有的氨基酸序列 C．改造编码L﹣天冬酰胺酶的野生型基因或合成新基因 D．直接对L﹣天冬酰胺酶进行操作以替换相应氨基酸【分析】蛋白质工程的基本途径：从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）以上是蛋白质工程特有的途径；以下按照基因工程的一般步骤进行。【解答】解：A、确定预期蛋白质功能，即研发药效性强但免疫性弱的L天冬酰胺酶，下一步应是设计出符合要求的L﹣天冬酰胺酶的高级结构，A正确；B、根据设计的符合要求的L﹣天冬酰胺酶的高级结构，推测L﹣天冬酰胺酶的高级结构应有的氨基酸序列，B正确，C、根据L﹣天冬酰胺酶的高级结构应有的氨基酸序列，对编码L﹣天冬酰胺酶的野生型基因进行改造，C正确；D、蛋白质工程不能直接替换相应氨基酸来改造蛋白质，直接操作是对基因进行改造，D错误。故选：D。【点评】本题考查蛋白质工程的相关知识，解答本题的关键是掌握蛋白质工程的基本途径，比较基础，属于考纲识记层次的考查。13．（2分）免疫PCR是一种抗原检测技术，其原理如图所示。下列相关叙述错误的是（）A．图中两种抗体与抗原不同位点特异性结合 B．PCR产物的量与目标抗原的含量正相关 C．检测不同抗原需要用不同的DNA分子 D．该技术特别适用于极微量抗原的检测【分析】免疫PCR是一种抗原检测系统，将一段已知序列的DNA片段标记到抗体上，通过抗原抗体的特异性识别并结合，抗体会和固定抗体、抗生素形成复合物“固定抗体﹣抗生素﹣抗体”，再用PCR方法将这段DNA进行扩增，通过检测PCR产物的量，即可推知固定抗体上吸附的抗生素的量。【解答】解：A、从图中可以看到有捕获抗体和检测抗体﹣DNA偶联物都能与目标抗原结合，这两种抗体与抗原的不同位点特异性结合，A正确；B、因为PCR扩增的是与抗原结合的检测抗体﹣DNA偶联物中的DNA，目标抗原含量越高，与之结合的检测抗体﹣DNA偶联物越多，PCR产物的量也就越多，所以PCR产物的量与目标抗原的含量正相关，B正确；C、检测抗体﹣DNA偶联物中的抗体与抗原特异性结合，可用相同的DNA分子与不同的抗体偶联，C错误；D、该技术通过PCR对与抗原结合的DNA进行扩增，能够将极微量的抗原通过DNA的大量扩增而被检测出来，特别适用于极微量抗原的检测，D正确。故选：C。【点评】本题考查PCR技术的相关内容，要求学生能结合所学知识正确作答。14．（2分）关于“DNA的粗提取与鉴定”和“DNA片段的扩增及电泳鉴定”两个实验的叙述，正确的是（）A．可利用DNA溶于酒精而蛋白质不溶于酒精来提取DNA B．用二苯胺试剂鉴定DNA时不需要加热 C．PCR反应体系中需加入解旋酶以解开DNA双链 D．在凝胶中DNA分子的迁移速率与DNA分子的大小有关【分析】DNA不溶于酒精，而某些蛋白质溶于酒精。在沸水浴的条件下，DNA与二苯胺反应呈现蓝色。在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关。【解答】解：A、DNA不溶于酒精溶液，某些蛋白质则溶于酒精溶液，利用这一原理，可以初步分离DNA与蛋白质，A错误；B、二苯胺试剂鉴定DNA需在沸水浴条件下显蓝色，需要加热，B错误；C、PCR通过高温（95℃左右）使DNA变性解链，无需解旋酶，C错误；D、在凝胶电泳中，DNA分子的大小影响迁移速率，小分子迁移更快，大分子更慢，D正确。故选：D。【点评】本题考查“DNA的粗提取与鉴定”和“DNA片段的扩增及电泳鉴定”两个实验，要求学生能结合所学知识正确作答。15．（2分）为使生物技术更好地造福人类，我国政府反对够（）A．进口转基因产品 B．生产和使用生物武器 C．利用基因编辑技术治疗癌症 D．对治疗性克隆进行有效监管和严格审查【分析】1、中国签署《禁止生物武器公约》，声明在任何情况下不发展、不生产、不储存生物武器，并反对生物武器及其技术和设备的扩散。2、中国政府：禁止生殖性克隆人，坚持四不原则（不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验）。【解答】解：A、对待转基因技术要趋利避害，不能因噎废食，A错误；B、我国政法禁止生产、储存生物武器，B正确；C、我国政法不反对利用基因编辑技术治疗癌症，C错误；D、中国政府禁止生殖性克隆人，但不反对治疗性克隆，但对治疗性克隆进行有效监管和严格审查，D错误。故选：B。【点评】本题比较基础，考查生物技术研究与开发的有关政策和法规，只要考生了解中国政法对相关技术的态度即可正确答题，属于考纲识记层次的考查。二、本部分共6题，共70分。16．（10分）生物入侵会危害本地生态系统。为更好地保护生物多样性，以本土植物海三棱藨草和外来入侵物种互花米草为材料，研究了生物多样性与入侵抵抗力之间的关系。（1）生物多样性对于维持生态系统稳定性具有重要意义。生物多样性包括基因（遗传）多样性、物种多样性和生态系统多样性。（2）有证据表明，物种丰富度越高的生态系统，抵御外来物种入侵的能力往往也越强。对解蜘此现象的一种解释是：多样性高的生态系统中，本土生物占据了较多的可用生态位，不能为外来生物提供生存所需条件。（3）选择8种不同基因型的海三棱藨草，设置基因型种类为1种、2种、4种和8种几个处理。首先在花盆中种植海三棱藨草，10个月后去除海三棱藨草，将一半土壤灭菌处理，另一半不灭菌（图1）。再用土壤培养互花米草，4个月后检测其生物量，结果如图2。①研究者用种植过海三棱藨草的土壤来培养互花米草，使两种植物不直接接触，这种隔离处理是为了排除两种植物之间的直接竞争对互花米草生长的影响。②实验结果表明基因型多样性可通过影响土壤生物来增强本地物种对外来生物入侵的抵抗力。【分析】1、生物多样性是指在一定时间和一定地区所有生物物种及其遗传变异和生态系统的复杂性总称，它包括基因（遗传）多样性、物种多样性和生态系统多样性三个层次。2、一个物种在群落中的地位或作用，包括所处的空间位置，占用资源的情况，以及与其他物种的关系等，称为这个物种的生态位。【解答】解：（1）生物多样性包括基因（遗传）多样性、物种多样性和生态系统多样性三个层次。（2）生态位是指一个物种在群落中的地位或作用，包括所处的空间位置，占用资源的情况，以及与其他物种的关系等。物种丰富度越高的生态系统，抵御外来物种入侵的能力往往也越强。对解蜘此现象的一种解释是：多样性高的生态系统中，本土生物占据了较多的可用生态位，不能为外来生物提供生存所需条件。（3）①研究者用种植过海三棱藨草的土壤来培养互花米草，使两种植物不直接接触，这种隔离处理是为了排除两种植物之间的直接竞争对互花米草生长的影响。②分析题图数据可知，实验结果表明基因型多样性可通过影响土壤生物来增强本地物种对外来生物入侵的抵抗力。故答案为：（1）基因（遗传）多样性；生态系统多样性（2）生态位（3）①两种植物之间的直接竞争对互花米草生长的影响②基因型多样性可通过影响土壤生物来增强本地物种对外来生物入侵的抵抗力【点评】本题考查生物多样性的相关知识，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力；能理论联系实际，综合运用所学知识解决自然界中的一些生物学问题，难度适中。17．（12分）红壤和黄棕壤是我国重要的耕地资源，但普遍存在酸化问题，且有机质含量较低。玄武岩储量丰富。研究者探究了添加玄武岩粉对土壤碳含量和植物生长的影响。（1）生态系统中，碳元素是在生物群落与非生物环境之间不断循环的。岩石中的硅酸盐与大气/土壤中的CO2和水反应，生成的H2CO3溶于土壤水中，并最终经由地表径流输送到海洋，这体现了碳循环的全球性。（2）以红壤和黄棕壤为对象，设置对照（CK）和添加玄武岩粉（B）2个处理。9月底播种苋菜，成熟后测定苋菜生物量、土壤pH，结果如图。实验结果显示红壤B处理生物量显著大于CK，黄棕壤B处理生物量与CK无显著差异，表明添加玄武岩粉促进红壤苋菜的生长，而对黄棕壤苋菜的生长无明显促进作用。产生这种差异的原因可能是红壤初始pH较低，苋菜生长差，添加玄武岩粉显著提高了红壤pH，促进苋菜生长。（3）采用荧光定量PCR测定土壤细菌含量。提取土壤总DNA，根据细菌16SrRNA基因序列设计引物。在PCR反应体系中加入过量荧光染料SG，SG结合双链DNA后发出荧光信号（SG不与单链DNA结合，游离的SG不发出荧光）。检测达到一定荧光强度时的PCR循环次数（Ct值），结果表明B处理较CK显著增加了红壤细菌含量，对黄棕壤无显著影响。对此过程的叙述正确的有ABD。A.实验测定的土壤细菌包括不同种类的细菌B.与引物互补的序列在不同种细菌间高度相似C.需加入4种核糖核苷酸作为PCR的原料D.红壤B处理Ct值小于对照组Ct值（4）检测发现，添加玄武岩粉对红壤有机碳含量无显著影响。请解释原因。添加玄武岩粉促进红壤苋菜生长，增加土壤有机碳的输入；添加玄武岩粉也促进土壤细菌生长，有机物分解增加；输入与分解相抵消，土壤有机碳无明显变化【分析】生态系统物质循环是指组成生物体的C、H、O、N、P、S等基本元素，在生态系统的生物群落与无机环境之间不断进行着从无机环境到生物群落，又从生物群落回到无机环境的循环过程。像碳循环中，碳元素以CO2等形式在生物群落（生产者固定、消费者传递、分解者分解）和无机环境（大气、海洋等）间循环；氮循环里，氮元素以多种形式在生物与非生物环境间转换，物质循环具有全球性、循环性等特点，保障生态系统的物质平衡和功能稳定。【解答】解：（1）生态系统中，碳元素是在生物群落与非生物环境之间不断循环的。岩石中碳经一系列过程到海洋，体现碳循环的全球性。（2）从图中可以看出红壤B处理生物量显著大于CK，黄棕壤B处理生物量与CK无显著差异，表明添加玄武岩粉促进红壤苋菜的生长，而对黄棕壤苋菜的生长无明显促进作用。产生这种差异的原因可能是红壤初始pH较低，苋菜生长差，添加玄武岩粉显著提高了红壤pH，促进苋菜生长。（3）A、土壤细菌有多种，测定的是不同种类细菌总和，A正确；B、根据细菌16SrRNA基因序列设计引物，说明该序列在不同种细菌间高度相似，B正确；C、PCR原料是dNTP（脱氧核糖核苷酸），不是核糖核苷酸，C错误；D、红壤B处理细菌含量高，达到一定荧光强度循环次数少，Ct值小，D正确。故选：ABD。（4）检测发现，添加玄武岩粉对红壤有机碳含量无显著影响，可能是添加玄武岩粉促进红壤苋菜生长，增加土壤有机碳的输入；添加玄武岩粉也促进土壤细菌生长，有机物分解增加；输入与分解相抵消，土壤有机碳无明显变化。故答案为：（1）非生物环境全球（2）红壤B处理生物量显著大于CK，黄棕壤B处理生物量与CK无显著差异红壤初始pH较低，苋菜生长差，添加玄武岩粉显著提高了红壤pH，促进苋菜生长（3）ABD（4）添加玄武岩粉促进红壤苋菜生长，增加土壤有机碳的输入；添加玄武岩粉也促进土壤细菌生长，有机物分解增加；输入与分解相抵消，土壤有机碳无明显变化【点评】本题考查生态系统的相关内容，要求学生能结合所学知识正确作答。18．（12分）白色念珠菌是一种机会性致病真菌，可引起持续的浅表感染或危及生命的系统性感染。CHS3是其最主要的几丁质合酶，科研人员探究了CHS3影响白色念珠菌致病性的机制。（1）分离白色念珠菌时，可采用平板划线（稀释涂布平板）法将样品接种到添加青霉素、链霉素的SDA平板上，培养2～3天，平板上长出肉眼可见的菌落，再通过形态学、生化反应等进行鉴定。（2）利用FLP介导的特异位点重组技术构建CHS3缺失菌株（chs3Δ/Δ），过程如图1。①将第1次基因替换后的菌液接种于含有诺尔丝菌素的平板进行选择培养，获得单拷贝缺失菌株。②此过程中两次通过FLP介导的重组敲除诺尔丝菌素抗性基因，目的是排除诺尔丝菌素抗性对后续实验结果造成的干扰；方便第二次敲除依旧可以选择诺尔丝菌素抗性作为筛选标记。（3）白色念珠菌是一种多态性真菌，可呈酵母态或菌丝态。酵母态一菌丝态转变对其致病性有重要作用，菌丝态更有利于白色念珠菌入侵。对白色念珠菌在小鼠感染模型中的致病性进行检测，发现注射chs3Δ/Δ突变体的小鼠肾脏损伤面积显著小于对照组。将白色念珠菌接种到平板上，观察菌丝生长情况，结果如图2。图2显示，野生型白色念珠菌菌丝长度明显大于chs3Δ/Δ突变体。综合以上信息，可做出推测CHS3通过促进白色念珠菌的菌丝生长提高其致病性。【分析】微生物的纯化培养包括培养基的制备和纯化微生物两个阶段，纯化微生物时常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。【解答】解：（1）微生物常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。微生物在固体培养基上生长，可以形成肉眼可见的菌落。（2）①利用FLP介导的特异位点重组技术构建CHS3缺失菌株（chs3Δ/Δ）的过程中，诺尔丝菌素抗性基因作为标记基因，该基因表达的产物使相应的“目的菌”对诺尔丝菌素具有抗性，所以欲获得单拷贝缺失菌株，需要将第1次基因替换后的菌液接种于含有诺尔丝菌素的平板进行选择培养。②两次通过FLP介导的重组敲除诺尔丝菌素抗性基因可以排除诺尔丝菌素抗性对后续实验结果造成的干扰；方便第二次敲除依旧可以选择诺尔丝菌素抗性作为筛选标记。（3）图2种野生型白色念珠菌菌丝长度明显大于chs3Δ/Δ突变体，而野生型白色念珠菌能够合成CHS3，但chs3Δ/Δ突变体却丧失了合成CHS3的能力，推测CHS3通过促进白色念珠菌的菌丝生长提高其致病性。故答案为：（1）平板划线（稀释涂布平板）菌落（2）①诺尔丝菌素②排除诺尔丝菌素抗性对后续实验结果造成的干扰；方便第二次敲除依旧可以选择诺尔丝菌素抗性作为筛选标记（3）大于CHS3通过促进白色念珠菌的菌丝生长提高其致病性【点评】本题考查微生物培养的相关内容，要求学生能结合所学知识正确作答。19．（12分）学习以下材料，回答（1）～（4）题。基因捕获大多数真核基因的编码序列（外显子）被非编码序列（内含子）隔开。真核基因转录成前体mRNA，前体mRNA中的内含子通过剪接被去除，外显子连接形成成熟的mRNA（图1）。几乎所有真核基因在剪接位点都有一致性序列，即内含子5'端剪接供体位点SD为RG/GURAGU，3'端剪接受体位点SA为NCAG/G（R代表喋吟，N代表任意一种碱基）。剪接体通过识别剪接位点，将内含子去除。科研人员根据真核基因表达的特点开发出基因捕获的方法。图2为一种基因捕获载体的工作原理图。将基因捕获载体导入体外培养的胚胎干细胞（ES细胞），当载体插入到内源基因X的内含子中时，可激活报告基因表达。筛选出基因中插入捕获载体的ES细胞，提取RNA并合成cDNA。分离出有报告基因信息的cDNA，测序即可获得X基因的外显子序列信息。（1）启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，有启动子才能驱动转录。（2）图2中重组DNA转录、剪接后的产物有BC。A.B.C.D.（3）根据基因捕获载体的结构，说明如何筛选出成功捕获到内源基因的ES细胞。用含新霉素的培养基进行选择培养，获得含有捕获载体的细胞。再利用lacZ的显色反应，筛选出发生蓝色反应的ES细胞，即为成功捕获到内源基因的ES细胞（4）筛选出成功捕获内源基因的ES细胞后，提取RNA，经逆转录过程获得cDNA库。依据LacZ基因序列设计探针，获取与探针互补的cDNA，测序获得X基因外显子序列信息。【分析】基因的表达是指基因通过mRNA指导蛋白质的合成，包括遗传信息的转录和翻译两个阶段。转录是以DNA的一条链为模板，按照碱基互补配对原则，在细胞核内合成RNA的过程。翻译是以mRNA为模板，按照密码子和氨基酸之间的对应关系，在核糖体上合成具有一定氨基酸顺序的蛋白质的过程。【解答】解：（1）启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，有启动子才能驱动转录。（2）基因捕获载体左侧含有3'端剪接受体位点SA，当载体插入到内源基因X的内含子中时，内含子会被去除，报告基因表达会被激活，外显子1和LacZ基因一起被转录，由于LacZ基因上有终止子，neo基因单独被转录。故选：BC。（3）用含新霉素的培养基进行选择培养，获得含有捕获载体的细胞。再利用lacZ的显色反应，筛选出发生蓝色反应的ES细胞，可以筛选出成功捕获到内源基因的ES细胞。（4）RNA经逆转录合成cDNA；要获取含报告基因（LacZ基因）信息的cDNA，依据LacZ基因序列设计探针，进而测序得X基因外显子序列。故答案为：（1）RNA聚合酶（2）BC（3）用含新霉素的培养基进行选择培养，获得含有捕获载体的细胞。再利用lacZ的显色反应，筛选出发生蓝色反应的ES细胞，即为成功捕获到内源基因的ES细胞（4）逆转录LacZ基因【点评】本题考查基因表达的相关内容，要求学生能结合所学知识正确作答。20．（14分）外泌体是细胞分泌的内含多种生物活性分子的囊泡。研究表明，干细胞外泌体（Exos）有抗衰老功能。为研究其抗衰老机理，以成纤维细胞和小鼠为材料开展了实验。（1）在体外培养成纤维细胞时，需要保证环境条件无菌、无毒。对贴壁生长的细胞进行传代培养时，需要的材料用具有ABD（多选）。A.胰蛋白酶溶液B.细胞培养液C.PEGD.CO2培养箱（2）成纤维细胞在传代30次（PDL30）时处于年轻状态，在PDL50时完全衰老。用Exos处理成纤维细胞，72h后检测细胞中DNA含量（图1），以及细胞周期抑制因子基因Cdkmla和Ccng2的表达（图2）。①细胞周期停滞是衰老细胞的基本特征。图1结果表明Exos可逆转衰老细胞的细胞周期停滞，促进细胞增殖，依据是与PDL30﹣对照组相比，PDL50﹣对照组处于S期细胞的比例较少；PDL50﹣Exos处理组S期细胞比例明显多于PDL50﹣对照。②综合图1和图2结果推测，Exos使衰老细胞恢复活力的机理是xos抑制了衰老细胞中Cdkn1a和Ccng2的表达，进而逆转细胞周期停滞。（3）实验表明，Exos中的miR﹣302b（一种非编码小RNA）在抗衰老中发挥了关键作用。miR﹣302b可与靶基因mRNA的3'非翻译区（3UTR）结合，诱导其降解或抑制mRNA的翻译，从而调控靶基因表达。（4）双荧光素酶报告基因技术可用于检验miR﹣302b的靶基因。其中，萤火虫荧光素酶可催化荧光素氧化发出黄绿光，海肾荧光素酶可催化腔肠素氧化发出蓝光。将图3所示含有两种荧光素酶基因的表达载体与miR﹣302b共同转入成纤维细胞系，一段时间后裂解细胞，分别检测两种荧光的强度。并以海肾荧光素酶基因作为内参基因，来校正不同组之间细胞数目、裂解效率的差异。①为研究Cdknla是否为miR﹣302b的靶基因，研究者克隆出Cdknla基因中3UTR序列对应片段，将其插入载体中，插入位置应为图3中的A位点。②实验结果为表达载体中转入了3'UTR序列对应片段的成纤维细胞系黄绿光/蓝光的比值显著小于对照组（未转入3'UTR序列对应片段的成纤维细胞系），说明Cdknla是miR﹣302b的靶基因。【分析】体外培养细胞需要无菌无毒、适宜的营养、温度和PH、使用含95%空气和5%CO2的混合气体。【解答】解：