《药物分析与检验技术》课件-杂环类药物特殊杂质的检验方法

··········································情境八：杂环类药物的分析任务三：杂环类药物特殊杂质的检验杂环类药物特殊杂质的检验一、吡啶类药物特殊杂质的检验方法1.TLC法Ch.P中异烟肼及其注射，采用TLC法中杂质对照法。（一）异烟肼中游离肼的检查对照品：硫酸肼0.20mg/ml（相当于游离肼50μg）薄层板：硅胶（用羧甲基纤维素钠溶液制备）展开剂：异丙醇-丙酮（3：2）显色剂：乙醇制对-二甲氨基苯甲醛试液检测结果：供试品主斑点前方，不得显黄色斑点一、吡啶类药物特殊杂质的检验方法

BP的检查方法供试品溶液制备:取异烟肼1.0g，加丙酮-水（1:1）制成10ml。对照溶液制备:取硫酸肼50mg，加水50ml使溶解后，加丙酮稀释至100ml；量取10ml，加供试品溶液0.2ml，加丙酮-水（1:1）稀释至100ml。薄层板：硅胶GF254薄层板。展开剂：醋酸乙酯-丙酮－甲醇－水（50:20:20:10）。显色剂：乙醇制对-二甲氨基苯甲醛试液。一、吡啶类药物特殊杂质的检验方法于254nm紫外光下检测，供试品中的杂质斑点强度应小于对照溶液中异烟肼色谱斑点；再喷以对-二甲氨基苯甲醛溶液，并在日光下检视，对照溶液中硫酸肼斑点的强度大于供试液中的杂质斑点。检测结果一、吡啶类药物特殊杂质的检验方法JP（14）采用样品中加水杨醛的乙醇溶液观察混浊的方法来控制游离肼的限量。此法专属性差，因异烟肼(慢)和硫酸肼均生成腙而析出沉淀。2．比浊法一、吡啶类药物特殊杂质的检验方法3.差示分光光度法肼异烟肼+对-二甲氨基苯甲醛黄色缩合物对-二甲氨基苯甲醛连氮（λmax=456nm有最大吸收）形成的缩合产物对-二甲氨基苄叉（于λmax=456nm波长处无吸收）可在456nm波长处测定并计算二者的差示吸收度ΔA456，同时以对照品比较法计算游离肼含量。一、吡啶类药物特殊杂质的检验方法具体测定法对照品溶液供试品溶液硫酸肼CR＝1μg/ml5ml+丙酮λmax=456nm测A1+对-二甲氨基苯甲醛(ΔA456＝A2－A1)ΔAR5mlλmax=456nm测A2异烟肼C＝2mg/ml游离肼CX=ΔAs/AR×CR1份+丙酮λmax=456nm测A1+对-二甲氨基苯甲醛(ΔA456＝A2－A1)ΔAs2份λmax=456nm测A2一、吡啶类药物特殊杂质的检验方法因有关杂质的化学结构不明，故Ch.p采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查。(二)尼可刹米中有关杂质检查一、吡啶类药物特殊杂质的检验方法（三）

硝苯地平中有关物质检查硝苯地平遇光分子内部发生光化学歧化作用，降解为4-（2-硝基苯基）-2,6-二甲基吡啶-3,5-二羧酸二甲酯（A）和4-（2-亚硝基苯基）-2,6-二甲基吡啶-3,5-二羧酸二甲酯（B）。其化学结构如下:一、吡啶类药物特殊杂质的检验方法供试液Ⅰ和Ⅱ的制备有关杂质对照品液Ⅰ和Ⅱ的制备色谱条件与灵敏度调节具体方法

填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶

流动相：甲醇-水（3：2）；检测波长：235nm。取对照品溶液Ⅱ20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使杂质A和B组分色谱峰的峰高为满量程的20%；杂质A和B组分之间，杂质B与硝苯地平之间的分离度均符合规定。一、吡啶类药物特殊杂质的检验方法4.有关物质检测取供试液Ⅰ和对照液Ⅱ各20μl，分别进样记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试液Ⅰ如出现与对照液Ⅱ中杂质A和B相对应的峰，其峰面积不得大于对照液Ⅱ中杂质A和B的峰面积；如出现除杂质A和B以外的其他杂质峰，其峰面积不得大于对照液Ⅱ中硝苯地平的峰面积；各杂质总量不得大于0.5%。供试液Ⅰ中小于对照液Ⅱ中硝苯地平峰面积的10%以下的杂质峰忽略不计。二、喹啉类药物特殊杂质的检验方法（一）硫酸奎宁中特殊杂质检查酸度：主要控制药物中酸性杂质。用pH计测定，pH为5.7～6.6。氯仿-乙醇中不溶物：主要控制药物中不溶性杂质或无机盐类。其他金鸡纳碱：主要控制硫酸奎宁中其他生物碱，因没有合适的对照品，因此采用薄层色谱中的高低浓度对比法进行检查。二、喹啉类药物特殊杂质的检验方法（二）盐酸环丙沙星中特殊杂质的检查酸度：主要控制药物中酸性杂质。用pH计测定,pH为3.0～4.5。溶液的澄清度与颜色：主要控制本品中不溶性物质和有色杂质。有关物质：主要控制本品中可能引入结构不清的有关杂质，采用HPLC法中归一化法进行检查，其检查方法如下：二、喹啉类药物特殊杂质的检验方法色谱条件与系统适用性试验色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱。流动相：0.05mol/L枸橼酸-乙腈(82:18)用三乙胺调节pH值3。检测器：UV检测波长为277nm；按盐酸环丙沙星峰计算n＞2000；盐酸环丙沙星峰与相邻杂质峰的分离度R＞1.5。测定方法：取本品适量，加水制成每1ml中含0.4mg的溶液，取20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度和记录仪衰减，使主成分的峰高为记录仪满量程的2-4倍，记录时间应为主成分峰保留时间的2倍。按面积归一化法计算，杂质总量不得超过1.5%。三、托烷类药物特殊杂质的检验方法1.酸度东莨菪碱碱性很弱，对石蕊试纸几乎不显碱性反应。氢溴酸东莨菪碱为强酸弱碱形成的盐，通过其5%水溶液的pH值为4.0～5.5，来控制本品中的酸性杂质。氢溴酸东莨菪特殊杂质的检查三、托烷类药物特殊杂质的检验方法

2.其他生物碱本品水溶液+氨试液不混浊合格混浊存在其他生物碱+KOH试液混浊（东莨菪碱）三、托烷类药物特殊杂质的检验方法

3.易氧化物主要是检查本品在生产中可能引入的阿扑阿托品及其它含有双键的有机物质，可使KMnO4溶液褪色。四、吩噻嗪类药物特殊杂质的检验方法主要有：2-二甲氨基-1-丙醇；N,N,β-三甲基-10H-吩噻嗪-10-乙胺异构体和结构不清的分解产物。因此采用TLC法中的高低浓度对比法控制上述这些杂质的限量。（一）盐酸异丙嗪中特殊杂质检查四、吩噻嗪类药物特殊杂质的检验方法本品遇光不稳定，在生产和贮藏过程中易引入有关物质，因其结构不清，因此也采用TLC法中的高低浓度对比法控制杂质的限量。（二）盐酸硫利达嗪中有关物质检查五、苯并二氮杂卓类药物特殊杂质的检验方法

Ch.P收载的八种本类药物，除氯氮卓外，其余均作此项检查。其检查方法除了三唑仑采用GC法外，其余均用TLC法进行检查。USP（24）和BP（2000）中对氯氮卓都规定了此项检查，而且均用TLC法进行检查。（一）有关物质检查五、苯并二氮杂卓类药物特殊杂质的检验方法地西泮中有关物质的检查：地西泮在合成过程中因其副反应，可能引入N-去甲基苯甲二氮卓及化学结构不清的有关物质，可采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查。氯氮卓中有关物质的检查：USP(24)用TLC法检查氯氮卓中的有关物质，并规定其分解产物2-氨基-5-氯-2-苯甲酮含量不得过0.01%；中间体7-氯-1，3-二氢-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮杂卓-2-酮-4-氧化物含量不得过0.1%。五、苯并二氮杂卓类药物特殊杂质的检验方法色谱条件：色谱柱为250mm×2.6mm（i.d.）Nucleosil10C18柱；n=3000；流动相为甲醇-磷酸液（0.05mol/L）（60:40），40%氢氧化钠溶液调pH为6.0；流速为1ml/min；紫外检测器波长为254nm。检测结果：氨基物（Ⅱ）的tR为12.0min、氧化物（Ⅲ）的tR

为4.3min，痕量杂质（Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ）的tR为13.8、3.6、