CN119020256B 一种植物外泌体样纳米囊泡及其制备方法和应用 （陕西中科通大生命科学技术有限公司）

西路755号国家大学科技园科创孵化WO2023139480A1,2023.07一种植物外泌体样纳米囊泡及其制备方法本发明涉及一种植物外泌体样纳米囊泡及离心法，成功制备出刺梨/沙蒿籽/桑叶/绞股蓝为开发肠道黏膜屏障功能恢复产品提供了重要21.一种植物外泌体样纳米囊泡在制备改善急性结肠炎的药品中的应用，其特征在于，所述植物外泌体样纳米囊泡的制备方法包括将所述上清液进行第二离心分离，后将所得沉淀物进行洗涤，得以重量份数计，所述酶的加入量占所述植物源和缓冲液两者总重量的1～3wt所述于4℃温度下将所述植物源汁液依次在离心力为1200g条件下进行离心20min、离心力6.根据权利要求1～5任一项所述的应用，其特3mRNA)的运输中发挥重要作用。因其固有的生物相容性、跨越生理屏障的能力和低免疫原4[0006]为解决上述问题，本发明提供了一种植物外泌体样纳米囊泡及其制备方法和应~3wt所述酶包括纤维素酶。[0017]于4℃温度下将所述植物源汁液依次在离心力为1200g条件下进行离心20min、离5[0026]图1为本发明实施例提供的一种植物外泌体样纳米囊泡的制备方法的流程示意[0027]图2为本发明测试例中实施例3所得样品于4℃温度下植物外泌体样纳米囊泡的储[0029]图4为本发明测试例中实施例3所得样品于FRAP法下植物外泌体样纳米囊泡的抗[0030]图5为本发明测试例中实施例3所得样品于DPPH法下植物外泌体样纳米囊泡的抗[0031]图6为本发明测试例中实施例3所得样品于胃液和肠液环境中消化稳定性测试结[0032]图7为本发明测试例中实施例3所得样品于急性结肠炎小鼠实验中结肠长度及外[0033]图8为本发明测试例中实施例3所得样品于急性结肠炎小鼠实验中结肠组织切片[0034]图9为本发明测试例中实施例3所得样品于急性结肠炎小鼠实验中血清中炎症因[0035]图10为本发明测试例中实施例3所得样品于急性结肠炎小鼠实验中血清中肠道紧[0041](1)操作复杂与成本高昂：现有的提取方法，如超速离心结合蔗糖密度梯度离心6[0044](4)递送效率不稳定：植物外泌体样纳米囊泡在体内的递送效率受多种因素的影[0052]本发明使用酶解超速方法制备出刺梨/沙蒿籽/桑叶/绞股蓝ELNs，不仅操作流程制备的刺梨与桑叶外泌体样纳米囊泡具有良好的储存稳定性、抗氧化活性及消化稳定性，7[0059]于4℃温度下将所述植物源汁液依次在离心力为1200g条件下进行离心20min、离[0060]在一些具体实施例中，所述第二离心分离的工作条件参数包括：离心力为[0066]步骤4、将步骤3得到的植源性外泌体样纳米囊泡进行真空冷冻干燥即可得到刺[0067]其中，所述离心的温度为4℃,步骤2重复离心次数为3次，第一次离心条件为件下对大颗粒、细小碎片和部分杂质去除效果最好；步骤3超速离心条件为100000g、植物外泌体样纳米囊泡是采用第一方面任一项所述的制备体样纳米囊泡在制备改善肠粘膜屏障损伤修复产[0072](1)本发明采用酶解法结合超速离心法，成功制备出刺梨/沙蒿籽/桑叶/绞股蓝8[0077]本例提供一种植物外泌体样纳米囊泡及其制备方法，所述制备方法包括以下步[0078](1)将干净的植物源刺梨与pH为6.0PBS缓冲液按照重量比为2:1放入破碎机破碎[0079](2)于4℃温度下将步骤1得到的植物源汁液重复数次低速离心，取上清液再次离[0080](3)于4℃温度下将步骤2重复3次离心后得到的上清液以100000g超速离心[0082]在上述实施例1以刺梨为植物源制备得到刺梨外泌体样纳米囊泡基础上，分别以[0084]本例提供一种植物外泌体样纳米囊泡及其制备方法，所述制备方法包括以下步[0085](1)将干净的植物源刺梨与pH为6.0PBS缓冲液按照重量比为[0086](2)于4℃温度下将步骤1得到的植物源汁液重复数次低速离心，取上清液再次离[0087](3)于4℃温度下将步骤2重复3次离心后得到的上清液以100000g超速离心9[0089]在上述实施例2以刺梨为植物源制备得到刺梨外泌体样纳米囊泡冻干粉基础上，[0091]本例提供一种植物外泌体样纳米囊泡及其制备方法，所述制备方法包括以下步[0092](1)将干净的植物源刺梨与pH为6.0PBS缓冲液按照重量比为[0093](2)于4℃温度下将步骤1得到的植物源汁液重复数次低速离心，取上清液再次离[0094](3)于4℃温度下将步骤2重复3次离心后得到的上清液以100000g超速离心[0096]在上述实施例3以刺梨为植物源制备得到刺梨外泌体样纳米囊泡冻干粉基础上，[0098]本例提供一种植物外泌体样纳米囊泡及其制备方法，所述制备方法包括以下步[0099](1)将干净的植物源刺梨与pH为6.0PBS缓冲液按照重量比为[0100](2)于4℃温度下将步骤1得到的植物源汁液重复数次低速离心，取上清液再次离[0101](3)于4℃温度下将步骤2重复3次离心后得到的上清液以100000g超速离心[0103]在上述实施例4以刺梨为植物源制备得到刺梨外泌体样纳米囊泡冻干粉基础上，司)测定上述实施例所得到的刺梨外泌体样纳米囊泡蛋白浓度。上述实施例中外泌体样纳5.125.537.167.53[0112]将上述实施例3中所得的四种植物外泌体样纳米囊泡适量取分装于试管中，将其分别置于4℃和_20℃的条件下储存12d，并定期(0、4、8、12d)使用[0117]选用FRAP(铁离子还原能力)法和DPPH(1,1_二苯基_2_三硝基苯肼)法评价四种不的体外模拟消化实验，可以清晰地观察到刺梨/沙蒿籽/桑叶/绞股蓝ELNs在经历胃和肠道正常小鼠组结肠明显缩短，经过刺梨/沙蒿籽/桑叶/绞股蓝ELNs处理后小鼠结肠缩短的情[0132]Cy5.5标记外泌体样纳米囊泡：在2mg/m[0137]以上所述仅是本发明的具体实施方