团体标准 延胡索霜霉病抗性鉴定与评价技术规程

团体标准延胡索霜霉病抗性鉴定与评价技术规程团体标准编号：T/SZFAA28—2026英文标题：GroupStandard-TechnicalSpecificationforResistanceIdentificationandEvaluationofCorydalisyanhusuoDownyMildew1范围本标准规定了延胡索霜霉病抗性鉴定与评价的术语和定义、鉴定原则、鉴定材料、鉴定条件、鉴定方法、病情分级、抗性评价、鉴定档案及结果报告等内容。本标准适用于我国延胡索主产区（浙江、江苏、安徽、湖北、湖南、四川、陕西等省份）的延胡索品种（系）、种质资源及栽培群体的霜霉病抗性鉴定与评价，涵盖科研单位、育种企业、规模化种植基地、基层农业技术推广部门及相关检测机构，为延胡索抗霜霉病品种选育、种质资源筛选、田间病害防控及优质安全生产提供科学技术依据。2规范性引用文件下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。GB/T19557.1植物品种特异性、一致性和稳定性测试指南总则GB/T23416.3蔬菜病虫害安全防治技术规范第3部分：药用植物NY/T393绿色食品农药使用准则NY/T1198农药残留分析样本的采样方法《中药材生产质量管理规范》（国家药品监督管理局）DB33/T655延胡索生产技术规程DB34/T2034药用植物霜霉病防治技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1延胡索霜霉病：由延胡索霜霉菌（PeronosporacorydalisdeBary）引起的延胡索主要真菌病害，主要危害叶片、叶柄及花梗，表现为叶片出现淡黄色褪绿斑、背面产生灰白色霉层，严重时叶片枯黄、卷曲、脱落，导致块茎发育不良、产量下降，甚至植株死亡的病害。3.2抗性鉴定：采用人工接种或自然诱发的方式，在可控或自然发病条件下，观察延胡索植株对霜霉病的感染程度、发病速度及受害表现，量化病情指标的试验过程。3.3人工接种鉴定：在人工控制的环境条件（温室、人工气候箱）下，将延胡索霜霉菌病原菌定向接种到延胡索植株上，诱导病害发生，进行抗性鉴定的方法，具有重复性好、鉴定周期短、结果准确的特点。3.4自然诱发鉴定：在延胡索主产区自然发病环境中，通过合理栽培管理，促进霜霉病自然发生，观察植株发病情况，进行抗性鉴定的方法，贴合田间实际种植条件，鉴定结果更具实用性。3.5病情指数（DI）：综合反映延胡索群体或个体发病严重程度的量化指标，结合病级划分，通过调查发病株数、病叶数及对应病级计算得出。3.6抗性等级：根据病情指数及发病表现，将延胡索对霜霉病的抗性划分为不同等级，明确其抗感程度，为品种选育和防控提供依据。4鉴定原则4.1科学性原则：鉴定材料选择、病原菌分离纯化、接种方法、病情调查及抗性评价等环节，遵循植物病理学及药用植物栽培学原理，确保试验设计合理、操作规范、数据可靠。4.2一致性原则：同一批次、同一种鉴定方法的鉴定条件（温度、湿度、光照、接种浓度等）保持一致，确保不同品种（系）、不同重复间的鉴定结果具有可比性。4.3实用性原则：结合延胡索田间种植实际，兼顾人工接种鉴定的准确性和自然诱发鉴定的实用性，鉴定方法简便易行、可操作性强，适配科研、生产及检测等不同场景。4.4安全性原则：病原菌培养、接种操作及病株处理过程中，严格遵守生物安全规范，防止病原菌扩散污染；试验所用试剂、药剂符合NY/T393要求，避免对环境和人体造成危害。4.5客观性原则：病情调查、数据记录及抗性评价严格按照标准执行，不受人为因素干扰，确保鉴定结果真实、客观、公正。5鉴定材料5.1供试材料5.1.1供试材料为延胡索品种（系）、种质资源或栽培群体，要求材料纯正、生长健壮、无病虫害，且生长整齐一致，每个品种（系）或种质资源至少3个重复，每个重复不少于30株（人工接种鉴定可适当减少，每个重复不少于15株）。5.1.2供试材料采用块茎繁殖，块茎大小均匀（直径0.8~1.2cm）、无损伤、无霉变，符合DB33/T655中延胡索种薯质量要求，播种前进行消毒处理（50%多菌灵可湿性粉剂500倍液浸泡15分钟，晾干后播种）。5.1.3设对照材料，选用已知抗性等级的延胡索品种：高抗（HR）对照、中抗（MR）对照、感病（S）对照、高感（HS）对照，对照品种需经过多年验证，抗性稳定，与供试材料同步种植、同步鉴定。5.2病原菌材料5.2.1病原菌来源：从延胡索主产区田间自然发病植株上采集典型病叶（叶片有淡黄色褪绿斑、背面有灰白色霉层），分离纯化得到延胡索霜霉菌纯菌株，经形态学鉴定和分子生物学鉴定确认无误后，用于人工接种鉴定。5.2.2病原菌培养：采用PDA培养基（马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18~20g、蒸馏水1000mL），在18~22℃、黑暗条件下培养7~10天，获得病原菌菌丝体；再转移至V8汁培养基中，在18~20℃、光照12h/d条件下培养5~7天，诱导产生孢子囊，用于接种。5.2.3病原菌保存：纯化后的菌株采用斜面低温保存（4℃），每3~6个月转接一次，确保病原菌活性；孢子囊悬浮液现配现用，配制后2h内完成接种，避免孢子囊失活。6鉴定条件6.1人工接种鉴定条件6.1.1环境条件：采用温室或人工气候箱培养供试植株，温度控制在18~22℃，相对湿度85%~95%，光照强度2000~3000lx，光照周期12h/d（光照）+12h/d（黑暗），接种后前3天保持黑暗、高湿度环境，促进病原菌侵染，之后恢复正常光照。6.1.2栽培条件：采用育苗盆（直径15cm、高12cm）或育苗床栽培，基质选用腐殖土:园土:河沙=2:2:1，提前灭菌（121℃高压蒸汽灭菌30分钟），每盆（或每穴）播种1块种薯，定期浇水，保持基质湿润，不施用杀菌剂，确保植株正常生长，避免因环境胁迫影响抗性鉴定结果。6.2自然诱发鉴定条件6.2.1环境条件：选择延胡索霜霉病常年发生、发病均匀的试验田，位于延胡索主产区，气候条件适配延胡索生长（年均气温15~20℃，年降水量800~1200mm，生长季湿度70%~85%），避免地势低洼、排水不畅或通风不良的地块。6.2.2栽培条件：试验田土壤为壤土或砂质壤土，pH值5.5~7.0，土壤有机质含量≥1.0%，符合《中药材生产质量管理规范》要求；采用常规栽培方式，播种时间、种植密度、施肥、浇水等管理措施统一，不施用杀菌剂，适当增加田间湿度（如傍晚浇水），促进霜霉病自然发生；种植小区采用随机区组设计，小区面积≥15㎡，小区间设置50cm隔离行，避免交叉感染。7鉴定方法7.1鉴定前期准备7.1.1供试材料种植：人工接种鉴定在温室或人工气候箱中播种，自然诱发鉴定在试验田播种，播种后加强田间管理，确保植株生长整齐，当植株长至3~4片真叶时（人工接种）或5~6片真叶时（自然诱发），开始进行鉴定。7.1.2病原菌准备：人工接种前，将培养好的延胡索霜霉菌孢子囊用无菌水冲洗，配制孢子囊悬浮液，浓度调整为1×10⁵~5×10⁵个/mL，加入0.05%吐温-80（表面活性剂），搅拌均匀，备用。7.1.3仪器设备准备：准备喷雾器（人工接种用，容量500mL）、显微镜、计数器、卷尺、标签、采样袋、培养皿、高压蒸汽灭菌锅、人工气候箱等仪器设备，提前消毒、调试，确保正常使用。7.2人工接种鉴定方法7.2.1接种时间：选择晴天上午9~11点或下午4~6点，此时植株叶片气孔张开，利于病原菌侵染，避免高温、强光时段接种。7.2.2接种方式：采用喷雾接种法，将配制好的孢子囊悬浮液均匀喷洒在供试植株叶片正反面，喷洒量以叶片表面湿润、不滴水为宜；对照材料与供试材料同步接种，接种后做好标签标记，注明品种名称、接种日期。7.2.3接种后管理：接种后将供试植株置于黑暗、高湿度（相对湿度85%~95%）环境中培养3天，之后转移至正常培养条件下，定期观察，保持植株生长环境湿润，不施用任何杀菌剂。7.2.4调查时间：接种后7天开始第一次病情调查，之后每3天调查一次，连续调查3次，记录每次调查的病情情况；若植株发病较快，可适当缩短调查间隔，直至病情稳定（连续两次调查病情指数差异≤5%）。7.3自然诱发鉴定方法7.3.1诱发处理：供试植株生长期间，不施用杀菌剂，通过傍晚浇水、保留田间杂草（适量）等方式，提高田间湿度，促进霜霉病自然发生；若田间自然发病较轻，可采集田间典型病叶，粉碎后加水制成菌悬液，均匀喷洒在供试植株上，辅助诱发病害。7.3.2调查时间：从延胡索霜霉病田间首次发病开始调查，每5天调查一次，连续调查4次，记录每次调查的病情情况；调查时间选择晴天上午，避免雨天或露水未干时调查，防止病情判断误差。7.3.3调查方法：采用对角线取样法，每个小区随机选取5个取样点，每个取样点选取10株植株，逐株调查全部叶片的发病情况，记录病叶数、病级，计算每个取样点的病情指数，最终取5个取样点的平均值作为该小区的病情指数。7.4病情调查要点7.4.1调查时逐株记录供试材料的发病情况，区分健康叶与病叶，根据病级划分标准，判断每片病叶的病级，避免漏记、错记。7.4.2调查过程中，及时标记发病植株，避免重复调查；对于人工接种鉴定，若植株出现非霜霉病症状（如叶斑病、蚜虫危害），应予以排除，不纳入病情统计。7.4.3每次调查后，及时整理数据，计算病情指数，做好记录，确保数据可追溯；调查结束后，将病株集中销毁（高温灭菌或深埋），防止病原菌扩散。8病情分级与病情指数计算8.1病情分级标准根据延胡索叶片发病面积占总叶面积的比例及发病表现，将延胡索霜霉病病级划分为0~4级，具体分级标准如下：0级（无病）：植株叶片无任何病斑，叶片颜色正常，无灰白色霉层；1级（轻度发病）：病叶数占总叶数的比例≤10%，单个病斑面积占叶片总面积的比例≤5%，叶片仅出现少量淡黄色褪绿斑，背面无明显霉层或有少量稀疏霉层；2级（中度偏轻发病）：10%＜病叶数占总叶数的比例≤30%，5%＜单个病斑面积占叶片总面积的比例≤15%，叶片有较多淡黄色褪绿斑，部分病斑融合，背面有明显灰白色霉层；3级（中度偏重发病）：30%＜病叶数占总叶数的比例≤50%，15%＜单个病斑面积占叶片总面积的比例≤30%，叶片病斑大量融合，呈黄褐色，背面灰白色霉层浓密，部分叶片轻微卷曲；4级（重度发病）：病叶数占总叶数的比例＞50%，单个病斑面积占叶片总面积的比例＞30%，叶片大部分枯黄、卷曲，背面霉层厚实，部分叶片脱落，植株生长受阻，严重时整株死亡。8.2病情指数计算病情指数（DI）采用下列公式计算，计算结果保留1位小数：DI=式中：DI——病情指数；n_i——第i级病叶数（株数）；s_i——第i级病级值（0、1、2、3、4）；N——调查总叶数（总株数）；S——最高病级值（4）。注：人工接种鉴定可按单株计算病情指数，自然诱发鉴定按小区计算病情指数，最终取多次调查的平均值作为最终病情指数。9抗性评价9.1评价依据以供试材料的最终病情指数（多次调查的平均值）为核心评价依据，结合对照材料的发病情况，综合评价供试材料对延胡索霜霉病的抗性等级；若供试材料在鉴定过程中出现发病速度明显慢于对照、病斑扩展缓慢等表现，可适当调整抗性等级（不超过1个等级）。9.2抗性等级划分将延胡索对霜霉病的抗性划分为5个等级，具体划分标准如下：9.2.1高抗（HR）：病情指数（DI）≤10.0，植株几乎不发病，仅少数叶片出现轻微褪绿斑，无霉层或有少量稀疏霉层，病情无明显扩展；9.2.2中抗（MR）：10.0＜病情指数（DI）≤30.0，植株轻度至中度发病，病叶数较少，病斑较小，背面霉层稀疏，病情扩展缓慢，对植株生长影响较小；9.2.3中感（MS）：30.0＜病情指数（DI）≤50.0，植株中度发病，病叶数较多，部分病斑融合，背面有明显霉层，病情有一定扩展，对植株生长有轻度影响；9.2.4感病（S）：50.0＜病情指数（DI）≤70.0，植株中度偏重至重度发病，病叶数多，病斑大量融合，背面霉层浓密，叶片出现卷曲，病情扩展较快，对植株生长影响较大；9.2.5高感（HS）：病情指数（DI）＞70.0，植株严重发病，病叶数占比极高，叶片大量枯黄、卷曲、脱落，背面霉层厚实，病情扩展迅速，植株生长严重受阻，甚至整株死亡。9.3评价注意事项9.3.1抗性评价需结合对照材料的发病情况，若对照材料的病情指数未达到对应抗性等级标准（如高感对照DI≤70.0），则本次鉴定结果无效，需重新进行鉴定。9.3.2同一供试材料需进行至少2次重复鉴定（不同批次或不同年份），若两次鉴定结果的抗性等级一致，方可最终确定其抗性等级；若两次鉴定结果差异超过1个等级，需增加鉴定次数，直至结果稳定。9.3.3自然诱发鉴定中，若田间发病不均匀或发病较轻（多数供试材料DI≤30.0），可视为鉴定条件不足，需补充人工辅助诱发，重新调查评价。10鉴定档案管理10.1档案内容：建立延胡索霜霉病抗性鉴定“一份材料一档”，档案包括供试材料基本信息（品种名称、来源、种质编号、繁殖方式、种薯质量）、病原菌信息（来源、分离纯化记录、培养条件）、鉴定条件（环境参数、栽培管理记录）、鉴定过程记录（接种时间、调查时间、病情数据、调查人）、病情指数计算表、抗性评价结果、对照材料发病情况及鉴定结论等内容。10.2管理要求：档案采用纸质与电子双重归档，电子档案加密存储、定期备份（每月至少1次）；档案及时更新，详实记录各环节信息，无涂改、无遗漏，保存期限不少于6年；建立档案查阅制度，规范查阅流程，确保鉴定过程可追溯，为后续品种选育、抗性验证提供依据；规