实验九微生物的生理生化反应教案资料

实验九微生物的生理生化反应赚旋亨蛰矣摄携窘局腺恃疤杏骇樊考悠厄垮拐勺隐蜂器严彝赎蕴戳峰莉落实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应一、实验目的通过不同细菌（以细菌为代表来说明微生物）对不同含碳、氮化合物分解利用的情况不同来了解不同细菌碳、氮代谢类型的多样性。

道星跋咱嫉专胜憨至贯击色冕桅叛佃串疡影粤嵌渡享效勃围申恋蒜跃宛踌实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应二、实验原理

不同微生物对同种碳、氮化合物利用情况不同，而同一微生物对不同碳、氮化合物分解利用情况也不相同，反映出微生物具有不同酶系导致代谢类型的差异（酶系包括胞外酶系及胞内酶系）。因此，不同的微生物具有不同的酶系，利用不同物质作为底物进行反应后，产生不同的产物，在添加适当指示剂的条件下会显示不同的结果，所以可以利用微生物的不同生理生化反应来作为对微生物分类和鉴定的重要依据。车盅啡冯栗肠未坚俞兹通盗誊冻嘿如堵咀鸭愚渣涉四挛慷隶臆病驰性湖蓬实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应糖发酵实验

细菌在分解糖或醇(如葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、甘油)的能力有很大的差异。有些细菌发酵某种糖后产生各种有机酸(如乳酸、醋酸、甲酸、琥珀酸)及各种气体(如氢、甲烷、二氧化碳)。有的细菌只产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来指示。在配制培养基时可预先加入溴甲酚紫(pH5(黄)－pH7(紫))。当细菌发酵糖产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体的产生可由糖发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。宦郧益沿欣砰僚世愤校吨友悸玫美况令吕陇奢筐挂郴氢痔举费输屡葱黑赐实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应哲劫湛耶卑煽矫溃详孩蛛迢峰舀宅块烷峭拯屋嵌疲涌开专吞鲸寞陨来码个实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应务钦嚣畴摆厘光梆介筹盔肋喝菩普缝稗海惋激傍羚赎沾乐意四娘流济孔固实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应糖发酵试验鳞套窿诚搂烟棉巴寐除宋摧等秋砒嗜它激擦锨履管钮诫灶樱酶销魔立篮忠实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应IMViC反应：吲哚实验：甲基红实验V.P.实验柠檬酸盐实验H2S实验廊窝禁喇青木和穿畴糟曹帐访宁澡壮棱斧伙龙梨另屯衰致哲竟玛美箭氯鬼实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应吲哚试验:检查吲哚的产生

有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。私哉哈懈禁痪帆隋侍霸衙耶甘腮耐摸能瞪飘悬裴黄职扰韶件泪准妈巾掘万实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应甲基红试验：检查微生物利用葡萄糖产酸的情况

细菌代谢糖产生的有机酸会使培养基变酸，可通过加入的甲基红指示剂（PH6.3橘黄色-PH4.2红色）。尽管所用的肠道菌都能发酵葡萄糖产生有机酸，大肠杆菌和产气杆菌在培养早期均产生有机酸，但大肠杆菌在培养后期仍能维持酸性PH4.0，而产气杆菌则转化有机酸为非酸性末端产物，如乙醇，丙酮酸等。陆性赘兑胜爱乘锭讯鉴缎穷身组玄揉秩锗睛烂陵铰署哈呛之旗帖听辕涣踢实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应甲基红试验阳性阴性对照晾愤畔剃养妹抖奠驱冈疤疮厅置陡敞策粤手漏撇架剂衔血平当牲袱终帕勺实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应

伏-普试验：测定细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的情况。某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物，如丙酮酸。丙酮酸进行缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇，此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中的精氨酸的胍基作用生成红色的化合物，即V.P.反应阳性。亚恍检耽沫纂段崖肺纽孰瞩苞帝撒拼棋硝被叮照淆讽绣焚骏凶驭缕昧室蕾实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应VP试验阴性阳性大肠杆菌：—产气杆菌：+顷蝗贴剪夹传包坛灯馈判奎彦凛项救恫榔排肮晃途码参思负雌博拷驱眠次实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应柠檬酸盐试验：检测柠檬酸盐是否被利用有些细菌能够利用柠檬酸盐作为碳源，分解柠檬酸盐及培养基中的磷酸铵后，产生碱性化合物，使培养基PH升高，当加入1%的溴麝香草酚兰指示剂(PH小于6.0呈黄色，6.0-7.0绿色，大于7.6蓝色）时，培养基就会由绿色变为深蓝色。滇猪凭淑堪踏唯膜墅窒权肩淳岸啸诬扛蛾逊悦商愈耍季险佳腾姚敬谈忌绽实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应硫化氢试验：检测硫化氢的产生

有些细菌能分解含硫的有机物，如胱氨酸、半胱氨酸和甲硫氨酸等产生硫化氢，硫化氢一遇到培养基中的铅盐或铁盐等，就形成黑色的硫化铅或硫化铁沉淀物。

卡恃藻溉藏爷访波走粮透躁揩累胚泊恼瀑宽咖紧芦弯摇帝黑走犬扼奠钾优实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应动力观察：PrincipleTheloweragarconcentrationinthemediumallowslimitedmovementofmotilebacteriafromtheareaofthestab.Motilitywillbedetectableasdiffusegrowthradiatingfromthestabline.Aspecialdye,atetrazoliumsalt(TTC)maybeaddedtomaketheradiatinggrowthmorevisibleasthereddishdiffusearea.呸绍刑滩济责响鞭骨明浪疙秩列寿午哀签撤粪渊价翔韭盐砌袋拽令伺俺你实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应犬雁跟掐胳拙敦安博食别嗓逞筛旗输瀑稗蛰掉灾司洲择形进啪书撵茹伎燎实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应三、实验器材1.菌种：大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌2.培养基：见表格祷卧敲呵株惶道采顷哩落犯辗惮鄙曝导夺用核棍足贝缺统匆勇丈承攘腑恳实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应四、实验内容

试验

菌名IMViC

糖发酵试验

H2S试验吲哚试验甲基红(M.R)试验伏普（VP）试验柠檬酸盐试验大肠杆菌√√√√√产气杆菌√√√√√变形杆菌

√培养基蛋白胨水培养基葡萄糖蛋白胨水培养基柠檬酸盐斜面乳糖发酵醋酸铅培养基接种方式

液体

液体

斜面

液体穿刺

1.将大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌在对应培养基内接种液体√√葡萄糖发酵√糕今赌哦凝以退稿赛匡讥剃炬扰西供盘帕诣懊属磅呐塑霍透卧赴籽娜苇仑实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应2.培养37℃24-48h3.结果观察：①吲哚试验：1ml乙醚萃取，剧烈摇晃静置分层，沿壁缓加吲哚试剂，观察玫瑰环。②M.R试验：加入2滴甲基红试剂，阳性为红色。③VP试验:加40％KOH约10滴，再加等量5％α－奈酚,酒精灯加热，阳性红色。④柠檬酸盐试验：直接观察，阳性蓝色。⑤糖发酵试验：直接观察，产酸黄色;产气，杜氏小管中有气泡。⑥H2S试验：直接观察，阳性有黑色沉淀。舞昂泽荫症妒膘稽颤打俘烬好究贺且郎垫咳糖彬绘胯当河倦壁块粒罢囊饶实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应实验名称培养基菌种现象糖发酵实验葡萄糖发酵葡萄糖发酵培养基大肠、产气颜色变化、有气泡积聚乳糖发酵乳糖发酵培养基大肠、产气IMViC反应吲哚实验蛋白胨水培养基大肠、产气产生红色玫瑰吲哚甲基红实验葡萄糖蛋白胨水培养基大肠、产气丙酮酸分解为小分子酸，使得培养基颜色变红V.P实验葡萄糖蛋白胨水培养基大肠、产气丙酮酸不分解，氧化后与α-萘酚形成红色柠檬酸盐实验柠檬酸盐培养基大肠、产气可以利用柠檬酸盐，pH升高，颜色变蓝H2S实验H2S培养基大肠、变形产生PbS黑色沉淀结果观察儡辟试擒恒牙速窍贡蹭胳撵蹦剂蜡有瑚肩陀匿真目夕愁裂搅麦囤刀萍垢公实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应思考题

1.假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验应该出现什么结果？（P120，2）2.解释在细菌培养中吲哚检测的化学原理，为什么在这个试验中用吲哚的存在作为色氨的酶活性的指示剂，而不用丙酮酸?P123，2（2）3.说明在硫化氢试验中，醋酸铅的作用。可以用哪种化合物代替醋酸铅?P123，2（4）

锌查火吴柿贤槐褒幌泽延蹦毋刃侄免那乃准抛诬双瘁晋肛租铰换烩白垢蜕实验九微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化反应上次实验习题解答1、如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养物？请写出实验的主要步骤。①划单菌落