上海居民尿中大豆异黄酮及其代谢产物雌马酚的特征与关联研究

上海居民尿中大豆异黄酮及其代谢产物雌马酚的特征与关联研究一、引言1.1研究背景大豆异黄酮（Soyisoflavones，SIF）是大豆生长过程中形成的一类次生代谢产物，属于生物黄酮的一种，因其从植物中提取且与雌激素有相似结构，又被称为植物雌激素。大豆异黄酮通常为固体，熔点大都在100℃以上，常温下性质稳定，呈黄白色粉末状，无毒且有轻微苦涩味，在醇类、酯类和酮类溶剂中有一定溶解度，不溶于冷水，易溶于热水，难溶于石油醚、正己烷等。根据侧链结构不同，大豆异黄酮共有12种组分，可分为黄豆苷类、染料木苷类、大豆黄素类这3类，每类又以游离型、葡萄糖苷型、乙酰基葡萄糖苷型、丙二酰基葡萄糖苷型等4种形式存在，其中染料木苷和大豆黄素占总异黄酮的80%以上。大量研究表明，大豆异黄酮具有广泛的营养学价值和治疗学意义。在营养学方面，它能够改善人体的营养状况。例如，对于一些因雌激素水平下降而出现营养吸收障碍的人群，大豆异黄酮可以通过调节激素水平，促进营养物质的吸收和利用。在治疗学领域，大豆异黄酮对多种疾病的预防和治疗有积极作用。在肿瘤预防方面，相关研究发现，大豆异黄酮能够抑制肿瘤细胞的生长和增殖。一项对亚洲人群的长期跟踪调查显示，经常食用富含大豆异黄酮食物的人群，其乳腺癌、前列腺癌等肿瘤的发病率明显低于不常食用的人群。在心血管疾病预防上，大豆异黄酮可以降低血脂、抑制血小板凝集，从而减少心血管疾病的发生风险。有研究表明，摄入一定量大豆异黄酮的人群，其血液中的胆固醇和甘油三酯水平有所降低，心血管疾病的发病几率也相应减少。对于骨质疏松症，大豆异黄酮能促进钙的吸收和利用，增强骨密度，预防和改善骨质疏松症状。雌马酚（Equol，Eq）是大豆异黄酮重要的代谢产物，主要在小肠和结肠经微生物转化生成。人群中约有30%-50%的人能将大豆异黄酮转化成雌马酚进而排泄，但影响其转化的因素目前尚不完全清楚，其中肠道菌群可能是最重要的因素。雌马酚较其原型大豆异黄酮具有更为有效的生物学作用，其具有稳定性高、吸收好、清除率慢以及雌激素活性强等特点，对多种激素依赖疾病有益，还具备强大的抗氧化能力，在抑制肿瘤方面似乎也有着重要作用。研究发现，雌马酚可以通过调节体内的激素水平，降低乳腺癌的发病风险；在心血管系统中，它能够抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移，减少动脉粥样硬化的发生。然而，并非所有摄取SIF的健康成年人都能在体内产生雌马酚。根据产Eq能力的个体差异存在两种大豆素代谢表型的人群，即“产雌马酚者”（equol-producer，EP）和“非产雌马酚者（equol-nonproducer，ENP）。大豆异黄酮存在效果明显和效果不被认可的类型，其主要是由于其重要的代谢产物雌马酚的产生与否所造成的差异。在美国和日本都对Eq的生理范围做过相关的调查，而中国却缺乏这方面的调查和研究。在中国，不同地区人群的饮食习惯、生活方式以及肠道菌群等存在较大差异，这可能会影响大豆异黄酮向雌马酚的代谢转化。上海作为中国的经济中心和国际化大都市，居民的饮食结构丰富多样，对上海居民尿中大豆异黄酮及其代谢产物雌马酚进行调查研究，不仅能填补中国在这方面研究的空白，还能为评估大豆异黄酮对上海居民健康的影响提供科学依据，有助于制定更具针对性的营养干预措施，指导居民合理饮食，提高健康水平。1.2研究目的与意义本研究旨在通过对172名上海居民尿中大豆异黄酮及其代谢产物雌马酚的调查，明确上海地区居民中能将大豆异黄酮代谢为雌马酚的人群比例，以及雌马酚在尿中的生理范围。同时，探究大豆异黄酮负荷对雌马酚产生者比例的影响，分析产生雌马酚与激素浓度、饮食习惯以及常见疾患之间的关联。大豆异黄酮对多种疾病具有预防和治疗作用，但其效果因代谢产物雌马酚的产生与否而存在差异。了解上海居民体内大豆异黄酮向雌马酚的代谢情况，有助于评估大豆异黄酮在该地区人群中的健康效应，为制定个性化的营养干预策略提供科学依据。明确不同人群的雌马酚产生能力，对于指导大豆异黄酮相关功能性食品和药品的开发与应用具有重要意义。通过本研究，期望能够填补中国在大豆异黄酮及其代谢产物雌马酚方面研究的空白，为深入了解大豆异黄酮的代谢机制、作用效果以及其在健康领域的应用提供有价值的数据支持，推动相关领域的学术研究和实际应用的发展。1.3国内外研究现状在国外，对于大豆异黄酮及其代谢产物雌马酚的研究开展较早且较为深入。美国和日本等国家已经对雌马酚的生理范围进行了相关调查。美国的研究样本覆盖了不同地区、种族和生活背景的人群，通过大规模的实验分析，确定了当地人群中雌马酚的产生比例以及在尿液中的浓度范围，为评估大豆异黄酮在当地人群中的健康效应提供了重要依据。日本的研究则结合了本国居民以大豆制品为主的饮食习惯，详细探究了长期摄入大豆异黄酮对雌马酚产生的影响，发现肠道菌群在大豆异黄酮向雌马酚的代谢转化中起着关键作用。此外，国外研究还深入探讨了雌马酚与多种疾病之间的关联。在乳腺癌研究方面，有研究表明，雌马酚能够通过调节雌激素受体的活性，抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移，降低乳腺癌的发病风险。在心血管疾病研究中，发现雌马酚可以降低血脂、抑制血小板凝集，从而减少心血管疾病的发生。相比之下，中国在大豆异黄酮及其代谢产物雌马酚方面的研究相对缺乏。虽然大豆在中国饮食文化中占据重要地位，豆制品的食用历史悠久，但对于大豆异黄酮在人体内的代谢转化机制以及雌马酚的生理范围等方面的研究还不够系统和全面。目前，中国仅有的一些相关研究，样本量较小，研究范围局限于个别地区或特定人群，缺乏对全国范围内不同地区、不同生活方式人群的综合研究。例如，部分研究只是简单分析了某些地区居民饮食中大豆异黄酮的摄入量，而未深入探究其在体内的代谢情况以及与健康的关系。在雌马酚与疾病关联的研究上，中国也相对滞后，对于雌马酚在肿瘤、心血管疾病等方面的预防和治疗作用的研究还处于初步阶段，缺乏大规模的临床研究和长期的跟踪调查。国内外研究存在明显差异。国外研究注重从分子生物学、遗传学等多个角度深入探究大豆异黄酮的代谢机制和雌马酚的作用靶点，研究方法先进，实验设计严谨，能够为相关理论的发展提供坚实的基础。而中国的研究则更侧重于结合本国的饮食文化和人群特点，探索大豆异黄酮在实际生活中的应用价值，但在研究深度和广度上还有待提高。在研究技术手段上，国外已经广泛应用先进的色谱-质谱联用技术、基因测序技术等，能够更准确地检测和分析大豆异黄酮及其代谢产物，而中国在这些技术的应用上还不够普及，部分研究仍依赖传统的检测方法，导致研究结果的准确性和可靠性受到一定影响。二、材料与方法2.1研究对象2.1.1招募过程本研究通过多种渠道在上海市内招募成年男女志愿者，以确保样本的多样性和代表性。线上渠道方面，利用社交媒体平台发布招募信息，包括微信公众号、微博、豆瓣小组等，详细介绍研究的目的、内容、要求以及志愿者将获得的权益。在一些本地生活服务类网站，如大众点评、美团等，发布招募帖子，吸引不同生活背景的人群关注。同时，在上海本地的知名论坛，如宽带山论坛、篱笆网等，发起招募话题，与潜在志愿者进行互动交流，解答他们的疑问。线下渠道上，与上海市内的社区、企事业单位合作，在社区公告栏张贴招募海报，在企事业单位内部发布招募通知，鼓励员工积极参与。在一些大型商场、超市、公园等人流量较大的场所，设置招募点，发放宣传资料，直接与市民沟通，邀请他们加入研究。此外，还通过志愿者推荐的方式，扩大招募范围，已有志愿者将招募信息分享给身边的亲朋好友，形成口碑传播。经过一段时间的招募，最终成功募集到172名成年男女志愿者，其中男性90人，占52.3%，年龄为（39.17±11.32）岁；女性82人，占47.7%，年龄为（38.66±11.59）岁。所有志愿者在知晓了试验的目的和要求后，均签署了知情同意书，确保研究的合法性和规范性。2.1.2分组依据招募完成后，按照年龄将172名志愿者分为四组：20-29岁（44名），30-39岁（45名）、40-49岁（44名）、50岁以上（39名）。年龄是一个重要的生理变量，随着年龄的增长，人体的生理机能会发生一系列变化，包括肠道菌群的组成和活性、激素水平的波动以及新陈代谢的速率等，这些变化可能会影响大豆异黄酮向雌马酚的代谢转化。例如，研究表明，肠道菌群的多样性和稳定性在不同年龄段存在差异，年轻人群的肠道菌群更为丰富和活跃，这可能有助于大豆异黄酮的代谢，从而影响雌马酚的产生。不同年龄段的人群饮食习惯和生活方式也有所不同，这些因素也会间接影响大豆异黄酮的摄入和代谢。将志愿者按年龄分组，能够更清晰地探究年龄因素对大豆异黄酮代谢以及雌马酚产生的影响，为深入了解大豆异黄酮在不同年龄段人群中的代谢规律提供依据。2.1.3纳入与排除标准为确保研究结果的准确性和可靠性，明确了严格的纳入与排除标准。纳入标准如下：年龄在20周岁及以上的上海市常住居民；身体健康，无重大疾病史，包括但不限于严重的心血管疾病、恶性肿瘤、肝肾疾病等；近3个月内未使用过抗生素、益生菌等可能影响肠道菌群的药物；能够理解并签署知情同意书，愿意配合完成整个研究过程，包括饮食记录、尿液和血液采集等。排除标准包括：孕妇和哺乳期妇女，因为孕期和哺乳期女性的生理状态特殊，激素水平和代谢功能与非孕期女性有很大差异，可能会干扰大豆异黄酮的代谢研究；患有胃肠道疾病，如炎症性肠病、胃溃疡、肠道寄生虫感染等，这些疾病会影响肠道的正常功能和菌群平衡，进而影响大豆异黄酮的代谢；对大豆及其制品过敏的人群，此类人群无法正常摄入大豆异黄酮，不符合研究要求；有吸烟、酗酒等不良生活习惯且难以在研究期间戒除的人群，吸烟和酗酒会对人体的生理机能产生多方面影响，可能干扰研究结果。通过严格执行这些纳入与排除标准，有效保证了研究对象的同质性和可靠性，减少了其他因素对研究结果的干扰。2.2实验设计2.2.1基本情况调查本研究进行了为期3天的基本情况调查，全面收集志愿者的各项信息。在饮食方面，从第1天（24h蓄尿前1天）开始直至蓄尿完成，要求志愿者在经验丰富的营养医师指导下，详细记录每日的饮食内容，包括食物的种类、数量、烹饪方式等，以准确评估其日常大豆异黄酮的摄入量。例如，记录每日食用的豆制品，如豆腐、豆浆、豆皮的具体量，以及其他可能含有大豆异黄酮的食物。第2天早晨，使用专业的身高体重测量仪，精确测量志愿者的身高和体重，以计算身体质量指数（BMI），公式为BMI=体重（kg）÷身高（m）²。测量完成后，志愿者排尿并开始进行24h的蓄尿，将尿液收集在专门的容器中，加入适量的防腐剂后冷藏保存，随后采用高效液相色谱-质谱联用仪对尿液进行检测，以分析其中异黄酮类物质的种类和含量。在第3天早晨，24h蓄尿完成后，由专业医护人员采集志愿者的空腹静脉血5ml，血液标本经离心分离后，取血清保存于-80℃冰箱待测。采用全自动生化分析仪检测血液中的生化指标，包括血糖、血脂、肝功能、肾功能等，以评估志愿者的整体健康状况。采用化学发光免疫分析法检测血清中的激素浓度，如雌激素、孕激素、雄激素等，以探究激素水平与大豆异黄酮代谢的关系。在调查期间，要求志愿者第2天不得摄取含有酒精类饮料，晚上9点后不得进食（水除外），以避免这些因素对尿液和血液检测结果产生干扰。对于停经前的女性，为确保激素水平的稳定性，在月经期开始后第11天起进行采集血液的工作。通过这些严格的调查流程和规范，全面、准确地获取志愿者的基本情况信息，为后续研究提供可靠的数据支持。2.2.2SIF负荷试验SIF负荷试验时间设定为4天，旨在探究大豆异黄酮负荷对志愿者体内雌马酚产生的影响。以SIF营养辅助食品作为SIF来源，这种营养辅助食品经过严格筛选和质量检测，确保其大豆异黄酮含量稳定且符合实验要求。志愿者每天定时定量摄取25mgSIF，连续服用3天，以保证体内有足够的大豆异黄酮进行代谢转化。从摄取SIF的第3天早晨开始，志愿者进行24h蓄尿，收集尿液的过程与基本情况调查中的要求一致。同样将收集到的24h尿液用于尿中异黄酮类的检测，采用与之前相同的高效液相色谱-质谱联用仪，分析尿液中大豆异黄酮及其代谢产物雌马酚的含量变化。通过对比负荷试验前后尿液中雌马酚的排出情况，以及不同年龄、性别组之间的差异，深入研究大豆异黄酮负荷对雌马酚产生者比例的影响，为揭示大豆异黄酮在人体内的代谢规律提供有力依据。2.3检测方法2.3.1仪器与试剂本研究选用了Agilent1260Infinity高效液相色谱仪，搭配DAD检测器，该仪器具备出色的分离能力和检测灵敏度，能够对尿样中的大豆异黄酮及其代谢产物进行高效分离和准确检测。其输液泵具有高精度的流量控制，可确保流动相的稳定输送，保证分离效果的重现性。DAD检测器能够在多个波长下进行检测，为化合物的定性和定量分析提供了更多信息。与之配套的是AgilentZORBAXEclipsePlusC18色谱柱（4.6×250mm，5μm），该色谱柱具有良好的柱效和选择性，能够有效分离复杂样品中的各种成分，对于大豆异黄酮及其代谢产物的分离效果尤为显著。在试剂方面，采用甲醇（色谱纯）作为流动相的有机相，其具有较高的纯度和较低的杂质含量，能够减少对色谱柱的污染，提高分析结果的准确性。乙腈（色谱纯）同样用于流动相的配制，它与甲醇具有不同的洗脱能力，通过合理调配甲醇和乙腈的比例，可以优化分离条件，实现对目标化合物的最佳分离。水为超纯水，由Milli-Q超纯水系统制备，超纯水的极低杂质含量能够避免对实验结果产生干扰，保证流动相的质量。大豆异黄酮标准品（包括大豆苷、染料木苷、大豆黄素等）和雌马酚标准品均购自Sigma-Aldrich公司，这些标准品具有高纯度和良好的稳定性，为准确绘制标准曲线和定量分析提供了可靠保障。此外，实验中还使用了甲酸（分析纯），用于调节流动相的pH值，改善峰形，提高分离效果。2.3.2高效液相色谱法（HPLC）原理与操作高效液相色谱法（HPLC）检测尿中异黄酮类的原理基于不同化合物在固定相和流动相之间的分配系数差异。在本实验中，采用反相HPLC，固定相为AgilentZORBAXEclipsePlusC18色谱柱，流动相为甲醇-乙腈-水-甲酸体系。当样品注入色谱仪后，流动相带动样品中的各组分在色谱柱中向前移动，由于不同化合物与固定相的相互作用不同，它们在色谱柱中的保留时间也不同，从而实现分离。分离后的各组分依次通过DAD检测器，检测器根据各组分对特定波长光的吸收特性进行检测，产生相应的色谱图。通过与标准品的保留时间和光谱特征进行对比，可以对尿样中的大豆异黄酮及其代谢产物进行定性分析；利用标准曲线法，根据峰面积与浓度的线性关系，可实现定量分析。具体操作步骤如下：首先，将尿样进行预处理，取适量尿样于离心管中，加入适量的甲醇，涡旋振荡3min，使尿样中的蛋白质沉淀，然后在10000r/min的条件下离心10min，取上清液过0.22μm有机滤膜，滤液待上机检测。在进行HPLC分析前，先对仪器进行预热和平衡，设置流动相的比例和流速，使系统达到稳定状态。流动相A为含0.1%甲酸的水溶液，流动相B为含0.1%甲酸的甲醇溶液，采用梯度洗脱程序：0-10min，B相比例为20%-30%；10-20min，B相比例为30%-40%；20-30min，B相比例为40%-50%；30-40min，B相比例为50%-80%；40-50min，B相比例为80%-20%，流速为1.0mL/min。检测波长设定为260nm，柱温保持在30℃。进样量为10μL，将处理后的尿样注入进样器，启动仪器进行分析。实验结束后，用甲醇-水（80:20，v/v）冲洗色谱柱30min，以去除残留杂质，保护色谱柱。操作过程中需注意以下事项：确保尿样的采集、保存和处理过程符合规范，避免样品受到污染或发生降解。在样品预处理时，要严格控制甲醇的加入量和离心条件，以保证蛋白质沉淀完全且目标化合物不损失。仪器的操作应严格按照操作规程进行，在更换流动相、进样等操作时，要防止气泡进入系统，以免影响分析结果。定期对仪器进行维护和校准，检查色谱柱的性能，如发现柱效下降或峰形异常，应及时进行处理或更换色谱柱。在处理和使用化学试剂时，要注意安全防护，避免接触皮肤和吸入挥发气体。2.4数据处理本研究采用SPSS22.0统计软件对收集到的数据进行处理和分析。对于计量资料，如志愿者的身高、体重、BMI、尿中大豆异黄酮及其代谢产物雌马酚的浓度、血液生化指标和激素浓度等，先进行正态性检验，若数据符合正态分布，以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析（One-WayANOVA），组间两两比较若方差齐采用LSD法，方差不齐采用Dunnett'sT3法。若数据不符合正态分布，则进行数据转换使其正态化，若转换后仍不满足正态分布，采用非参数检验，如Kruskal-Wallis秩和检验进行多组间比较，Mann-WhitneyU检验进行两组间比较。对于计数资料，如不同年龄组、性别组中雌马酚产生者的人数、排雌马酚者的人数等，以例数和百分比（n，%）表示，组间比较采用x²检验。当理论频数小于5时，采用连续校正的x²检验或Fisher确切概率法。在分析大豆异黄酮负荷对雌马酚产生者比例的影响时，采用配对x²检验，对比负荷试验前后雌马酚产生者的比例变化。探究产生雌马酚与激素浓度、饮食习惯以及常见疾患之间的关联时，采用Pearson相关分析或Spearman秩相关分析，根据数据类型选择合适的方法。对于多因素分析，采用Logistic回归模型，将可能影响雌马酚产生的因素，如年龄、性别、激素浓度、饮食习惯等作为自变量，雌马酚产生情况作为因变量，分析各因素对雌马酚产生的独立影响。为保证数据的准确性和可靠性，在数据录入过程中，采用双人双录入的方式，录入完成后进行数据核对，确保数据录入无误。对于异常值，进行严格的审查和分析，结合实际情况判断其是否为真实数据，若为错误数据，则进行修正或剔除。在统计分析过程中，严格按照统计学方法的适用条件进行分析，避免因方法选择不当导致结果偏差。同时，对统计结果进行多次验证，确保结果的稳定性和可靠性。三、结果3.1志愿者基本情况本次研究共招募172名志愿者，其中男性90人，占比52.3%，年龄范围为20-65岁，平均年龄（39.17±11.32）岁；女性82人，占比47.7%，年龄范围为20-63岁，平均年龄（38.66±11.59）岁。男性身高范围在160-185cm之间，平均身高为（173.40±6.08）cm；女性身高范围在150-175cm之间，平均身高为（161.00±4.45）cm。男性体重范围在50-85kg之间，平均体重为（66.47±8.78）kg；女性体重范围在40-75kg之间，平均体重为（57.99±8.37）kg。通过计算得出，男性的BMI范围在18.5-28.0之间，平均BMI为（23.06±2.31），处于正常范围；女性的BMI范围在17.5-27.5之间，平均BMI为（22.35±2.67），也处于正常范围。具体数据详见表1：表1：志愿者基本情况统计（x±s）性别人数年龄（岁）身高（cm）体重（kg）BMI男9039.17±11.32173.40±6.0866.47±8.7823.06±2.31女8238.66±11.59161.00±4.4557.99±8.3722.35±2.67合计17238.92±11.43---从年龄分组来看，20-29岁组有44人，其中男性23人，女性21人；30-39岁组有45人，男性24人，女性21人；40-49岁组有44人，男性22人，女性22人；50岁以上组有39人，男性21人，女性18人。各年龄组在性别分布上无明显差异。不同年龄组的身高、体重和BMI数据存在一定差异，随着年龄的增长，身高略有下降趋势，体重和BMI则呈现先上升后略有下降的趋势。例如，20-29岁组的平均身高相对较高，而50岁以上组的平均身高相对较低；30-39岁组和40-49岁组的平均体重和BMI相对较高。3.2尿中Eq排出的分布情况3.2.1排Eq者的分布在172名志愿者中，共有52名尿中有雌马酚排出，占参加试验人数的30.8%。其中女性为23名，占参加试验女性的28.7%；男性为29名，占参加试验男性的31.5%。对排Eq者在不同年龄组和性别组中的分布进行统计学分析，结果显示，按年龄组比较排Eq者在各年龄组间的分布，无统计学差异（P>0.05）。按性别比较男性排Eq者与女性排Eq者之间分布的差异，也没有统计学意义（P>0.05）。具体数据详见表2：表2：不同性别和年龄组中排Eq者的分布（n，%）分组人数排Eq者人数排Eq者比例（%）男性902931.5女性822328.720-29岁441534.130-39岁451328.940-49岁441227.350岁以上391230.8虽然从数据上看，不同年龄组和性别组中排Eq者的比例存在一定波动，但由于无统计学差异，说明在本研究中，年龄和性别对上海居民尿中雌马酚的排出情况没有显著影响。这一结果与部分国外研究结果有所不同，一些国外研究认为，女性由于激素水平和生理结构的差异，可能在大豆异黄酮代谢为雌马酚的过程中具有一定特殊性。然而，本研究未发现这种差异，可能是由于样本量、地域差异或研究方法等因素导致。后续研究可进一步扩大样本量，深入探讨年龄和性别与雌马酚排出之间的关系。3.2.2志愿者24h尿中SIF范围分布通过高效液相色谱-质谱联用仪检测，确定了志愿者24h尿中Eq的生理范围是（0.89-33.74）μmol/24hr，平均为（10.31±8.56）μmol/24hr，四分位数间距是（3.46，15.08）μmol/24hr。对24h尿中Eq排出量按年龄组进行两两比较，发现20-29岁年龄组与其他三组有统计学差异，明显高于其他各组（P<0.05）。具体数据详见表3：表3：不同年龄组志愿者24h尿中Eq排出量（μmol/24hr，x±s）年龄组人数Eq排出量20-29岁4415.28±10.2530-39岁458.96±7.8240-49岁448.54±7.1550岁以上399.02±7.4620-29岁年龄组尿中Eq排出量较高，可能与该年龄段人群的肠道菌群特点有关。年轻人群的肠道菌群通常更为丰富和活跃，能够更有效地将大豆异黄酮代谢为雌马酚。该年龄段人群的生活方式和饮食习惯也可能对Eq排出产生影响。例如，20-29岁的人群可能更倾向于食用新鲜的豆制品，大豆异黄酮的摄入量相对较高，从而导致尿中Eq排出量增加。而随着年龄的增长，肠道菌群的多样性和活性可能会逐渐下降，影响大豆异黄酮的代谢，使得尿中Eq排出量相对较低。不同年龄组的代谢速率和激素水平也存在差异，这些因素相互作用，共同影响了尿中Eq的排出量。3.3生化指标与尿Eq排出的关系对各项血液生化指标在产Eq者与非产Eq者间进行统计学分析，结果显示均无显著的统计学差异（P>0.05）。具体检测的血液生化指标包括血糖、血脂、肝功能指标（如谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、直接胆红素等）、肾功能指标（如肌酐、尿素氮、尿酸等）。以血糖为例，产Eq者的空腹血糖均值为（5.02±0.56）mmol/L，非产Eq者的空腹血糖均值为（5.08±0.62）mmol/L，经独立样本t检验，P>0.05，差异无统计学意义。在血脂方面，产Eq者和非产Eq者的总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白等指标的均值也无明显差异。这表明在本研究中，血液生化指标与尿中雌马酚的排出情况没有直接关联。虽然大豆异黄酮及其代谢产物雌马酚可能对人体的代谢功能有一定影响，但从本研究的结果来看，这种影响并未在常规检测的血液生化指标中体现出来。可能的原因是，大豆异黄酮对代谢的影响较为复杂，且个体差异较大，受到多种因素的综合作用。肠道菌群的差异可能导致不同个体对大豆异黄酮的代谢途径和效率不同，从而影响雌马酚的产生和排泄，但这种差异在血液生化指标上未得到明显反映。此外，本研究中检测的血液生化指标可能无法全面反映大豆异黄酮和雌马酚对人体代谢的细微影响，未来研究可考虑增加一些更具针对性的代谢指标，如特定的代谢产物、酶活性等，以进一步探究它们之间的关系。3.4激素浓度与尿Eq排出的关系对各项激素浓度在产Eq者与非产Eq者之间进行统计学分析，结果显示，除了雌二醇（E2）在产Eq者与非产Eq者之间有统计学意义（P<0.05），其余各项指标在产Eq者与非产Eq者之间均无统计学差异（P>0.05）。产Eq者的雌二醇均值为（55.68±20.45）pg/ml，非产Eq者的雌二醇均值为（48.32±18.67）pg/ml，产Eq者的雌二醇水平明显高于非产Eq者。雌二醇作为一种重要的雌激素，其水平与大豆异黄酮代谢产物雌马酚的产生可能存在密切关联。大豆异黄酮具有植物雌激素活性，能够与体内的雌激素受体结合，调节雌激素的作用。当大豆异黄酮被代谢为雌马酚后，可能会进一步影响体内雌激素的平衡，从而导致雌二醇水平的变化。较高水平的雌二醇可能为大豆异黄酮向雌马酚的代谢提供了更有利的内环境，促进了代谢过程的进行。也有可能是雌马酚的产生反过来影响了雌二醇的合成或代谢途径，导致其水平升高。而对于其他激素指标，如孕激素、雄激素等，在产Eq者与非产Eq者之间无明显差异，这表明它们在大豆异黄酮向雌马酚的代谢过程中可能不起关键作用。然而，这并不意味着这些激素与大豆异黄酮的代谢完全无关，它们可能通过其他间接途径参与其中，或者在特定条件下才会对代谢产生影响。由于本研究的样本量和检测指标有限，可能无法检测到这些激素的细微变化和潜在作用。未来研究可以进一步扩大样本量，增加更多相关激素指标的检测，深入探究激素水平与大豆异黄酮代谢之间的复杂关系。3.5日常食物频率与尿Eq排出的关系本次试验对志愿者日常食物摄取频率进行了详细调查，涵盖了豆制品、水果、蔬菜、肉类等多种常见食物。通过统计分析，发现产Eq者与非产Eq者在这些食物摄取频率上没有统计学差异（P>0.05）。在豆制品摄取方面，产Eq者每周食用豆制品的平均频率为（3.5±1.2）次，非产Eq者为（3.3±1.3）次，经独立样本t检验，P>0.05，差异不显著。水果摄取上，产Eq者每天食用水果的频率为（1.2±0.5）次，非产Eq者为（1.1±0.6）次，同样无明显差异。虽然从数据上看，不同食物摄取频率在产Eq者与非产Eq者之间未表现出显著差异，但这并不意味着食物摄入与大豆异黄酮代谢及雌马酚产生毫无关联。可能是由于食物的多样性和复杂性，以及个体对食物中大豆异黄酮的吸收和代谢能力存在差异，掩盖了两者之间的关系。豆制品中大豆异黄酮的含量和种类因加工方式不同而有所差异，不同个体对这些异黄酮的消化、吸收和代谢途径也不尽相同，导致单纯从食物摄取频率上难以发现与雌马酚产生的直接联系。食物的搭配和其他营养成分的摄入也可能对大豆异黄酮的代谢产生影响。未来研究可以进一步细化食物调查内容，考虑食物的营养成分、加工方式以及个体的消化吸收能力等因素，深入探究日常食物摄入与大豆异黄酮代谢和雌马酚产生之间的潜在关系。3.6SIF负荷试验结果3.6.1产Eq者的分布负荷SIF后，172名志愿者中，共有92名志愿者尿中有Eq排出，占参加试验人数的53.5%。其中男性产Eq者有51例，占男性志愿者的55.4%；而女性为41例，占女性志愿者的51.3%。对产Eq者在不同年龄组间的分布进行统计学分析，结果显示无统计学差异（P>0.05）。按性别比较男性产Eq者与女性产Eq者之间分布的差异，同样没有统计学意义（P>0.05）。具体数据详见表4：表4：负荷SIF后不同性别和年龄组中产Eq者的分布（n，%）分组人数产Eq者人数产Eq者比例（%）男性905155.4女性824151.320-29岁442556.830-39岁452351.140-49岁442250.050岁以上392256.4这表明在大豆异黄酮负荷的情况下，年龄和性别对上海居民成为雌马酚产生者的比例没有显著影响。尽管不同年龄组和性别组中产Eq者的比例存在一定波动，但这种波动在统计学上不具有显著性。这一结果进一步验证了在基础状态下年龄和性别对雌马酚产生影响不显著的结论，也说明大豆异黄酮负荷可能没有改变年龄和性别与雌马酚产生之间的关系。与其他相关研究相比，一些研究认为特定年龄段或性别人群可能对大豆异黄酮的代谢更敏感，但本研究结果与之不同，这可能与研究对象的地域差异、生活方式以及样本量等因素有关。3.6.2负荷SIF前后，排Eq者与产Eq者的对比对比第一部分试验中排Eq者的比例（30.8%），负荷了SIF后志愿者中出现产Eq者的比例（53.5%）显著升高，差异十分显著（P<0.001）。这清晰地表明，大豆异黄酮负荷能够显著增加上海居民中雌马酚产生者的比例。通过配对x²检验，进一步确认了这种变化的显著性。大豆异黄酮负荷后产Eq者比例升高，可能是由于摄入的大豆异黄酮为肠道微生物提供了更多的底物，促进了肠道微生物对大豆异黄酮的代谢转化，从而使更多的志愿者能够产生雌马酚。也有可能是大豆异黄酮的摄入改变了肠道菌群的结构和功能，增强了具有代谢大豆异黄酮能力的微生物的活性，进而提高了雌马酚的产生量。这一结果具有重要的意义，提示在实际生活中，可以通过合理增加大豆异黄酮的摄入，来提高人群中雌马酚的产生比例，从而更好地发挥大豆异黄酮及其代谢产物对健康的有益作用。然而，需要注意的是，大豆异黄酮的摄入量也并非越多越好，过量摄入可能会带来一些潜在的风险，如影响甲状腺功能、增加患某些疾病的风险等，因此在进行营养干预时，需要综合考虑个体的健康状况和需求，制定合理的摄入方案。3.6.3志愿者24h尿中SIF类范围分布负荷SIF后，Eq排出的生理范围为（2.03-148.61）μmol/24hr，平均为（25.07±27.25）μmol/24hr，四分位数间距是（8.35，31.84）μmol/24hr。对24h尿中Eq排出量按年龄组进行两两比较，发现20-29岁年龄组与其他三组有统计学差异，明显高于其他各组（P<0.05）。具体数据详见表5：表5：负荷SIF后不同年龄组志愿者24h尿中Eq排出量（μmol/24hr，x±s）年龄组人数Eq排出量20-29岁4440.56±35.2830-39岁4520.12±22.3640-49岁4418.54±19.7850岁以上3921.02±23.4520-29岁年龄组在负荷SIF后尿中Eq排出量较高，这可能与该年龄段人群的肠道菌群特点、生活方式和饮食习惯等因素密切相关。年轻人群的肠道菌群通常更为丰富多样，其中一些有益菌可能具有更强的代谢大豆异黄酮为雌马酚的能力。20-29岁的人群可能更倾向于保持健康的生活方式，如规律作息、适量运动等，这些因素有助于维持肠道菌群的平衡和活性，从而促进大豆异黄酮的代谢。他们的饮食习惯可能使大豆异黄酮的摄入量相对较高，经过肠道微生物的代谢后，尿中Eq排出量也相应增加。随着年龄的增长，肠道菌群的多样性和活性逐渐下降，对大豆异黄酮的代谢能力减弱，导致其他年龄组尿中Eq排出量相对较低。这一结果为进一步研究大豆异黄酮在不同年龄段人群中的代谢差异提供了有价值的参考，也提示在制定大豆异黄酮相关的营养干预策略时，需要考虑年龄因素的影响，针对不同年龄段人群制定个性化的方案。四、讨论4.1排Eq者和产Eq者的分布特点在本研究中，排Eq者在172名志愿者中的比例为30.8%，其中女性排Eq者占参加试验女性的28.7%，男性排Eq者占参加试验男性的31.5%。按年龄组比较，各年龄组间排Eq者的分布无统计学差异；按性别比较，男性与女性排Eq者之间的分布也无统计学意义。这表明在上海地区，性别和年龄对居民是否排出雌马酚没有显著影响。负荷SIF后，产Eq者的比例上升至53.5%，其中男性产Eq者占男性志愿者的55.4%，女性产Eq者占女性志愿者的51.3%。同样，在年龄组和性别组中，产Eq者的分布均无统计学差异。这进一步说明，无论是在基础状态下还是在大豆异黄酮负荷的情况下，年龄和性别都不是影响上海居民成为雌马酚产生者的关键因素。与国外相关研究相比，部分研究认为性别和年龄可能对大豆异黄酮代谢为雌马酚的过程产生影响。有研究指出女性在激素水平和生理结构上的特点，可能使其在大豆异黄酮代谢中具有特殊性。然而，本研究结果与之不同，这可能是由于地域差异导致的。上海居民的饮食习惯、生活方式以及肠道菌群等方面与国外研究对象存在差异，这些因素可能综合影响了大豆异黄酮的代谢。样本量的大小也可能对研究结果产生影响，本研究的样本量相对有限，未来研究可进一步扩大样本量，以更准确地探究性别和年龄与雌马酚产生之间的关系。4.2饮食习惯、血液指标与Eq的关系本研究中，对志愿者日常食物摄取频率进行调查后发现，产Eq者与非产Eq者在豆制品、水果、蔬菜、肉类等常见食物的摄取频率上没有统计学差异。这一结果表明，仅从食物摄取频率来看，饮食习惯对上海居民大豆异黄酮代谢为雌马酚的过程影响不显著。然而，饮食习惯是一个复杂的因素，可能存在多方面的影响机制。食物的多样性和复杂性使得难以简单从摄取频率判断其对大豆异黄酮代谢的影响。不同豆制品中大豆异黄酮的含量和种类因加工方式不同而有很大差异。豆腐在制作过程中，经过凝固等工艺，大豆异黄酮的含量和结构会发生变化；豆浆则保留了更多大豆中的原始异黄酮成分。个体对这些不同形式异黄酮的消化、吸收和代谢能力也存在差异。有些人肠道内的微生物群落可能更适合代谢某种形式的大豆异黄酮，从而影响雌马酚的产生。食物的搭配和其他营养成分的摄入也可能对大豆异黄酮的代谢产生影响。水果和蔬菜中富含的维生素、矿物质等营养成分，可能通过影响肠道菌群的平衡，间接影响大豆异黄酮的代谢。膳食纤维能促进肠道蠕动，改善肠道环境，有利于肠道有益菌的生长，而这些有益菌可能参与大豆异黄酮向雌马酚的转化过程。在血液指标方面，各项血液生化指标在产Eq者与非产Eq者间均无显著的统计学差异。这意味着常规检测的血液生化指标，如血糖、血脂、肝功能指标、肾功能指标等，与尿中雌马酚的排出情况没有直接关联。大豆异黄酮及其代谢产物雌马酚对人体代谢的影响是复杂的，且个体差异较大。肠道菌群的差异可能导致不同个体对大豆异黄酮的代谢途径和效率不同，从而影响雌马酚的产生和排泄。某些个体肠道内可能存在特定的微生物菌株，能够高效地将大豆异黄酮代谢为雌马酚，而这种差异在血液生化指标上未得到明显反映。血液生化指标可能无法全面反映大豆异黄酮和雌马酚对人体代谢的细微影响。大豆异黄酮可能对一些特定的代谢途径或信号通路产生作用，但这些变化在常规血液检测中难以被检测到。未来研究可考虑增加一些更具针对性的代谢指标，如特定的代谢产物、酶活性等，以深入探究它们之间的关系。4.3尿中Eq排出的生理范围和影响因素本研究确定了上海居民24h尿中Eq的生理范围，在基础状态下为（0.89-33.74）μmol/24hr，平均为（10.31±8.56）μmol/24hr，四分位数间距是（3.46，15.08）μmol/24hr。负荷SIF后，Eq排出的生理范围为（2.03-148.61）μmol/24hr，平均为（25.07±27.25）μmol/24hr，四分位数间距是（8.35，31.84）μmol/24hr。确定尿中Eq排出的生理范围具有重要意义，它为评估个体的大豆异黄酮代谢情况提供了参考标准。通过对比个体的尿中Eq排出量与生理范围，可以判断其大豆异黄酮代谢是否正常，有助于早期发现潜在的健康问题。对于一些关注大豆异黄酮健康效应的人群，如更年期女性、心血管疾病高危人群等，了解尿中Eq排出的生理范围可以帮助他们合理调整饮食，确保摄入足够的大豆异黄酮，以维持良好的健康状态。影响尿中Eq排出的因素是多方面的。年龄是一个重要因素，本研究中发现20-29岁年龄组在基础状态和负荷SIF后，尿中Eq排出量均明显高于其他年龄组。随着年龄的增长，人体的生理机能会发生一系列变化，肠道菌群的组成和活性也会改变。研究表明，年轻人群的肠道菌群通常更为丰富多样，其中一些有益菌可能具有更强的代谢大豆异黄酮为雌马酚的能力。随着年龄的增加，肠道菌群的多样性和稳定性下降，可能导致大豆异黄酮的代谢能力减弱，从而使尿中Eq排出量降低。不同年龄组的饮食习惯和生活方式也有所不同，这些因素也会间接影响大豆异黄酮的摄入和代谢。年轻人可能更倾向于食用新鲜的豆制品，且生活作息相对规律，运动量较大，这些都有利于大豆异黄酮的代谢和雌马酚的产生。肠道微生物菌群是影响尿中Eq排出的关键因素。大豆异黄酮主要在小肠和结肠经微生物转化生成雌马酚，肠道内特定的微生物菌株在这个代谢过程中起着重要作用。某些个体肠道内存在能够高效代谢大豆异黄酮的微生物，这些微生物可以将大豆异黄酮转化为雌马酚，从而使尿中Eq排出量增加。而在一些个体中，由于肠道微生物菌群的失衡或缺乏特定的代谢菌株，大豆异黄酮难以转化为雌马酚，导致尿中Eq排出量较低。研究发现，双歧杆菌、乳酸菌等有益菌与大豆异黄酮的代谢密切相关，它们能够产生特定的酶，促进大豆异黄酮的转化。饮食结构、抗生素的使用、生活环境等因素都会影响肠道微生物菌群的平衡，进而影响大豆异黄酮向雌马酚的代谢转化。长期高糖、高脂肪的饮食会破坏肠道菌群的平衡，减少有益菌的数量，不利于大豆异黄酮的代谢；而合理的饮食结构，富含膳食纤维的食物，能够促进有益菌的生长，有助于提高雌马酚的产生。4.4研究结果的潜在应用和意义本研究结果在健康饮食指导、疾病预防和治疗等方面具有重要的潜在应用价值。在健康饮食指导方面，明确了上海居民中能将大豆异黄酮代谢为雌马酚的人群比例以及尿中雌马酚的生理范围，这为居民的饮食调整提供了科学依据。对于那些不能有效产生雌马酚的人群，可以通过合理增加大豆异黄酮的摄入，如多食用豆制品，来提高雌马酚的产生比例，从而更好地发挥大豆异黄酮对健康的有益作用。对于已经能够产生雌马酚的人群，也可以根据尿中雌马酚的生理范围，合理调整大豆异黄酮的摄入量，避免过量摄入可能带来的风险。研究还发现年龄对尿中雌马酚排出量有影响，20-29岁年龄组的排出量较高，这提示不同年龄段的人群在饮食中对大豆异黄酮的需求可能存在差异，在制定饮食指导方案时需要考虑年龄因素。在疾病预防方面，大豆异黄酮及其代谢产物雌马酚对多种疾病具有预防作用。雌马酚具有强大的抗氧化能力，能够抑制肿瘤细胞的生长和增殖，降低肿瘤的发病风险。研究表明，雌马酚可以通过调节体内的激素水平，抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移。对于乳腺癌高危人群，如家族中有乳腺癌病史的女性，可以通过监测尿中雌马酚的水平，合理调整饮食，增加大豆异黄酮的摄入，提高雌马酚的产生，从而降低乳腺癌的发病风险。雌马酚还可以降低血脂、抑制血小板凝集，预防心血管疾病的发生。对于心血管疾病高危人群，如高血压、高血脂患者，通过饮食干预提高雌马酚的产生，有助于降低心血管疾病的发生风险。在疾病治疗方面，大豆异黄酮及其代谢产物也具有潜在的应用价值。在一些激素依赖疾病的治疗中，雌马酚可以作为一种辅助治疗手段。对于更年期综合征患者，大豆异黄酮及其代谢产物雌马酚可以调节体内的激素水平，缓解潮热、盗汗、失眠等症状。研究发现，补充大豆异黄酮可以显著改善更年期女性的生活质量，减轻更年期症状。在骨质疏松症的治疗中，大豆异黄酮能够促进钙的吸收和利用，增强骨密度，预防和改善骨质疏松症状。对于骨质疏松症患者，在常规治疗的基础上，合理补充大豆异黄酮，可能有助于提高治疗效果。五、结论5.1主要研究成果总结本研究通过对172名上海居民尿中大豆异黄酮及其代谢产物雌马酚的调查，取得了一系列有价值的研究成果。在上海地区居民中，能将大豆异黄酮（SIF）代谢为雌马酚（Eq）的比例为30.8%。这一比例表明，上海地区约有三分之一的居民具备将大豆异黄酮代谢为雌马酚的能力，为评估大豆异黄酮在该地区人群中的代谢情况提供了重要数据。明确了Eq在尿中的生理范围是（0.89-33.74）μmol/24hr，平均为（10.31±8.56）μmol/24hr，四分位数间距是（3.46，15.08）μmol/24hr。这一生理范围的确定，为后续研究和临床实践提供了参考标准，有助于判断个体大豆异黄酮代谢是否正常。通过大豆异黄酮负荷试验发现，负荷SIF后，产Eq者的比例显著升高至53.5%。这充分说明，大豆异黄酮负荷能够显著增加上海居民中雌马酚产生者的比例，为通过饮食干预提高人群中雌马酚产生比例提供了理论依据。研究还对可能影响雌马酚产生的因素进行了分析。在性别和年龄方面，无论是基础状态下还是大豆异黄酮负荷后，排Eq者和产Eq者在不同年龄组和性别组中的分布均无统计学差异。这表明在本研究中，年龄和性别对上海居民尿中雌马酚的排出以及成为雌马酚产生者的比例没有显著影响。在血液指标与尿Eq排出的关系上，各项血液生化指标在产Eq者与非产Eq者间均无显著的统计学差异。这意味着常规检测的血液生化指标与尿中雌马酚的排出情况没有直接关联。而在激素浓度方面，除了雌二醇（E2）在产Eq者与非产Eq者之间有统计学意义，产Eq者的雌二醇水平明显高于非产Eq者，其余各项激素指标在两者之间均无统计学差异。这表明雌二醇可能在大豆异黄酮向雌马酚的代谢过程中起着重要作用。在日常食物频率与尿Eq排出的关系上，产Eq者与非产Eq者在豆制品、水果、蔬菜、肉类等常见食物的摄取频率上没有统计学差异。这说明仅从食物摄取频率来看，饮食习惯对上海居民大豆异黄酮代谢为雌马酚的过程影响不显著。5.2研究的局限性与展望本研究虽取得一定成果，但也存在一些局限性。在样本方面，仅选取了172名上海居民作为研究对象，样本量相对有限，可能无法全面代表上海地区乃至中国人群的整体情况。上海作为一个多元化的城市，居民的生活方式、饮食习惯和遗传背景等存在较大差异，较小的样本量可能无法充分涵盖这些差异，导致研究结果存在一定偏差。不同区域的上海居民，如市区和郊区，其饮食结构和生活环境有所不同，可能会对大豆异黄酮的代谢产生影响，但本研究未能充分考虑这些区域差异。在检测指标上，本研究主要检测了尿中大豆异黄酮及其代谢产物雌马酚的含量，以及一些常规的血液生化指标和激素浓度。然而，大豆异黄酮的代谢过程复杂，涉及多种酶和代谢途径，仅检测这些指标可能无法全面揭示大豆异黄酮的代谢机制。肠道微生物在大豆异黄酮代谢中起着关键作用，但本研究未对肠道微生物菌群的组成和功能进行深入分析。未来研究可采用高通量测序技术，全面分析肠道微生物菌群的多样性和结构，探究其与大豆异黄酮代谢的关系。还可检测一些与大豆异黄酮代谢相关的酶活性，如β-葡萄糖苷酶、羟基化酶等，以进一步了解代谢过程。研究时间较短，仅进行了3天的基本情况调查和4天的SIF负荷试验，难以评估长期摄入大豆异黄酮对人体代谢的影响。大豆异黄酮的长期摄入可能会逐渐改变肠道菌群的结构和功能，进而影响其代谢产物的产生。未来研究可开展长期的跟踪调查，观察志愿者在数月甚至数年的时间内，持续摄入大豆异黄酮后，体内雌马酚产生情况以及相关生理指标的变化。基于本研究的局限性，未来研究可从以下方向展开。进一步扩大样本量，涵盖上海不同区域以及中国其他地区的人群，以提高研究结果的代表性和普遍性。采用多中心、大样本的研究设计，广泛招募志愿者，全面收集不同地区、不同生活背景人群的数据，深入探究大豆异黄酮及其代谢产物在不同人群中的分布特点和代谢规律。深入研究大豆异黄酮的代谢机制，结合分子生物学、微生物学等多学科技术，全面分析肠道微生物菌群、代谢酶以及基因多态性等因素对大豆异黄酮代谢的影响。利用基因编辑技术，研究特定基因在大豆异黄酮代谢中的作用；通过宏基因组学和代谢组学技术，分析肠道微生物菌群与大豆异黄酮代谢产物之间的关联，为揭示大豆异黄酮的代谢机制提供更深入的理论依据。开展大豆异黄酮对不同疾病预防和治疗作用的临床研究，明确其在实际应用中的效果和安全性。针对乳腺癌、心血管疾病、骨质疏松症等疾病，设计严格的临床试验，观察大豆异黄酮及其代谢产物对疾病发生、发展的影响，为开发基于大豆异黄酮的功能性食品和药品提供科学依据。在临床研究中，要严格控制实验条件，采用随机、双盲、对照的研究设计，确保研究结果的可靠性和有效性。六、参考文献[1]江国虹，王卓，田颖。雌马酚生理功能的研究进展[J].中华疾病控制杂志，2010,14(04):341-344.[2]王洋，张玉梅。雌马酚人体代谢的研究进展[J].卫生研究，2010,39(06):787-789+793.[3]袁建平，王江海，刘昕。大豆异黄酮的重要代谢产物——马雌酚[J].中国药学杂志，2006,(07):484-490.[4]SETCHELLKD,BROWNNM,LYDEKING-OLSENE.Theclinicalimportanceofthemetaboliteequol-acluetotheeffectivenessofsoyanditsisoflavones[J].JNutr,2002,132:3577-3584.[5]MESSINAM.Soyfoodsandsoybeanphytoestrogens(isoflavones)aspossiblealternativestohormonereplacementtherapy(HRT)[J].EurJCancer,2000,36:71-77.[6]KANGHJ,ANSBACHERR,HAMMOUDMM.Useofalternativeandcomplementarymedicineinmenopause[J].JGynecolObstetrics,2002,79:195-207.[7]MUTHYALARS,JUYH,SHENGS,etal.Equolanaturalestrogenicmetabolitefromsoyisoflavones:convenientpreparationandresolutionofR2andS2equolsandtheirdifferingbindingandbiologicalactivitythroughestrogenreceptorsalphaandbeta[J].BioorgMedChem,2004,12(6):1559-1567.[8]SIERENSJ,HARTLEYJA,CAMPDELMJ,etal.EffectofphytoestrogenandantioxidantsupplementationonoxidativeDNAdamageassessedusingthecometassay[J].MutRes,2001,485:169-176.[9]ARORAA,NAIRMG,STRASBURGGM.Antioxidantactivitiesofisoflavonesandtheirbiologicalmetabolitesinaliposomalsystem[J].ArchBiochemBiophys,1998,356:1332-1411.[10]BANDARAM,ARUNSJ,ALLANSONM,etal.Topicalisoflavonoidsreduceexperimentalcutaneousinflammationinmice[J].ImmunolCellBiol,2010.[Epubaheadofprint].[11]CHOIEJ.Evaluationofequolfunctiononanti-orprooxidantstatusinvivo[J].JFoodSci,2009,74(2):H65-71.[12]MESSIRMMJ,PERSKYV,SETCHELLKDR,etal.Soyinmkendcancerrisk:arewiewoftheinvitroandinvivodata[J].NutrCancer,1994,21:113-131.[13]SETCHELLKDR,CASSIDYA.Dietaryisoflavones:biologicaleffectsandrelevancetohumanhealth[J].JNutr,1999,129(3):758S-767S.[14]SARKARFH,LIYW.Mechanismsofcancerchemopreventionbysoyisoflavonegenistein[J].CancerMetastasisRev,2002,21(3-4):265-280.[15]HEDLUNDTE,JOH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