输血技术操作规范(SOP)

输血科技术操作规范

第一节ABO血型鉴定操作规程

【目的】

正确鉴定血型，保障患者的输血安全。

【范围】

所有送检需要鉴定AEO和RhD血型的标木。

【职责】

输血科负责临床患者的血型鉴定。

【程序】

ABO血型鉴定

（1）原理：根据ABO血型分类原则，即红细胞上带有什么抗原就称什么血型、同一个体内

抗原与抗体互补。根据含某抗原的红细胞与含相应抗体的血清混合可使红细胞发生凝

集，反之不发生凝集的原理，利用分型血清或分型红细胞鉴别血型，前者称为正定型

（乂称红细胞定型），后者称为反定型（乂称血清定型）。通过正反定型可准确鉴别ABO

血型。

（2）试管法

a）取洁净小试管（内径10mmX60nlm）5支，分别标明抗-A,抗-B,八细胞、B细胞和0

细胞。

b）抗-A,抗-B管中分别按标记加入相应抗体血清2滴，并加入受检者3%〜5%红细胞悬液

1滴，混匀。

c）A、B和0细胞管分别按标记加入相应3%〜5%标准红细胞盐水悬液1滴，并加入受检者

血清2滴，混匀。

d）以1500r/min离心

e）轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集现象，必要时须用低倍镜检查。

（3）微柱凝胶法（卡式血型鉴定）

a）将代待检标本配成（0.5%-0.8%）红细胞生理盐水悬液。

b）将微柱凝胶卡标号。

c）正定型：将待检红细胞标本分别加入第一至第三支微管中，或第四至第六支微管中，

每管50ul；

d）带反定型的微柱卡：将待检红细胞标本分别加入第•至第三支微管中，第四至第六支

微管中分别依次加入。型、A型、B型（0.5%〜0.8$）标准红细胞生理盐水悬液后再加

入待检血清，每次加50ul。

d）即刻使用专用离心机离心5min,2min900rpm,3minl500rpm,取出后判定结果。

（4）结果判定

a）试管法

正定型（细胞定型）反定型（血清定型）

受检者血型

抗-A抗-BA细胞B细胞0细胞

+00+0A

0++00B

00++00

++000AB

b）微柱凝胶法

正定型（细胞定型）反定型（血清定型）

受检者血型

抗-A抗-BDVICllA细胞B细胞

+0+00+A,RhD+

0++0+0B,RhD+

00+0++0,RhD+

+++000AB,RhD+

规格：抗A效价2128；抗B效价2128;抗D效价264

【注意事项】

1.严格按操作规程操作操作，认真核对标本并做好标记。

2.所用试管、滴管和玻片必须清洁干净，标本不能被细菌污染，防止溶血或出现假阳性结果。

3.一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清.

4.抗血清每次使用完后，应放回冰箱保存，以免细菌污染。

5.为了防止冷凝集现象的干扰，一般应在室温下进行试验。

6.严格控制离心速度和时诃，防止假阳性或假阴性结果。

7.观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。

8.未用的微柱凝胶免疫检则卡应入室温保存，用完后放4℃冰箱保存1周。

9.观察结果时，若出现溶血现象，表明存在抗原抗体反应并有补体激活，应视为凝集。

10.判断结果后应仔细核对，记录，避免笔误。

11.对RhD阴性结果应按照有关规定做进•步的确认试验，必要时送血型参比实验室确认。

【方法评价】

1.玻片法定型简单，不需要离心设备，适用于大规模血型普查。亚型红细胞抗原与抗体

的凝集反应慢、凝集强度弱，有时容易被忽略而导致定型有误。该法仅靠抗体的力量

凝集红细胞而无离心力加速反应，故反应时间较长，且不适用于交叉配血。

2.试管法定型反应快、时间短，特别是紧急输血时可在抗原抗体反应1分钟后离心观察

结果；通过离心增强凝集，可发现亚型和较弱的抗原抗体反应，结果准确可靠。

3.微柱凝胶法定型使用安全，操作简单，结果稳定可靠，灵敏度高，重复性好，但费用

昂贵，需要特殊的仪器设备。

第二节RhD血型鉴定操作规程

（1）原理：Rh血型系统主要有五种抗体，即抗-D、抗-C、抗-E、抗-c及抗一°。用这5种

抗体血清检查红细胞抗原，可将Rh血型系统分成18种表现型。但常规检查的

只用抗-D血清，与抗-D血清凝集者被称为RhD阳性，反之称为RhD阴性。采用

单克隆IgM类抗T）抗体鉴定红细胞上的RhD抗原。

（2）单克隆IgM类抗体法

a）取小试管（内径ICmmX60mm）3支，分别标明受检管、阳性对照管及阴性对照管。

b）分别按标记加入受检者红细胞悬液1滴，RhD阳性红细胞悬液1滴和RhD阴性红细胞

盐水悬液1滴。

c）每管加入单克隆IgM类抗-D血清1滴，混匀。

d）混匀后以1500r/min离心Imin。

。）轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集现象，必要时须用低倍镜检杳。

f）结果判定：①先看对照管，再看受检管；②对照管结果正确，受检管凝集为阳性，即

RhD阳性，反之为阴性。

（3）微柱凝胶法

见微柱凝胶法（卡式血型鉴定）。

a）将50ulAl、B型反定型细胞加入Al、B管中。

b）将50ul待检血清或血浆加入Al、B管中。

c）将10U15%待检红细胞悬液加入A、B、DVI及Ct）管中。

d）离心lOmin后判定结果。

微柱凝胶法

正定型（细胞定型）反定型（血清定型）

____________________________________________________________受检者血型

抗-A抗-BDVICtlA细胞B细胞

+0+00+A,RhD十

0++0+0B,RhD+

00+0++0,RhD+

+++000AB,RhD+

【注意事项】

l.Rh血型系统的抗体多由免疫产生，血清中有很多天然抗体存在，故不需作抗体检测

试验。

2.阳性对照，取3人0型红细胞混合配成。阴性对照不易得到，一般配制方法为正常人

AB型血清1滴，5%)阳性红细胞悬液1滴和菠萝能试剂1滴混匀，与受检管一同置于

37℃水浴1小时。

3.能介质中的酶很容易失活，故每次试验都要设置阳性对照。若阳性对照不出现凝集，

表明酶或抗血清失效，酶的活性过强也可使阴性标本出现假阳性结果，因而也要设立

阴性对照，以排除假阳性。

4.Rh血型鉴定要严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体凝集反应的凝集块比较脆弱，

观察反应结果时，应轻轻弹动试管，不可用力摇动。

5.Rh(D)抗原检测原则对受血者一般只测Rh(D)抗原，而对供血者不仅要检有Rh

(D)抗原，并在其为阴性的前提下，必须进一步确定是否为Rh弱D型。

【方法评价】

单克隆混合试剂可特异性地与含D抗原的红细胞发生凝集反应，能检出过去认为是阴性

的弱D表现型，其中包括极罕见Dvariant型。

微柱凝胶卡检测使用安全，操作简单，结果稳定可靠，灵敏度高，重复性好。目前有手

工、半自动和全自动三种检测仪器。

第三节交叉配血操作规程

【目的】

确保受血者输血安全，

【范围】

所有输血前需要进行交叉配血的血制品。

【职责】

配血室负责交叉配血试验。

【程序】

1.原理：交叉配血试验是指受血者血清与供血者红细胞及受血者红细胞与供血者血清之间

的混合凝集试验，分为主管（或称主侧）及次管（或称次侧）。主管是受血者血清与供

血者红细胞，次管是受血者红细胞与供血者血清。

2.盐水介质法

a）取小试管（内径lCmmX60mni）2支，分别标明“Ps+Dc”和“Pc+Ds”,前者为主管,

后者为次管。其中Ps=受血者血清，Pc=受血者红细胞，Ds=供血者血清，Dc=供血者

红细胞。

b）按标记主管内加入受血者血清2滴及供血者3%红细胞盐水悬液1滴，次管内加入供

血者血清2滴及受血者3名红细胞盐水悬液1滴。

c）混匀后以1500r/min离心lmin«

d）轻轻摇动试管，用肉眼观察反应结果，用低倍镜观察是否有凝集现象。

3.聚凝胺法

a）取小试管（内径10mmX60rnm）2支,分别标明“PsPc”和“PcD$”,前者为主管，

后者为次管。其中Ps二受血者血清，Pc二受血者纥细胞，Ds=供血者血清，Dc=供血者

红细胞。

b）按标记主管内加入受血者血清2滴及供血者3%红细胞悬液1滴，次管内加入供血者

血清2滴及受血者3%红细胞悬液1滴。

c）每管加低离子介质（LIM）0.6ml,混匀后室温静置Imino

d）每管加聚凝胺溶液2滴，混匀后在室温静置15s。

e）以1500r/min离心Imin,倾去上清液。

f）轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集。无凝集须重新试验，有凝集则加入2滴复悬液，

轻轻混匀后观察结果，必须用低借镜观察结果.

4.微柱凝胶法（卡式交叉配血）

a）将受血者与献血者的红细胞与血清（或血浆）离心分离。

b）用低离子溶液分别将受血者与献血者红细胞配成（0.5%〜0.8%）红细胞悬液。

c）将50ul献血者红组胞与50ul受血者血清（或血浆）依次加入主侧管中。

d）将50ul受血者红组胞与50ul献血者血清（或血浆）依次加入主侧管中。

e）加样后的试剂卡，置于37℃的专用孵育箱中孵育15mino

f）使用专用离心机离心5分钟，2分钟900rpm,3分钟1500rpm,取出，判定结果.

5.结果判定

a）阴性结果：红细胞完全沉降于凝胶管底部，表明受血者与献血者交叉配血相合；

阳性结果：红细胞:疑集块位于凝胶的表面或凝胶中，表明交叉配血不相合；

如果发生溶血，提示为阳性反应。

b）均应设阳性、阴性对照及自身对照，先看对照管，对照结果准确，再看配血管。

c）配血管如有一管凝集或两管均有凝集，示配血不合，两管均不凝集，示配血相合。

【注意事项】

盐水介质交叉配血：

1.配血前严格查对患者姓名、性别、年龄、科别、床号及血型，确保标本准确无误，同

时，要复检受血者和供血者的ABO血型是否相符。

2.配血试管中发生溶血现象是配血不合，表明有抗原抗体反应，同时还有补体参与，必

须高度重视。

3.试验中，每次滴加不同人血清或红细胞时，都应当更换吸管，或将吸管放置在生理盐

水中反复洗涤3次，防止血清中抗体拖带，影响试验结果。

4.红细胞加入血清以后，立即离心并观察结果，不宜在室温下放置，以免影响试验结果。

5.观察结果时•，如果存在纤维蛋白时，可以去除纤维蛋白块，主要观察混合液中有无凝

集。

6.室温控制在（22±2）°C,防止冷抗体引起凝集反应，影响配血结果的判断。

7.患者一次接受大量输血（10个以上献血者），则献血者之间亦应进行交叉配血试验。

聚凝胺介质交叉配血：

1.若受血者用血量大，需要10个献血员以上时，献血员间也要进行交叉配血。

2.溶血标本不能用于交叉配血，因为配血试管中发生溶血现象，表明有抗原抗体反应，

同时还有补体参与，是配血不合的严重情况。

3.血清中存在冷凝集素时，可影响配血结果的判断。此时可在最后滴加解聚液时，将试

管立即放入37c水浴中，轻轻转动试管，并在30秒内观察结果。

4.聚凝胺介质交叉配血试验中，可以用EDTA的血浆标本代替血清使用。

5.当解聚液加入以后，应尽快观察结果，以免反应减弱或消失。

6.聚凝胺是一种抗肝素试剂，若患者血液标本中含有肝素，如血液透析患者，须多加几

滴聚凝胺液以中和肝素。

微柱凝胶介质交叉配血：

1.微柱凝胶卡必须保存在室温下，试验前，要将微柱凝胶卡空卡放入微柱凝胶离心

机中，离心5分钟,2分钟900rpm,3分钟1530rpm,避免卡中的凝胶在运输中产

生胶质不均匀、胶面不整齐或气泡等。

2.微柱凝胶介质交叉配血试验，可一次性检出IgM型和IgG型红细胞血型抗体，因

此在临床输血试剂使用时，可以省去盐水介质交叉配血试验。

3.不要将微柱凝按试剂卡长期保存在在此温度下，试剂卡中液体蒸发徽集于

封口铝箔下，狡易干涸，应将试剂卡保存在18~22℃。

4.封口已损坏，管中液体干涸或有气泡的微柱凝胶试剂卡不能使用。

5.配血标本要新解（3天以内），不能被细菌污染，否则会出现假阳性反应。

6.血清标本必须充分去纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍阴

性红细胞沉淀，呈假阳性反应。

7.如果使用的标本是血浆，一定要用标准的含抗凝剂的标本管采集，否则血浆中纤

维蛋白在微柱离心时析出，阻挡分散的红细胞下降，出现假阳性。

8.微柱凝胶卡中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其

他因素所致溶血，故对标本一定要认真分析。

【方法评价】

盐水介质交叉配血

盐水介质配血试验操作简单，是最常用的配血方法，可以发现最重要的ABO血型不合。

但只能检出不相合的IgM类完全抗体，而不能检出IgG类免疫性的不完全抗体。对有输血史

（特别是有过输血反应的患者）、妊娠、免疫性疾病史和器官移植史等患者，必须增加另外

一种可以检测IgG类抗体的方法，保证输血安全。

聚凝胺介质交叉配血试验：快速，灵敏度高。

微柱凝胶介质交叉配血：

微柱凝胶介质交叉配血试验操作简单、结果稳定、灵敏度高、重生性好、可标准化、

可自动化、使用安全。

第四节不规则抗体筛选试验操作规程

【目的】

指导进行正确的抗体麻选，确保抗体筛选结果的准确性，确保安全输血。

【范围】

1）有输血史、妊娠史的患者血标本。

2）短期内多次输血的患者的血标本。

3）交叉配血不合的患者的血标本。

4）有输血反应史的患者的血标本。

5）有新生儿溶血病史及流产史的患者的血标本。

【职责】

实验室负责不规则抗体筛选试验。

【原理】

向微柱凝胶反应卡（简称反应卡）内先后加入筛选细胞和受检血清，血清中的IgG抗体

与相应红细胞抗原结合后便会和凝胶中的抗人球蛋白再次结