丙氨酰谷氨酰胺注射液H20010314质量标准

H20010314丙氨酰谷氨酰胺注射液Bing'anxianGu'anxian'anZhusheyeAlanylGlutamineInjection本品为L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的灭菌水溶液。含L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(C8H15N3O4)应为标示量的90～105％。【性状】本品为无色澄明液体。【鉴别】取本品与L-丙氨酰-L-谷氨酰胺对照品，照含量测定项下的高效液相色谱法试验，供试品主峰的保留时间应与对照品主峰一致。【检查】pH值应为5.4～6.0(中国药典2000年版二部附录VIH)。吸收度取本品，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IVA)，在400nm的波长处测定，吸收度不得过0.05。不溶性微粒取本品，依法检查(中国药典2000年版二部附录IXC)，每1ml中含10m以上的微粒不得过20粒，含25m以上的微粒不得过2粒。氨试验应在20～25℃条件下进行。精密量取本品10.0ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取还原型辅酶I溶液(NADH)[取还原型辅酶I(0.4mg/片)1片，加2-氧代戊二酸缓冲液(在pH8.0的盐酸三乙醇胺缓冲液60ml中含2-氧代戊二酸220mg)2ml使溶解，即得。(此液4℃可保存3天)]1.0ml，置吸收池中，加供试品溶液0.1ml，加水1.9ml，混匀，反应5分钟，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IVA)，以空气或水为参比，在340nm的波长处测定吸收度，至读数恒定后测得吸收度A1。再加入谷氨酸脱氢酶(GLDH)溶液0.02ml混匀，约20分钟后测定吸收度，至读数恒定后测得吸收度A2。另以水0.1ml代替供试品溶液，按上述操作，测定空白溶液的吸收度分别为B1、B2。按下式计算，即得。含氨不得过340mg/L。C(mg/L)=81.64×[(A1-A2)-(B1-B2)]×nn:样品稀释倍数有关物质照高效液相色谱法试验(中国药典2000年版二部附录VD)。1、环合产物等色谱条件与系统适用性试验用阳离子交换树脂为填充剂；0.005mol/L硫酸溶液为流动相，检测波长为215nm，流速0.6ml/min，柱温30℃。对照品色谱图上各色谱峰的分离度应符合要求。对照品溶液的制备分别精密称取环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)、环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰)、L-焦谷氨酰-L-丙氨酸、L-焦谷氨酸各约6mg，分别置25ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)5.0ml、环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰)0.3ml、L-焦谷氨酰-L-丙氨酸3.3ml、L-焦谷氨酸1.3ml，置同一50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备取本品，加水制成每1ml中含L-丙氨酰-L-谷氨酰胺约2.5mg的溶液，即得。测定法取对照品溶液20l注入液相色谱仪，保留时间10分钟以后各组分出峰顺序如下：环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰)、L-焦谷氨酰-L-丙氨酸、L-焦谷氨酸、环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)。调节检测灵敏度，使环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰)色谱峰的峰高不低于记录仪满标度的10％。取供试品溶液20l注入液相色谱仪，记录色谱峰，按外标法以峰面积计算各有关物质含量，供试品溶液中主成分的实际浓度由含量测定项下测定的数值经稀释倍数折算。含环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)、环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰)、L-焦谷氨酰-L-丙氨酸、L-焦谷氨酸的量分别不得过L-丙氨酰-L-谷氨酰胺量的6.0％、0.05%、0.65%、0.25%。2、其他降解产物及副产物色谱条件与系统适用性试验同含量测定项下方法，对照品色谱图上各色谱峰的分离度应符合要求。对照品溶液的制备分别精密称取环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)、环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰)、L-焦谷氨酰-L-丙氨酸、L-焦谷氨酸、D-丙氨酰-L-谷氨酰胺、L-丙氨酰-L-谷氨酰胺、L-丙氨酰-L-谷氨酸各约6mg，分别置25ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀；精密量取环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)5.0ml、环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰)0.3ml、L-焦谷氨酰-L-丙氨酸3.3ml、L-焦谷氨酸1.3ml、D-丙氨酰-L-谷氨酰胺1.3ml、L-丙氨酰-L-谷氨酸5.0ml，置同一50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备取本品，加流动相制成每1ml中含L-丙氨酰-L-谷氨酰胺约2.5mg的溶液，即得。测定法取对照品溶液20l注入液相色谱仪，环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)色谱峰相对于L-丙氨酰-L-谷氨酰胺色谱峰的保留时间约为0.3，在此色谱峰之前所显示的各色谱峰为溶剂峰，不做积分，有关物质各组分出峰顺序如下：环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)、环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰)、L-焦谷氨酰-L-丙氨酸、L-焦谷氨酸、D-丙氨酰-L-谷氨酰胺(或L-丙氨酰-D-谷氨酰胺)、L-丙氨酰-L-谷氨酰胺、L-丙氨酰-L-谷氨酸。调节检测灵敏度，使环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰)色谱峰的峰高不低于记录仪满标度的10％。取供试品溶液20l注入液相色谱仪，记录色谱峰，按外标法以峰面积计算有关物质含量，供试品溶液中主成分的浓度由含量测定项下测定的数值经稀释倍数折算。含D-丙氨酰-L-谷氨酰胺(或L-丙氨酰-D-谷氨酰胺)、L-丙氨酰-L-谷氨酸的量分别不得过L-丙氨酰-L-谷氨酰胺量的0.25％、1.0％。其他未知杂质单一色谱峰面积不得过主峰面积的0.5％，未知杂质色谱峰面积总和不得过主峰面积的1.0％。无菌取本品5瓶(500ml或250ml)，以无菌操作用全封闭式薄膜过滤器过滤。除加入需厌氧培养基和霉菌培养基100ml外，其它均按中国药典2000年版无菌检查法中薄膜过滤法检验，应符合规定。细菌内毒素取本品，依法检查(中国药典2000年版二部附录XIE)，每1ml中含细菌内毒素不得过0.5EU/ml，另设两支干扰管同时进行试验。其它应符合注射剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版二部附录IB)。【含量测定】照高效液相色谱法试验(中国药典2000年版二部附录VD)。色谱条件与系统适用性试验用氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈：0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH4)(650：350)为流动相，检测波长为215nm，流速0.7ml/min。理论板数按L-丙氨酰-L-谷氨酰胺色谱峰计算应不低于3000。测定法精密量取本品适量，加水制成每1ml中约含0.05mg的溶液，作为供试品溶液。另取L-丙氨酰