CAR-T 细胞制备工程师考试试卷及答案

CAR-T细胞制备工程师考试试卷及答案CAR-T细胞制备工程师考试试卷及答案一、填空题（共10题，每题1分）1.CAR的结构通常包括抗原结合域、铰链区、______和胞内信号域。2.CAR-T细胞制备中常用的转导载体类型是______和逆转录病毒。3.激活T细胞常用的抗体组合是______和CD28抗体。4.细胞培养过程中添加的关键细胞因子是______。5.细胞冻存保护剂的主要成分是______。6.无菌检测中的内毒素检测常用______试剂法。7.CAR-T产品的活细胞率一般要求不低于______%。8.分离外周血单个核细胞常用的方法是______离心法。9.CAR-T终产品的储存温度是______℃（液氮中）。10.质量控制中检测CAR阳性率常用的方法是______。二、单项选择题（共10题，每题2分）1.CAR的胞内信号域通常不包括以下哪种分子？（）A.CD3ζB.4-1BBC.CD28D.IL-42.慢病毒转导CAR基因时，最佳MOI范围一般是？（）A.1-2B.5-10C.20-30D.50-1003.激活T细胞的培养板需要包被以下哪种试剂？（）A.IL-2B.胎牛血清C.CD3/CD28抗体D.DMSO4.细胞冻存时的梯度降温步骤不包括以下哪一步？（）A.4℃30minB.-20℃1hC.-80℃过夜D.室温放置5.CAR-T细胞培养的气体环境是？（）A.95%空气+5%CO₂B.100%CO₂C.90%空气+10%CO₂D.5%空气+95%CO₂6.支原体检测的常用方法是？（）A.革兰染色B.PCRC.鲎试剂法D.细胞计数7.IL-2在CAR-T培养中的主要作用是？（）A.抑制T细胞增殖B.促进T细胞增殖C.诱导细胞凋亡D.增强细胞毒性8.分选CD3+T细胞常用的方法是？（）A.密度梯度离心B.磁珠分选C.流式分选D.过滤法9.终产品运输时应使用哪种容器？（）A.室温纸箱B.4℃冰箱C.干冰保温箱D.液氮罐10.CAR-T产品放行标准中，内毒素含量应低于？（）A.0.5EU/mLB.5EU/mLC.10EU/mLD.20EU/mL三、多项选择题（共10题，每题2分）1.CAR的结构组成包括以下哪些部分？（）A.抗原结合域B.铰链区C.跨膜区D.胞内信号域2.常用的CAR基因转导载体有？（）A.慢病毒B.逆转录病毒C.腺病毒D.质粒3.细胞培养常用的试剂包括？（）A.胎牛血清B.IL-2C.青霉素链霉素D.生理盐水4.CAR-T产品质量控制的项目有？（）A.活细胞率B.CAR阳性率C.内毒素D.支原体5.细胞冻存的注意事项包括？（）A.缓慢降温B.DMSO浓度5-10%C.液氮储存D.室温解冻6.激活T细胞的方法有？（）A.CD3/CD28抗体B.磁珠C.IL-2D.冷冻复苏7.CAR-T制备的关键步骤包括？（）A.细胞分离B.激活C.转导D.扩增8.影响转导效率的因素有？（）A.MOI值B.细胞状态C.载体滴度D.培养温度9.无菌操作的要求有？（）A.超净台操作B.戴无菌手套C.使用无菌耗材D.开放环境操作10.终产品的运输条件包括？（）A.干冰B.液氮罐C.室温D.4℃冷藏四、判断题（共10题，每题2分）1.CAR-T细胞治疗通常使用自体T细胞。（）2.慢病毒转导会将CAR基因整合到宿主细胞基因组中。（）3.IL-2过量添加会促进T细胞增殖。（）4.支原体检测可以用革兰染色法。（）5.冻存时DMSO浓度越高越好。（）6.CAR阳性率是CAR-T产品质量控制的关键指标。（）7.未激活的T细胞也能高效转导CAR基因。（）8.CAR-T产品可以在室温下长期保存。（）9.磁珠分选可以富集CD3+T细胞。（）10.内毒素检测常用鲎试剂法。（）五、简答题（共4题，每题5分）1.简述CAR-T细胞制备的基本流程。2.简述CAR-T产品质量控制的主要项目。3.简述慢病毒转导CAR基因的关键注意事项。4.简述CAR-T细胞冻存的操作要点。六、讨论题（共2题，每题5分）1.讨论影响CAR-T细胞转导效率的因素及优化策略。2.讨论CAR-T制备过程中的无菌操作要点及污染处理措施。答案：一、填空题1.跨膜区2.慢病毒3.CD34.IL-25.DMSO6.鲎7.708.密度梯度9.-19610.流式细胞术二、单项选择题1.D2.B3.C4.D5.A6.B7.B8.B9.D10.A三、多项选择题1.ABCD2.ABC3.ABC4.ABCD5.ABC6.ABC7.ABCD8.ABCD9.ABC10.AB四、判断题1.√2.√3.×4.×5.×6.√7.×8.×9.√10.√五、简答题1.基本流程：①分离外周血单个核细胞（PBMC）；②磁珠分选CD3+T细胞；③用CD3/CD28抗体激活T细胞；④慢病毒转导CAR基因；⑤添加IL-2培养扩增；⑥纯化去除磁珠；⑦细胞计数、活细胞率及CAR阳性率检测；⑧冻存细胞。各步骤需严格无菌操作，确保细胞活性和质量。2.主要项目：①活细胞率（≥70%）；②CAR阳性率（≥40%）；③无菌检测（内毒素＜0.5EU/mL，支原体阴性）；④残留载体检测；⑤残留磁珠检测；⑥细胞因子水平检测。这些项目保障产品的安全性和有效性。3.关键注意事项：①选择合适MOI（5-10），过高易损伤细胞；②转导时机为激活后24-48h；③使用Polybrene促进病毒吸附；④转导后6-12h换液；⑤保持37℃、5%CO₂环境。需预实验优化条件，确保转导效率。4.操作要点：①细胞悬液含5-10%DMSO和血清；②梯度降温：4℃30min→-20℃1h→-80℃过夜→液氮；③冻存管标记患者信息、日期；④复苏时37℃快速解冻，避免DMSO损伤细胞。冻存过程需严格控制温度，确保细胞活性。六、讨论题1.影响因素：①载体滴度（滴度低转导效率差）；②MOI值（过高细胞毒性，过低效率低）；③细胞激活状态（激活后增殖活跃转导好）；④培养条件（温度、CO₂）；⑤转导试剂（如Polybrene）。优化策略：预实验确定最佳MOI；确保细胞激活状态良好；使用合适转导试剂；稳