检验操作规范

检验操作规范1适用范围本规范适用于二级以上医疗机构临床实验室常用日立、罗氏、贝克曼系列全自动生化分析仪的常规血清、尿液、脑脊液、胸腹水标本生化项目检验操作，覆盖肝功能、肾功能、血糖血脂、心肌损伤标志物、电解质、特种蛋白等48项常规生化项目的全流程操作，所有在岗检验技术人员必须严格执行本规范。2人员资质要求从事本操作的人员必须取得临床医学检验专业技术资格证书，经本仪器操作专项培训考核合格，岗前生物安全培训考核合格，独立操作前需完成不少于3个月的带教实操训练，考核合格后方可独立上岗，严禁未经培训、未取得资质人员独立操作。3操作前准备3.1试剂准备3.1.1储存要求：未开封试剂2℃~8℃避光储存，严禁冷冻，储存环境温度波动不得超过±2℃；开封后试剂置于仪器2℃~8℃密封试剂仓中，稳定期要求：干粉类试剂复溶后可稳定21天，液体单试剂开瓶后可稳定30天，液体双试剂开瓶后组分A可稳定30天、组分B可稳定45天；超出有效期或稳定期的试剂必须报废，不得继续使用。3.1.2装载要求：装载前将试剂室温（18℃~25℃）放置15~30分钟回温，轻轻颠倒混匀5~8次，避免产生气泡，用无尘纸擦净试剂瓶外壁凝水，核对试剂批号、有效期、剩余量，确认试剂条码清晰无污损，按照仪器提示对应放入试剂位，关闭试剂仓门后等待仪器自动扫描条码；扫描失败需手动输入试剂批号、有效期、校准信息，重新扫描确认无误后方可继续。3.1.3更换要求：当试剂剩余量低于对应项目单次检测用量的10倍时，仪器将发出更换提示，更换新批号试剂后，必须用1份阳性对照、1份阴性对照标本复测，结果偏差在允许范围内方可开展批量检测。3.2校准品准备3.2.1校准周期要求：生化项目常规校准周期不得超过6个月，出现以下任意情况必须立即重新校准：更换试剂批号、仪器进行核心部件维护保养、室内质控连续2个水平超出±2SD允许范围、更换光源、更换比色杯、仪器搬迁后。3.2.2复溶储存要求：冻干校准品复溶时，必须使用A级玻璃移液管，严格按照说明书要求控制加样体积误差，误差不得超过±0.01ml；加样完成后盖紧瓶盖，室温放置10分钟，轻轻颠倒混匀3次，严禁剧烈震荡产生气泡；复溶后校准品2℃~8℃可稳定24小时，-20℃可稳定7天，仅可冻融1次，反复冻融的校准品必须废弃。3.2.3校准操作要求：校准按照低浓度到高浓度的顺序进行，每个浓度水平重复测定3次，单次测定值偏差超出校准品靶值允许范围（±2SD）时，需重新复溶校准品后再次校准，所有浓度点偏差合格后校准方可通过。3.3标本准备3.3.1采集要求：空腹标本要求患者禁食8~12小时，采集静脉血3~5ml于无抗凝剂真空采血管或肝素锂抗凝真空采血管，严禁使用EDTA、枸橼酸钠、草酸钠抗凝标本，该类抗凝剂会干扰15%以上酶类项目测定结果；采集过程避免剧烈震荡，严禁人为溶血，标本溶血时血钾可升高15%~20%，乳酸脱氢酶可升高30%以上，必须重新采集。3.3.2接收拒收标准：常温下标本采集后1小时内必须送达实验室，接收时核对患者姓名、性别、住院号/门诊号、标本类型、采集时间，符合以下任意情况直接拒收：标本凝固、肉眼可见溶血（血红蛋白>1g/L）、严重脂浊（甘油三酯>10mmol/L）、标本信息错漏、容器破损、采集后超过2小时未送检，做好拒收记录并立即通知临床重新采集。3.3.3离心保存要求：接收合格标本立即离心，离心条件严格执行：离心半径12cm的台式离心机，设定3500r/min，离心时间10分钟，相对离心力为1650g，离心后保证血清完全分离，无纤维蛋白丝残留；离心后标本18℃~25℃放置不超过2小时，2℃~8℃放置不超过8小时，超过保存时间需分装后-20℃冷冻保存，冻存标本融化后必须充分混匀，1650g离心5分钟去除沉淀后再检测。4仪器开机操作规范4.1开机前检查：检查供电电压稳定在220V±10%，频率50Hz±1Hz，检查纯水机出水电阻率≥10MΩ·cm，检查废液桶剩余容量不超过总容积的2/3，检查冲洗液、酸性清洗液、碱性清洗液余量满足当日检测需求。4.2开机流程：先打开仪器主机电源，再打开计算机主机电源，等待仪器自动初始化，初始化过程中严禁打开仪器仓门、触碰机械臂、操作面板，初始化完成后，仪器自动完成管路冲洗、光源强度检测，光源强度低于初始值50%时，发出更换光源提示，更换光源后必须重新校准所有项目。4.3开机后性能核查：开机完成后自动进行比色杯空白检测，要求340nm处比色杯空白吸光度≤0.100，405nm处吸光度≤0.050，超出范围的比色杯标记为损坏，仪器自动屏蔽使用；比色杯空白合格后，进行1次全管路冲洗，方可开展后续质控、标本检测。5室内质量控制操作规范5.1质控基本要求：常规检测每日至少开展1次室内质控，每个项目至少覆盖正常、异常两个浓度水平的质控品；冻干质控品复溶要求同校准品，复溶后2℃~8℃可稳定7天，-20℃分装冻存可稳定1个月，仅可冻融1次；质控品必须与临床标本同条件检测，不得单独调整参数检测，开机后先做质控，质控合格后方可检测临床标本。5.2质控判断规则：采用Westgard多规则质控判断，具体要求：①12s为警告规则：1个质控测定值超出±2SD范围，发出警告，立即重新检测该质控，重测仍超出则判定失控；②13s规则：1个质控测定值超出±3SD范围，直接判定失控；③22s规则：连续2个质控测定值在同方向超出±2SD，判定失控；④R4s规则：连续2个质控测定值差值超出4SD，判定失控；⑤41s规则：连续4个质控测定值同方向超出1SD，判定失控；⑥10x规则：连续10个质控测定值分布在均值同侧，判定失控。5.3失控处理流程：失控后立即停止批量检测，按顺序排查原因：①排查质控品是否变质、复溶体积错误、冻融次数超标，重新复溶质控复测；②排查试剂是否过期、浑浊、产生沉淀，更换新试剂后复测；③排查仪器是否管路堵塞、比色杯污染、光源老化，完成对应维护后复测；④排查校准是否漂移，重新校准后复测；复测合格后，详细记录失控原因、处理过程，对失控时间段检测的所有标本进行复检，确认结果无误后方可发放报告，所有失控记录至少保存2年。6临床标本检测操作规范6.1标本上机要求：将离心后的标本按顺序放置在样本架上，扫描标本条码，确认仪器录入信息与申请信息完全一致，条码模糊不清的手动录入信息，严禁错号、漏号；急诊标本优先放置在急诊专用样本位，仪器优先检测，优先出结果。6.2参数设置要求：所有项目反应温度严格控制在37℃±0.1℃，反应时间：速率法10分钟，终点法5分钟；样本量、试剂量严格按照厂家说明书设置，不得随意更改，以常用项目为例：丙氨酸氨基转移酶（ALT）速率法，样本量10μl，R1200μl，R250μl，检测波长340nm，线性范围0~1000U/L，所有项目设置完成后必须复核参数无误方可运行。6.3稀释检测规则：所有结果超出项目线性范围上限的标本必须稀释重测，稀释比例要求：结果大于上限1倍以内采用1:1稀释，大于上限1~3倍采用1:3稀释，大于上限3倍以上采用1:10稀释，重测结果必须落在项目线性范围内方可报告，不得直接报告“＞XX”，临床特殊要求除外，需在结果处备注说明。6.4特殊标本处理：①严重脂浊标本：甘油三酯>10mmol/L的标本，采用超速离心去除脂蛋白后测定，或采用标本空白扣除法校正结果，降低吸光度干扰；②溶血标本：临床无法重新采集的溶血标本，血红蛋白>2g/L必须注明“标本溶血，结果仅供参考”；③黄疸标本：总胆红素>342μmol/L的黄疸标本，采用双波长测定法校正，减少胆红素的负干扰；④脑脊液、胸腹水标本：蛋白定量测定时，标本蛋白浓度低，样本量加倍，测定完成后按比例校正结果。7结果审核与报告发放规范7.1自动审核规则：满足以下所有条件方可自动审核通过：①当日室内质控在控；②标本信息核对无误；③结果在项目线性范围内；④无吸样错误、凝块、交叉污染等仪器报警；⑤结果符合逻辑关系，无逻辑冲突。7.2人工审核要求：以下情况必须人工审核，不得自动放行：①急诊标本；②结果超出医学决定水平；③结果存在逻辑冲突，如总蛋白＜白蛋白、血钙＜离子钙、ALT正常但AST显著升高且排除溶血；④脑脊液、胸腹水等特殊标本；⑤初次检测异常的复诊标本，需与历史结果比对，偏差超过1/3医学决定水平必须复检。7.3复检规则：复检必须重新离心原标本后上机检测，不得直接发放异常结果；两次检测结果偏差允许范围：浓度＜1倍参考范围上限允许偏差±10%，浓度1~3倍参考范围上限允许偏差±15%，浓度＞3倍参考范围上限允许偏差±20%，超出允许范围必须查找原因后再次复检。7.4报告发放要求：审核合格的常规报告1小时内发出，急诊报告30分钟内发出；结果超出危急值范围的，10分钟内必须通知临床医师，做好危急值登记记录；常见生化项目危急值范围为：血钾＜2.5mmol/L或＞6.5mmol/L，血钠＜120mmol/L或＞160mmol/L，血钙＜1.5mmol/L或＞3.5mmol/L，血糖＜2.2mmol/L或＞22.2mmol/L，尿素氮＞35.7mmol/L，肌酐＞707μmol/L，血淀粉酶＞500U/L，ALT＞1000U/L，总胆红素＞513μmol/L，肌钙蛋白I＞1.5μg/L；报告电子存档至少保存15年，纸质报告至少保存5年。8仪器维护保养规范8.1日维护：每日检测完成后，执行仪器自动深度清洗程序，清洗样本针、试剂针、反应管路、比色杯；清空废液桶，用1000mg/L含氯消毒剂对废液桶消毒后备用；用1000mg/L含氯消毒剂擦拭仪器外壁、样本架、操作台面，记录当日维护情况。8.2周维护：每周完成1次深度维护，取出搅拌杆，用纯化水冲洗去除附着的蛋白沉淀，放入1000mg/L含氯消毒剂浸泡10分钟，取出后用纯化水冲洗干净装回；清理试剂仓内部溢出的试剂，擦净内壁冷凝水；检查纯水机出水电阻率，＜10MΩ·cm时更换预处理滤芯。8.3月维护：每月清洗比色杯，用5%次氯酸钠溶液灌注反应管路，浸泡30分钟后用纯化水冲洗干净，重新检测比色杯空白，更换不合格比色杯；检测样本针、试剂针通畅度，发生堵针用专用钢丝疏通，放入碱性清洗液浸泡过夜处理；校准反应模块温度，温度误差超过±0.2℃时调整校准参数。8.4季度维护：每3个月更换纯水机反渗透膜，更换仪器进气口过滤棉；检测记录光源强度，与初始值对比下降超过40%时提前更换光源；检查机械臂移动精度，位置误差超过0.1mm时调整机械臂定位参数。8.5年度维护：每年由厂家工程师对仪器进行全面维护，校准光路系统、校准机械臂、更换老化管路密封圈，出具年度维护报告，存档保存。9性能验证规范9.1验证周期：新仪器安装后、仪器搬迁后、更换检测系统后必须开展性能验证，常规项目每年至少开展1次性能验证，验证指标包括精密度、准确度、线性范围、生物参考区间。9.2精密度验证：批内精密度取低、高两个浓度质控品，连续测定20次，计算CV值，要求：ALT≤5%、血糖≤4%、电解质≤2%、总蛋白≤3%，符合厂家声明要求即为合格；批间精密度每日测定低、高两个浓度，连续测定20天，计算CV值，要求：ALT≤8%、血糖≤6%、电解质≤3%、总蛋白≤5%，符合要求即为合格。9.3准确度验证：采用定值参考品比对法，测定值偏倚≤1/2允许总误差即为合格，允许总误差按照CLIA要求执行：ALT±20%、血糖±10%、血钾±5%、总胆固醇±9%，对应偏倚要求ALT≤10%、血糖≤5%，以此类推；每年两次室间质评成绩PT得分≥80分即为准确度合格。9.4线性范围验证：配置5个梯度浓度标本，每个浓度测定3次，计算均值后做线性回归，相关系数r≥0.995，每个浓度点偏倚≤10%即为线性范围合格。9.5参考区间验证：选择20名健康体检者标本，检测对应项目，超出参考区间的例数≤2例即为合格，超过2例需重新验证，仍不合格需重新建立本实验室参考区间。10生物安全与废弃物处理所有标本按二级生物危害处理，操作时必须穿戴工作服、一次性手套、医用口罩，严禁戴手套接触公共物品，操作完成后用75%酒精手消毒1分钟；一次性耗材、废标本容器按感染性医疗废物处理，放入双层黄色废物袋，封扎后贴上标签交由有资质单位回收；检测废液加入1000mg/L含氯消毒剂消毒30分钟后，存入专用废液罐，交由有资质单位处置，严禁直接排入下水道；发生标本溢洒立即用吸