高级卫生专业技术资格考试病理学技术(副高级)试题及答案

高级卫生专业技术资格考试病理学技术(副高级)试题及答案一、单选题（A1型题）1.下列关于甲醛固定液的描述，错误的是A.甲醛（福尔马林）是一种还原剂B.10%中性缓冲福尔马林是最常规的组织固定液C.甲醛固定主要通过形成亚甲基交联来保存组织结构D.甲醛固定速度快，能迅速穿透大块组织E.长期固定的组织会产生甲醛色素2.在常规HE染色中，苏木精染液配制时常需加入媒染剂，最常用的媒染剂是A.硫酸铝钾B.氯化铝C.醋酸铝D.硫酸铁铵E.氯化铁3.脱蜡过程中，为了彻底去除组织中的石蜡，通常使用的溶剂是A.酒精B.二甲苯C.丙酮D.乙醚E.氯仿4.关于免疫组化染色中抗原修复的描述，正确的是A.所有的抗原在福尔马林固定后都需要进行热修复B.柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）适用于大多数抗原C.EDTA缓冲液（pH9.0）仅适用于胞核抗原D.高压锅修复的时间越长，染色效果越好E.胰酶消化属于热修复的一种5.进行革兰染色时，革兰阳性菌应呈现的颜色是A.红色B.蓝色C.黄色D.黑色E.绿色6.下列哪种固定剂对糖原的保存效果最好A.95%乙醇B.10%福尔马林C.戊二醛D.Zenker液E.Bouin液7.在病理技术质量控制中，用于评估苏木精染色核着色强度的对照组织通常是A.肝组织B.脾脏C.扁桃体D.阑尾E.肾脏8.下列关于冰冻切片的描述，错误的是A.冰冻切片主要用于术中快速病理诊断B.恒冷箱切片机的温度通常设置在-20℃至-25℃C.冰冻切片的厚度通常比石蜡切片厚D.冰冻切片后无需固定即可直接染色E.冰冻切片中常见的假象是冰晶9.PAS（过碘酸-雪夫）反应主要用于检测A.脂肪B.色素C.糖原和粘多糖D.细菌E.钙盐10.在常规石蜡包埋中，石蜡的熔点通常选择在A.45-50℃B.52-56℃C.58-62℃D.65-70℃E.75-80℃11.下列哪种情况不适合使用乙醇固定A.肾穿刺活检B.糖尿病足坏死组织C.需要做核酸提取的组织D.脂肪含量较高的组织E.需要保留酶活性的组织12.脱钙过程中，常用的脱钙指示剂是A.甲基红B.酚酞C.溴酚蓝D.钙指示剂E.钴-亚硝酸钾法13.关于免疫荧光技术的描述，正确的是A.需要使用辣根过氧化物酶（HRP）作为标记物B.需要使用底物DAB显色C.观察时需要使用荧光显微镜D.切片可以长期保存不褪色E.信号放大倍数通常高于酶标法14.制作电镜标本时，最常用的固定剂是A.10%福尔马林B.95%乙醇C.2.5%戊二醛D.4%多聚甲醛E.Carnoy液15.下列关于细胞块制作的描述，正确的是A.胸腹水离心后直接取沉淀包埋即可B.细胞块制作只能使用琼脂糖作为载体C.细胞块制作后可以进行免疫组化染色D.细胞块不需要脱水透明处理E.细胞块的固定时间通常需要72小时16.在HE染色中，分化液的主要成分是A.盐酸酒精B.氨水C.乙醇D.二甲苯E.冰醋酸17.下列哪种特殊染色用于显示神经纤维A.Masson三色染色B.维多利亚蓝染色C.Luxol快蓝染色D.Bielschowsky银染E.刚果红染色18.在免疫组化自动化染色机中，防止“边缘效应”的关键措施是A.增加一抗浓度B.延长孵育时间C.保持切片湿润，使用湿盒或加封片胶D.提高修复温度E.缩短清洗时间19.下列关于环保型封片剂的描述，错误的是A.不含二甲苯B.毒性较低C.干燥速度通常比传统封片剂慢D.不能用于荧光切片E.水溶性封片剂可直接用于水洗后的切片20.病理技术室常用的“毒砂”固定液是指A.Zenker液B.Helly液C.Bouin液D.Carnoy液E.Formalin-Alcohol二、共用题干单选题（A3/A4型题）（21-23题共用题干）患者，男，55岁。因“右下腹痛3天”入院，临床拟诊“急性阑尾炎”，行阑尾切除术。术中送检阑尾组织行快速冰冻切片检查。21.快速冰冻切片取材时，对组织块大小的要求是A.越大越好，以便观察全貌B.不超过24mm×24mm，厚度不超过4mmC.不超过10mm×10mm，厚度不超过2mmD.长度不限，厚度不超过5mmE.直径不超过5mm，厚度不限22.在进行冰冻切片时，若组织块中含大量脂肪，最容易出现的问题是A.切片过厚B.组织破碎C.切片无法形成连续带状D.染色过深E.出现大量人为裂隙23.冰冻切片HE染色中，为了加速染色过程，通常采取的措施是A.提高染色液温度至60℃B.延长苏木精染色时间至10分钟C.使用高浓度的酒精分化D.省略伊红染色步骤E.使用梯度酒精脱水时间延长（24-26题共用题干）一份乳腺癌根治术标本，需要进行ER（雌激素受体）、PR（孕激素受体）及HER2（人表皮生长因子受体2）的免疫组化检测。24.关于ER/PR检测的阳性定位，正确的是A.细胞膜B.细胞质C.细胞核D.细胞核和细胞质E.细胞膜和细胞质25.若HER2免疫组化结果显示（+++），则提示A.肯定存在基因扩增，无需进一步FISH检测B.肯定不存在基因扩增C.可疑存在基因扩增，需进行FISH检测验证D.染色失败，需重做E.为假阳性结果26.在进行免疫组化染色时，设置阳性对照的目的是A.节省抗体试剂B.监测抗原修复效果C.验证染色系统的有效性，排除假阴性D.观察背景染色情况E.替代阴性对照三、多选题（X型题）27.下列哪些属于组织固定过程中的常见人为假象A.固定不良B.组织收缩C.组织变硬D.色素沉着E.核固缩28.常用的脱钙方法包括A.酸脱钙法B.电解脱钙法C.离子交换树脂脱钙法D.微波辅助脱钙法E.超声波辅助脱钙法29.下列关于苏木精-伊红染色中“蓝化”步骤的描述，正确的有A.蓝化使用的试剂通常是弱碱性溶液B.常用的蓝化液为自来水或氨水C.蓝化作用是使苏木精与细胞核结合更牢固D.蓝化不足会导致切片随时间变红E.蓝化过度会导致细胞核染色过深30.免疫组化染色中产生非特异性背景染色的原因包括A.内源性过氧化物酶未阻断B.内源性生物素未阻断C.一抗浓度过高D.血清封闭不充分E.清洗不彻底31.下列哪些染色技术可用于显示纤维结缔组织A.Masson三色染色B.VanGieson染色C.PTAH染色D.网状纤维染色E.刚果红染色32.病理技术室常见的危险化学品包括A.二甲苯B.甲醛C.DAB（二氨基联苯胺）D.浓盐酸E.丙酮33.关于全包埋切片技术的描述，正确的有A.适用于微小标本的全面检查B.可以避免漏诊C.通常使用琼脂或明胶作为载体D.耗时较长，成本较高E.不需要脱水透明处理34.影响石蜡切片质量的因素包括A.组织固定是否充分B.蜡块的温度C.刀片的角度和锋利度D.组织脱水是否彻底E.切片机的速度35.分子病理技术中，常用的核酸提取方法包括A.酚-氯仿抽提法B.硅胶膜柱离心法C.磁珠法D.碱裂解法E.沉淀法四、填空题36.常规病理技术中，组织处理的主要步骤依次是：取材、固定、________、透明、________。37.10%中性缓冲福尔马林的配方中，甲醛（浓福尔马林）浓度为________%，磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的作用是________。38.在HE染色中，苏木精是________染料，伊红是________染料。39.常用的脱钙液中，________（填化学名称）脱钙速度快但易破坏组织结构；________（填化学名称）脱钙速度慢但对组织损伤小。40.免疫组化染色中，抗原修复主要分为________修复和________修复两大类。41.网状纤维染色常用的金属盐是________，染色后网状纤维呈________色。42.在病理诊断中，PAS染色阳性且能被唾液消化，提示物质为________；若不能被唾液消化，则提示为________。43.液基细胞学技术（LCT）相比传统涂片，其主要优势在于提高了________的检出率和减少了________的干扰。44.为了防止切片在免疫组化染色过程中脱片，载玻片通常需要进行防脱片处理，常用的防脱片剂是多聚赖氨酸或________。45.PCR（聚合酶链式反应）的三个基本步骤是：变性、________、________。五、简答题46.简述在常规石蜡切片制作过程中，组织脱水不彻底对后续步骤及切片质量的影响。47.请列出免疫组化染色中“假阴性”结果的可能原因，并针对其中两点提出解决方案。48.简述Masson三色染色法的基本原理及主要成分的显色结果。49.在病理技术质量管理中，何谓“前质量控制”？请举例说明其在病理技术中的应用。50.简述冰冻切片制作中出现“冰晶”假象的原因及预防措施。六、综合分析题51.某病理技术室在进行一批胃镜活检标本的HE染色时，发现大部分切片出现以下问题：细胞核染色较淡，结构模糊，细胞质与细胞核对比度差，且切片上有少量白色沉淀物。请根据你掌握的病理学技术知识，分析造成上述问题的可能原因，并制定相应的排查和解决流程。52.患者女性，45岁，发现左乳腺肿块。粗针穿刺活检，病理诊断为浸润性导管癌。需进行ER、PR、HER2、Ki-67的免疫组化检测。(1)请简述ER、PR、Ki-67的阳性判断标准及阳性定位。(2)若HER2免疫组化染色结果为（2+），下一步应如何处理？请说明理由。(3)在进行Ki-67染色时，为了准确计数，应注意哪些技术环节？53.某实验室新进一台全自动脱水机，用于处理常规外科病理标本。(1)请设计一套合理的脱水程序（包括试剂浓度、时间、温度等关键参数），适用于一般大小的软组织标本（如淋巴结、胃肠壁等）。(2)在使用脱水机过程中，技术人员应如何进行日常维护和质量监控，以确保组织处理效果？(3)如果处理后的组织切片出现“中央空洞”或“裂纹”现象，试分析其可能的技术原因。参考答案及解析一、单选题（A1型题）1.【答案】D【解析】甲醛穿透力较强，但相对其他小分子固定剂（如酒精）而言，其固定速度并非极快，且大块组织若固定不及时，内部容易发生自溶。甲醛穿透速度约为1mm/h。A、B、C、E选项描述均正确。2.【答案】A【解析】苏木精为染料，对组织无亲和力，需与媒染剂结合形成色淀才能染色。最常用的媒染剂是金属铝盐，如硫酸铝钾（钾明矾）或铵明矾。3.【答案】B【解析】石蜡能溶于二甲苯、苯、甲苯等有机溶剂。常规脱蜡使用二甲苯，因其脱蜡彻底且经济，但毒性较大。4.【答案】B【解析】柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）是最广泛应用的抗原修复液，适用于大多数抗原。EDTA（pH9.0）修复力更强，适用于一些难修复抗原。并非所有抗原都需要热修复。修复时间过长会导致抗原破坏或脱片。5.【答案】B【解析】革兰染色中，结晶紫初染，碘液媒染，酒精脱色后，革兰阳性菌保留紫-蓝复合物，不被脱色，最终呈现蓝紫色（通常描述为蓝色或紫色）；革兰阴性菌被脱色，被复染液番红染成红色。6.【答案】A【解析】糖原易溶于水，且在酸性环境中易水解。Carnoy液（含冰醋酸、酒精、氯仿）或纯酒精固定能很好地保存糖原。Bouin液和Zenker液对糖原保存不佳。7.【答案】C【解析】扁桃体、增殖体等淋巴组织富含淋巴细胞，核质比高，核染色质丰富，是评估苏木精对细胞核染色强度的良好对照。8.【答案】D【解析】冰冻切片切下后，必须立即固定（通常放入甲醛或酒精等固定液中），以防止细胞结构在随后的水洗和染色过程中溶解或破坏。9.【答案】C【解析】PAS反应原理是利用过碘酸氧化多糖分子中的乙二醇基变为醛基，醛基与无色雪夫试剂反应生成紫红色化合物。用于显示糖原、粘多糖、基底膜等。10.【答案】C【解析】常规石蜡包埋，石蜡熔点一般在56-60℃左右，夏季或软组织可用稍高熔点（58-62℃），以支持切片。11.【答案】D【解析】乙醇能溶解脂肪，导致脂肪组织结构破坏。富含脂肪的组织（如脂肪瘤、乳腺）不宜单独使用高浓度乙醇固定，通常使用福尔马林。12.【答案】E【解析】常用钙指示剂法。将脱钙液滴入饱和草酸铵或氢氧化铵溶液中，若有白色沉淀（草酸钙）产生，说明脱钙液中仍有钙离子，需继续脱钙；若无沉淀，说明脱钙完全。13.【答案】C【解析】免疫荧光技术以荧光素（如FITC、TRITC）标记抗体，在荧光显微镜下观察发出荧光的部位。A、B属于酶免疫组化；D错误，荧光易淬灭；E错误，酶标法通常信号放大倍数更高。14.【答案】C【解析】电镜要求极高的超微结构保存。戊二醛是二醛类固定剂，交联能力强，能极好地保存微细结构，常与四氧化锇（后固定）配合使用。15.【答案】C【解析】细胞块将脱落细胞积聚成块，处理后类似组织块，可以进行石蜡包埋、切片及HE染色、免疫组化染色等。A错误，直接包埋易流失细胞；B错误，可用琼脂、蛋清等；D错误，需常规处理；E错误，固定时间同常规组织。16.【答案】A【解析】分化液用于分化过度染色的胞质和背景，常用1%盐酸酒精（70%乙醇+1%浓盐酸）。17.【答案】D【解析】Bielschowsky银染是显示神经纤维（轴突）和神经末梢的经典镀银染色法。18.【答案】C【解析】边缘效应是指切片边缘组织干燥导致抗体浓度相对较高或非特异性吸附增强，导致边缘着色深。保持湿润是关键。19.【答案】D【解析】水溶性封片剂（如甘油明胶）常用于荧光切片，防止荧光淬灭。D选项说“不能用于荧光切片”是错误的。20.【答案】C【解析】Bouin液由苦味酸、甲醛、冰醋酸组成，苦味酸呈黄色，且有毒，故称“毒砂”固定液（也有资料称苦味酸为“黄色炸药”）。二、共用题干单选题（A3/A4型题）21.【答案】B【解析】冰冻切片受热传导限制，组织块不宜过大。一般要求不超过24mm×24mm，厚度不超过4mm，以确保组织能迅速冷冻均匀。22.【答案】C【答案】脂肪组织质地软，且在低温下脆性增加，切片时容易碎裂，难以形成连续的蜡带。需适当提高温度或使用支持介质（如OCT）。23.【答案】A【解析】快速染色通常通过提高温度（如加热染液）来加速化学反应，缩短染色时间，以适应术中快速诊断的需求。24.【答案】C【解析】ER和PR属于核受体，阳性定位在细胞核。25.【答案】A【解析】HER2免疫组化（+++）通常直接判为阳性，视为存在基因扩增（虽FISH是金标准，但临床指南中+++通常无需FISH验证即可视为阳性）。（2+）为可疑，需FISH验证。26.【答案】C【解析】阳性对照是已知表达该抗原的组织，其阳性结果证明染色系统（抗体、修复、检测等）工作正常，从而排除假阴性。三、多选题（X型题）27.【答案】ABCE【解析】固定不良、收缩、变硬、核固缩均为固定过程常见问题。D色素沉着通常是生前病变（如黑色素、含铁血黄素）或人为污染，不属于固定过程直接导致的假象范畴（虽然固定液可能带入色素）。28.【答案】ABCDE【解析】所有选项均为可行的脱钙方法。酸脱钙最常用；电化学、离子交换、微波、超声波均可辅助加速脱钙。29.【答案】ABC【解析】蓝化是利用碱性溶液使苏木精-铝-色淀变蓝（氧化态），结构稳定。若蓝化不足，苏木精处于红色还原态，遇酸或空气氧化会变红。蓝化过度通常不导致核过深，而是可能分化困难。30.【答案】ABCDE【解析】所有选项均为导致非特异性背景染色的常见原因。31.【答案】ABCD【解析】Masson、VG、PTAH均显示胶原纤维或肌纤维等；网状纤维染色显示网状纤维（属纤维结缔组织）。刚果红主要用于淀粉样物质。32.【答案】ABCD【解析】二甲苯（挥发性毒性）、甲醛（致癌、致敏）、DAB（致癌）、浓盐酸（腐蚀性）均为严格管理的危化品。丙酮虽易燃，但毒性相对较低，通常也需管理，但A、B、C、D是病理室最典型的“高关注”危化品。33.【答案】ABCD【解析】全包埋（巨块切片/全切片）用于微小标本（如内膜、淋巴结）全面检查，需载体，耗时成本高。必须经过脱水透明等常规处理才能石蜡包埋。34.【答案】ABCDE【解析】切片质量是全流程综合结果，所有选项均直接影响切片质量。35.【答案】ABC【解析】酚-氯仿、硅胶膜柱、磁珠是分子病理最常用的核酸提取方法。碱裂解法主要用于质粒提取，沉淀法是基础化学方法但纯化效率低，不常用于诊断级提取。四、填空题36.【答案】脱水；浸蜡（或包埋）【解析】组织处理标准流程。37.【答案】4（或10，视指浓福尔马林还是原液，通常配方中指40%甲醛溶液即福尔马林，占10%体积，即4%甲醛）；维持pH值中性（防止甲醛色素产生及减少组织损伤）【解析】10%中性缓冲福尔马林通常指10ml福尔马林（40%甲醛）+90ml水+缓冲盐。38.【答案】碱性；酸性（或阳离子；阴离子）【解析】苏木精为碱性染料，嗜酸性物质（如细胞质）被其着色称为嗜碱性；伊红为酸性染料，嗜碱性物质（如细胞核）被其着色称为嗜酸性。39.【答案】盐酸（或硝酸）；EDTA（或乙二胺四乙酸）【解析】强酸脱钙快但损伤大；EDTA是螯合剂，脱钙慢且温和。40.【答案】热（或高温）；酶（或蛋白水解酶）【解析】抗原修复两大类。41.【答案】硝酸银；黑（或棕黑）【解析】网状纤维镀银染色，呈黑色。42.【答案】糖原；粘多糖（或糖蛋白）【解析】唾液含淀粉酶，能消化糖原。43.【答案】癌（或病变细胞）；血液（或炎细胞、粘液）【解析】液基细胞学技术优势。44.【答案】APES（或氨丙基三乙氧基硅烷）【解析】常用防脱片剂。45.【答案】退火（或复性）；延伸【解析】PCR三步骤。五、简答题46.【答案】组织脱水不彻底的影响：(1)透明受阻：组织内残留水分会阻碍二甲苯等透明剂的渗入，导致透明不均匀，组织浑浊。(2)浸蜡困难：残留水分会导致石蜡无法充分进入组织，造成浸蜡不均。(3)包埋质量差：蜡块与组织结合不紧密，易出现组织脱落或蜡块裂隙。(4)切片困难：切片时组织松散，难以形成连续蜡带，或切片碎裂。(5)染色不佳：残留水分可能导致染色不均匀，细胞结构模糊，对比度差。(6)人为假象：可能形成由于水分蒸发留下的空洞或裂纹。47.【答案】免疫组化假阴性原因及解决方案：原因：1.抗原丢失或含量过低。2.抗原修复不当（未修复或修复条件不足）。3.一抗浓度过低、失效或孵育时间过短。4.检测系统灵敏度不足或操作失误。5.组织固定过度（交联过密掩盖抗原表位）。解决方案（举例）：1.针对抗原修复不当：优化抗原修复方案，尝试不同的修复液（如从pH6.0换至pH9.0）或提高修复温度/时间。2.针对抗对问题：增加一抗浓度，延长一抗孵育时间（如4℃过夜），或更换新批号抗体。48.【答案】Masson三色染色原理及结果：原理：利用两种或三种阴离子染料与组织内不同成分进行分步染色，依靠分子大小和渗透性的差异，以及媒染剂的作用，使胶原纤维、肌纤维和细胞质呈现不同颜色。结果（经典配方）：胶原纤维：蓝色肌纤维、红细胞、细胞质：红色细胞核：蓝黑色49.【答案】前质量控制（Pre-analyticalQualityControl）是指在病理检测过程开始之前，对影响检测质量的标本采集、运送、固定、取材等环节进行的质量控制。应用举例：1.标本固定：确保标本离体后及时放入足量、合适的固定液中（如10%NBF），固定液体积应为组织体积的5-10倍以上。2.标本标识：确保容器上患者信息与申请单一致，防止标本混淆。3.取材规范：取材部位准确，描述清晰，切块大小适宜（厚度不超过3-5mm），确保能充分固定和脱水。50.【答案】冰晶假象原因：组织冷冻速度过慢，组织内水分形成较大的冰晶，挤压破坏细胞结构。预防措施：1.快速冷冻：使用液氮或-50℃以下速冻模式，使组织迅速通过冰晶形成温度区。2.恒冷箱温度管理：保持恒冷箱温度足够低（-20℃至-25℃）。3.避免水分干扰：组织块表面水分吸干后再冷冻。4.使用保护剂：对于含水量高的组织，可在OCT包埋前briefly浸入保护剂（如蔗糖溶液）。5.恒温头预热：切片时适当提高恒温头温度，减少温差。六、综合分析题51.【答案】问题分析：细胞核淡、结构模糊、对比度差、白色沉淀。可能原因及排查流程：1.固定问题：固定液浓度不足或固定时间过短，导致核固定不良。排查：检查固定液配制记录和标本固定时间。2.苏木精染色问题：染液陈旧、氧化过度，染色力下降。染色时间过短。分化过度（盐酸酒精过强或时间过长）。蓝化不足。排查：观察苏木精液表面是否有金属膜（氧化膜），试染新配苏木精液；调整分化时间。3.脱水/透明问题：白色沉淀可能是水份未脱净进入二甲苯形成乳浊液，或石蜡中含水。排查：检查脱水剂是否失效，组织处理程序时间是否足够。4.水质问题：蓝化或清洗用水不洁净，含有矿物质沉淀。排查：使用蒸馏水进行关键步骤。解决流程：1.首先检查并更换新鲜的苏木精染液，严格按照标准时间染色、分化和蓝化。2.若无效，检查组织处理机试剂浓度和更换记录，必要时重新处理该组织块（如果还有剩余组织）。3.确保使用过滤水或蒸馏水进行水洗。4.检查封片剂是否混浊。52.【