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畜禽血清中黄曲霉毒素B₁生物标志物的测2021-02-25实施2021-02-25实施I本文件起草单位：安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司(农业农村部猪室)、望江县小月山农业发展有限公司、和县农业农村局、望江县畜牧兽11范围仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本黄曲霉毒素B₁AflatoxinB₁,AFB₁5.1.3磷酸二氢铵(NH₄H₂PO₄),分析纯。5.1.9磷酸二氢钾(KH₂PO₄),分析纯。25.1.10氢氧化铵(NH₄OH),分析纯。5.1.12AFBi生物标志物标准品AFB₁-Lysine(纯度≥99%)。5.2.1高效液相色谱仪(含荧光检测器、柱温箱)。5.2.6微量进样器。5.2.7天平(感量0.0001g)。5.2.9-80℃超低温冰箱。无菌采集新鲜血液5mL,室温静置2h,2000g离水100222344466588676.2.1.2取待测血清5μL至离心管中，加入95μL水稀释样品，涡旋混合均匀，然后将4μL稀下涡旋，混合均匀转移至待测试管中；以试管1作为空白，在595nm的波长下，使用紫外分光光度36.2.1.3血清总蛋白含量计算公式见公式(1)、公式(2)、公式(3):水标准品1002354565706.2.2.3150μL血清白蛋白计算公式见公式(4)、公式(5)、公式(6):4摇床上消化3h。时间%%055质的浓度为横坐标(x轴),目标物质的峰面积为纵坐标(y轴),对各个数据点进行最小合，标准曲线见公式(7):样品分析见公式(8):……注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。添加浓度在0.5ng/mL～1.0ng/mL时，回收率在75%～94%之间。6(规范性)试剂与标准品溶液配制水调pH至7.2,混合均匀。A.1.2叠氮化钠(0.001%):称取叠氮化钠1.0mg,溶于100mL水，混合均匀。A.1.3甲醇-水溶液(25+75):分别量取250mL甲醇和750mL水，混合均匀。A.1.4甲醇-水溶液(70+30):分别量取700mL甲醇和300mL水，混合均匀。A.1.5甲酸-水溶液(2+98):分别量取20mL甲酸和980mL水，混合均匀。A.1.6磷酸盐缓冲液(PBS):称取8.0g氯化钠、1.2g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾，用980mL水溶解，然后用盐酸调整pH至7.4,最后用水稀释至1000mL,混合均匀。A.2.1标准储备溶液(0.1mg/mL):精密称定AFB₁-Lysine标

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