NYT 4683-2025 饲料中黄霉素A的测定 液相色谱-串联质谱法标准立项发展报告

饲料中黄霉素A的测定液相色谱-串联质谱法标准立项发展报告StandardizationDevelopmentReport:DeterminationofFlavomycinAinFeedsbyLiquidChromatography-TandemMassSpectrometry摘要饲料安全是保障动物性食品安全的重要基础，而抗生素类饲料添加剂的有效监控是饲料质量安全监管的关键环节。黄霉素A作为黄霉素的主要有效组分，广泛应用于畜禽养殖中，具有促进生长、提高饲料利用率等作用，但不当使用可能导致药物残留及细菌耐药性等一系列风险。当前我国尚未出台专门针对饲料中黄霉素A测定的国家标准或行业标准，现行动物源性食品中黄霉素A的检测方法在适用基质、前处理及灵敏度等方面难以满足饲料样品的检测需求。为解决上述标准空白，本报告围绕NY/T4683-2025《饲料中黄霉素A的测定液相色谱-串联质谱法》的立项背景、技术路线、研究内容与应用前景进行了系统阐述。该标准采用液相色谱-串联质谱法，通过优化前处理条件、色谱分离及质谱参数，实现了饲料中黄霉素A的精准定性和定量检测，方法的灵敏度、准确度和精密度均可满足饲料日常监管和风险监测的技术需求。该标准的制定与实施，对于完善饲料质量安全标准体系、提升检测能力和推动养殖业健康绿色发展具有重要意义。关键词：黄霉素A；液相色谱-串联质谱法；饲料检测；标准制定；质量安全Keywords:FlavomycinA;liquidchromatography-tandemmassspectrometry;feedanalysis;standardization;qualitysafety1引言饲料工业是现代养殖业发展的重要支撑和基础产业。近年来，我国饲料行业快速发展，饲料产量持续保持全球首位，饲料产品质量安全水平稳步提升。然而．随着养殖模式集约化程度的提高和饲料原料来源的多元化，饲料中药物添加剂的监控面临新的挑战。抗生素类促生长剂曾是饲料工业中广泛使用的一类添加剂，在提高生产效率、降低养殖成本方面发挥了重要作用。黄霉素（Flavomycin）作为一种磷酸糖脂类抗生素，因其促生长效果显著、使用安全窗口较宽、与其它常用药物不存在交叉耐药性等特点，在生产中应用较为普遍。黄霉素的化学组成较为复杂，主要有效成分为黄霉素A（FlavomycinA），其含量是评价产品品质和控制产品质量的关键指标。对饲料中黄霉素A含量进行准确、灵敏、可靠的测定，不仅关系到饲料企业和养殖从业者的切身利益，也是各级饲料质量检测机构和行业管理部门实施有效监管的技术基础。然而，现有的检测标准中，针对饲料基质的黄霉素A测定方法尚属空白，相关检测工作多参照或借用其他方法，存在适用性差、灵敏度和特异度不足等问题，难以满足日益严格的监管要求。为响应行业发展的迫切需求，根据农业农村部年度农业行业标准制定和修订项目安排，项目组经过充分调研和技术攻关，完成了《饲料中黄霉素A的测定液相色谱-串联质谱法》农业行业标准的制定工作。该标准于2025年1月9日由农业农村部正式发布，标准编号为NY/T4683-2025，将于2025年5月1日起实施。本报告从标准立项背景、研究内容、技术指标、标准内容及实施意义等方面，对该标准的制定过程和主要内容进行详细阐述，以期为该标准的宣贯、实施及后续相关标准的研制提供参考。2标准立项背景2.1饲料质量安全监管的政策要求饲料质量安全直接关系到养殖业健康发展和人民群众餐桌安全。近年来，国家高度重视饲料质量安全监管工作，陆续出台了一系列法律法规和政策文件。《饲料和饲料添加剂管理条例》（国务院令第609号）明确规定，饲料添加剂的使用应当遵守国务院农业行政主管部门制定的安全使用规范，不得使用未取得产品批准文号的饲料添加剂品种。2019年，农业农村部发布第194号公告，明确自2020年1月1日起，退出除中药外的所有促生长类药物饲料添加剂品种。在此基础上，黄霉素等曾在促生长方面发挥重要作用的抗生素类添加剂逐步被管控和限制使用，其残留监控和质量监管的要求相应提高。2022年修订实施的《农产品质量安全法》进一步强化了从源头保障农产品质量安全的法律责任，明确要求建立农产品质量安全风险监测和评估制度。《“十四五”全国农产品质量安全提升规划》中也明确提出，要进一步提升农产品质量安全检测能力和标准供给水平，强化饲料等农业投入品的质量监管。这些法律法规和政策文件，为饲料中抗生素类物质检测标准的制定提供了明确的制度依据和需求方向。2.2饲料中药物添加剂检测技术现状目前，国内外关于饲料中添加剂和污染物的检测技术研究已取得长足进展。液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）以其高灵敏度、高选择性和高通量的技术优势，已成为兽药残留和饲料添加剂检测领域的主流方法。在动物源性食品中黄霉素的检测方面，已有部分文献报道采用LC-MS/MS方法实现了肌肉、肝脏、肾脏、牛奶等基质中黄霉素A的定量检测，检测限可达µg/kg级别。欧盟、美国等发达国家和地区也针对动物源性食品中的黄霉素残留制定了相应的最大残留限量（MRL）和官方检测方法。然而，饲料作为一种组成复杂、基体干扰显著的样品基质，含有大量的蛋白质、脂肪、矿物质、维生素及多种植物源性成分，与动物源性食品基质在物理化学性质上存在显著差异。适用于动物组织或乳品的前处理方法和色谱条件往往难以直接套用于饲料基质的检测。目前国内尚无专门针对饲料基质中黄霉素A测定的行业标准或国家标准，饲料检测实验室在实际工作中，或参考兽药残留检测的相关标准方法，或借鉴文献报道的研究成果，方法的统一性、规范性和可靠性存在较大不足。2.3黄霉素A检测标准化需求的迫切性从实际监管需求来看，各级饲料质量检测机构在对饲料产品实施监督抽查和风险监测时，对黄霉素A的检测需求逐年增加。由于缺乏统一的标准方法，不同实验室之间检测结果的可比性较差，影响监管执法的权威性和公正性。从饲料企业的角度来看，产品质量控制也需要可靠、标准的检测方法作为质量保证的技术手段。从国际贸易的视角来看，饲料及饲料添加剂的国际贸易日益频繁，检测标准的不一致容易形成潜在的技术性贸易壁垒。因此，制定一部适用于饲料基质、技术先进、操作规范、适用性强的黄霉素A测定标准，对于填补标准空白、统一检测技术要求、提升监管效能、促进饲料行业健康发展具有重要的现实意义。3标准制定过程与技术内容3.1标准制定原则本标准的制定遵循以下原则：一是科学性原则，充分吸收国内外相关领域的最新研究成果和技术进展，确保方法的技术路线科学合理；二是适用性原则，以饲料样品为核心目标基质，兼顾不同饲料类型的差异性，确保方法在饲料检测中的实际可操作性；三是规范性原则，严格遵循GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的要求，确保标准文本的规范性和严谨性；四是协调性原则，注重与现行有效的相关标准之间的协调与衔接，避免矛盾和冲突。3.2技术路线与方法概述本标准采用液相色谱-串联质谱法测定饲料中黄霉素A的含量。黄霉素A分子结构中含有多个磷酸基团，极性较强，在常规反相色谱柱上保留较弱。针对这一特性，项目组在方法开发过程中重点围绕以下技术环节进行了系统优化：（1）样品前处理。饲料样品种类繁多，包括配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料以及饲料添加剂等，基体差异显著。标准方法采用了溶剂提取与固相萃取净化相结合的前处理策略。通过比较不同提取溶剂（如甲醇-水体系、乙腈-水体系、含甲酸的酸性提取液等）的提取效率，优选出对黄霉素A具有较高提取回收率的溶剂体系。在净化环节，比较了HLB、MCX、MAX等多种固相萃取小柱的净化效果，确定了最佳的净化方案，有效去除了饲料基体中的脂类、蛋白质和色素等干扰物质。（2）色谱分离条件。针对黄霉素A的强极性特征，比较了不同品牌和型号的色谱柱（如C18柱、HILIC柱、混合模式色谱柱等）的分离效果，结合流动相组成、pH值、流速和柱温等条件的系统优化，确定了最佳的色谱分离条件。采用含甲酸或甲酸铵的缓冲体系作为水相，有效改善了黄霉素A的色谱峰形和保留行为，实现了目标物的良好分离。（3）质谱检测参数。采用电喷雾离子源（ESI），在正离子或负离子模式下对黄霉素A进行多反应监测（MRM）检测。通过优化离子源温度、雾化气压力、干燥气流速、毛细管电压等质谱参数，并系统筛选了黄霉素A的母离子、子离子及相应的碰撞能量，确定了灵敏度和特异性最佳的多反应监测参数对。根据黄霉素A的分子结构特征，最终选择负离子监测模式，定量离子对和定性离子对均获得了良好的响应。3.3标准主要技术内容NY/T4683-2025标准文本主要包括以下技术内容：-范围：规定了饲料中黄霉素A测定的液相色谱-串联质谱法的原理、试剂与材料、仪器与设备、试样制备、测定步骤、结果计算与表述、精密度等内容，适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料及饲料添加剂中黄霉素A的测定。-规范性引用文件：列出了标准中所引用的其他标准文件，包括GB/T6682《分析实验室用水规格和试验方法》、GB/T20195《动物饲料试样的制备》等。-原理：试样中的黄霉素A经提取液提取、固相萃取柱净化后，用液相色谱-串联质谱仪测定，采用外标法定量。-试剂与材料：明确了实验所需的各种化学试剂（色谱纯或分析纯）、标准品及其纯度要求、标准溶液的配制方法等。-仪器与设备：规定了液相色谱-串联质谱仪（配备电喷雾离子源）、分析天平（感量0.01mg和0.01g）、离心机（转速不低于4000r/min）、涡旋振荡器、氮吹仪、固相萃取装置等仪器设备的技术要求。-试样制备与保存：按照GB/T20195的规定进行试样的采集和制备，明确了样品的保存条件和期限。-测定步骤：详细规定了试样的提取、净化、标准工作溶液的制备、仪器测定、空白试验等具体操作步骤。-结果计算与表述：给出了黄霉素A含量（以质量分数计）的计算公式及各符号的含义。-精密度：明确了重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%等精密度要求。4标准实施的意义与预期效果4.1填补标准空白，完善饲料质量标准体系NY/T4683-2025的发布实施，填补了我国饲料中黄霉素A检测方法标准的空白。在饲料质量安全检测标准体系中，抗生素类药物的检测标准多集中在四环素类、磺胺类、喹诺酮类等常用品种，而磷酸糖脂类抗生素黄霉素的检测方法长期缺乏统一规范。该标准将黄霉素A纳入标准化检测覆盖范畴，进一步完善了饲料中药物添加剂检测的标准体系，为保障饲料质量安全提供了新的技术支撑。4.2提升检测能力，保障监管执法效能标准的发布实施为各级饲料质量检验机构、科研院所和相关企业提供了统一的检测技术依据。通过采用规范、统一的检测方法，可以有效提高检测结果的准确性、可靠性和可比性，为饲料质量安全监督抽查、风险监测和行政执法提供了更加有力的技术支持。同时，标准方法的推广应用也有助于提升基层检测机构的检测能力和技术水平。4.3强化源头管控，推动养殖业健康发展黄霉素A作为饲料中可能添加的抗生素类物质，其含量的准确测定对于规范饲料生产经营行为、防止抗生素滥用和误用具有重要的推动作用。标准的实施将促进饲料生产企业加强原料和产品质量控制，从源头上保障养殖投入品的质量安全，推动养殖业向绿色、健康、可持续方向发展。这与国家兽用抗菌药使用减量化行动、饲料端“禁抗限抗”等政策导向高度契合。4.4促进贸易便利化，减少技术壁垒在国际贸易中，检测方法的一致性和互认性对于减少技术壁垒具有重要作用。该标准在方法学设计上充分参考了国际先进经验和相关国际标准的要求，有利于推动我国饲料检测方法与国际接轨，促进检测结果的国际互认，为我国饲料产品和饲料添加剂的国际贸易提供更加有利的技术条件。5主要起草单位简介本标准的主要起草单位为中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所（以下简称“质标所”）。该研究所是农业农村部直属的农产品质量安全领域国家级科研机构，是国家饲料质量检验检测中心的技术依托单位，长期从事农产品和农业投入品质量安全检测技术研究、标准制修订和风险评估等工作。质标所设有农业农村部农产品质量标准研究中心、农业农村部饲料效价与安全评价重点实验室等科研平台，拥有一支以博士和高级职称为主体、学科结构合理的研究团队，在饲料质量安全检测技术研究领域积累了深厚的基础。研究所在兽药残留检测、饲料添加剂分析、生物毒素检测、元素分析等方面取得了一系列重要科研成果，主持或参与制修订了多项国家标准和农业行业标准。尤其在液相色谱-串联质谱、气相色谱-串联质谱等现代分析技术的应用研究方面处于国内领先水平，为多部饲料检测标准和技术规范的制定提供了重要的技术支持和人才保障。6结论与展望NY/T4683-2025《饲料中黄霉素A的测定液相色谱-串联质谱法》是在饲料质量安全监管需求日益增强、检测技术不断进步的背景下制定的重要农业行业标准。该标准基于液相色谱-串联质谱技术，建立了适用于饲料基质中黄霉素A定量检测的标准化方法，技术指标先进、操作规范可行，填补了该领域的方法标准空缺。标准的发布和实施，将为饲料质量安全监管提供有力的技术保障，为企业产品质量