2025 饲料中氯羟吡啶的测定

GB/T22262—2025

前言

本文件按照标准化工作导则第部分标准化文件的结构和起草规则的规定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

本文件代替饲料中氯羟吡啶的测定高效液相色谱法与

GB/T22262—2008《》,GB/T22262—

相比除结构调整和编辑性改动外主要技术变化如下

2008,,:

更改了适用范围见第章年版的第章

a)(1,20081);

更改了高效液相色谱法的原理见年版的第章

b)(4.1,20083);

更改了高效液相色谱法的试验步骤见年版的第章

c)(4.5,20087);

更改了高效液相色谱法的试验数据处理见年版的

d)(4.6,20087.2.3);

增加了液相色谱串联质谱法见第章

e)-(5)。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任

。。

本文件由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC76)。

本文件起草单位广东省农业科学院农业质量标准与监测技术研究所广东农科监测科技有限公

:、

司中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所

、。

本文件主要起草人王威利万凯林雪贤王旭邓诣群樊霞潘斐索德成刘晓露季天荣丁晨红

:、、、、、、、、、、、

肖泽苗陈志廷崔泽锋覃淑珍

、、、。

本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为

:

年首次发布为

———2008GB/T22262—2008;

本次为第一次修订

———。

Ⅰ

GB/T22262—2025

饲料中氯羟吡啶的测定

1范围

本文件描述了饲料中氯羟吡啶的高效液相色谱和液相色谱串联质谱测定方法

-。

本文件适用于配合饲料浓缩饲料精料补充料添加剂预混合饲料混合型饲料添加剂和动物源性

、、、、

饲料原料中氯羟吡啶的测定

。

本文件高效液相色谱法的检出限为定量限为液相色谱串联质谱法的检出限

0.5mg/kg,1mg/kg,-

为定量限为

0.05mg/kg,0.1mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中注日期的引用文

。,

件仅该日期对应的版本适用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于

,;,()

本文件

。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

动物饲料试样的制备

GB/T20195

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义

。

4高效液相色谱法

41原理

.

试样中的氯羟吡啶用氨水甲醇提取经碱性氧化铝固相萃取柱净化高效液相色谱仪测定外标法

,,,

定量

。

42试剂或材料

.

警告试验用到的有机试剂对上呼吸道有刺激性为了安全操作时应做好防护在通风橱中操作

:,,,。

除非另有规定仅使用分析纯试剂

,。

421水一级

..:GB/T6682,。

422甲醇色谱纯

..:。

423正己烷

..。

424氨水甲醇溶液准确移取氨水用甲醇稀释至混匀

..0.2%:2mL,1000mL,。

425甲醇溶液量取甲醇和水混匀

..:70mL(4.2.2)30mL,。

426标准储备溶液准确称取氯羟吡啶标准品号纯度不低于

..(200μg/mL):(CAS:2971-90-6,98%)

精确至于棕色容量瓶中用甲醇超声溶解定容混匀以下保

10mg(0.01mg)50mL,(4.2.2),,。-18℃

存有效期为个月或购买有证标准溶液

,6。。

427标准系列溶液准确移取适量标准储备溶液用甲醇溶液稀释定容混匀配制成

..:(4.2.6),(4.2.5),,

1

GB/T22262—2025

质量浓度分别为的标准

0.2μg/mL、0.5μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL

系列溶液临用现配

。。

428碱性氧化铝固相萃取柱或性能相当者

..:10g/20mL,。

429微孔滤膜有机系

..:0.45μm,。

43仪器设备

.

431高效液相色谱仪配紫外检测器或二极管阵列检测器

..:。

432分析天平精度和

..:0.01g0.01mg。

433涡旋混合器

..。

434氮吹仪可控温

..:50℃±2℃。

435往复式振荡器

..。

436离心机转速不低于

..:10000r/min。

437超声波清洗器

..。

44样品

.

按制备试样至少粉碎使其全部通过孔径的试验筛混合均匀装入

GB/T20195,200g,0.425mm,,

密闭容器中避光保存备用

,。

45试验步骤

.

451提取

..

平行做两份试验称取试样精确至置于离心管中准确加入V氨水

。2g(0.01g),50mL,25mL(1)

甲醇溶液涡旋振荡提取离心待净化

(4.2.4),1min,200r/min20min,5000r/min5min,。

452净化

..

碱性氧化铝固相萃取柱预先用甲醇活化准确移取V待净化溶液

(4.2.8)15mL(4.2.2),5mL(2)

于固相萃取柱中用甲醇淋洗弃去流出液用甲醇洗脱收

(4.5.1)(4.2.8),5mL(4.2.2),,20mL(4.2.2),

集洗脱液氮气吹至近干准确加入V甲醇溶液和正己烷涡旋

,50℃,1mL(3)(4.2.5)10mL(4.2.3),

取下层溶液离心过微孔滤膜待测

1min,10000r/min5min,0.45μm,。

453测定

..

4531高效液相色谱参考条件

...

高效液相色谱参考条件如下

:

色谱柱柱柱长内径粒径或性能相当者

a):C18,250mm,4.6mm,5.0μm,;

流速

b):1.0mL/min;

柱温

c):35℃;

进样量

d):20μL;

检测波长

e):270nm;

流动相甲醇水体积比

f):(4.2.2)∶(4.2.1)=15∶85()。

4532标准系列溶液和试样溶液测定

...

在仪器的最佳条件下分别取标准系列溶液和试样溶液上机测定氯羟吡啶标准溶

,(4.2.7)(4.5.2)。

液的高效液相色谱图见附录图

AA.1。

2

GB/T22262—2025

4533定性

...

以保留时间定性试样溶液中氯羟吡啶保留时间应与质量浓度相近的标准系列溶液中氯羟吡啶的

,

保留时间一致其相对偏差在之内

,±2.5%。

4534定量

...

以氯羟吡啶的质量浓度为横坐标色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线标准曲线的相关系数应不

,,,

低于试样溶液中氯羟吡啶的质量浓度应在标准曲线的线性范围内如超出线性范围应将试样溶

0.99。,,

液用甲醇溶液稀释稀释倍数f重新测定单点校准定量时试样溶液中氯羟吡啶的质量浓度

(4.2.5)(),。,

与标准溶液质量浓度相差不超过

30%。

46试验数据处理

.

试样中氯羟吡啶含量以质量分数w计数值以毫克每千克表示多点校准按公式计

,(mg/kg)。(1)

算单点校准按公式计算

,(2):

ρ×V×V×

w=131000×f

m×V×…………(1)

21000

式中

:

ρ从标准曲线得到的试样溶液中氯羟吡啶质量浓度单位为微克每毫升

———,(μg/mL);

V试样提取溶液的体积单位为毫升

1———,(mL);

V试样复溶液的体积单位为毫升

3———,(mL);

换算系数

1000———;

m试样的质量单位为克

———,(g);

V净化时分取待净化溶液的体积单位为毫升

2———,(mL);

超出线性范围后试样溶液稀释的倍数

f———。

A×V×V×ρ×

w=131000×f

A×V×m×…………(2)

s21000

式中

:

A试样溶液中氯羟吡啶的峰面积

———;

V试样提取溶液的体积单位为毫升

1———,(mL);

V复溶液的体积单位为毫升

3———,(mL);

ρ标准溶液中氯羟吡啶的质量浓度单位为微克每毫升

———,(g/mL);

换算系数μ

1000———;

A标准溶液中氯羟吡啶的峰面积

s———;

V净化时分取待净化溶液的体积单位为毫升

2———,(mL);

m试样的质量单位为克

———,(g);

超出线性范围后试样溶液稀释的倍数

f———。

测定结果用平行测定的算术平均值表示保留三位有效数字

,。

47精密度

.

在重复性条件下两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的

,10%。

5液相色谱-串联质谱法

51原理

.

试样中的氯羟吡啶用氨水甲醇提取经碱性氧化铝固相萃取柱净化液相色谱串联质谱仪测定基

,,-,

3

GB/T22262—2025

质匹配标准溶液校准外标法定量

,。

52试剂或材料

.

警告试验用到的有机试剂对上呼吸道有刺激性为了安全操作时应做好防护在通风橱中操作

:,,,。

除非另有规定仅使用分析纯试剂

,。

521水一级

..:GB/T6682,。

522甲醇色谱纯

..:。

523甲酸铵色谱纯

..:。

524正己烷

..。

525氨水甲醇溶液准确移取氨水用甲醇稀释至混匀

..0.2%:2mL,1000mL,。

526甲酸铵溶液称取甲酸铵用水溶解定容至混匀

..(5mmol/L):0.315g(5.2.3),、1000mL,。

527标准储备溶液准确称取氯羟吡啶标准品号纯度不低于

..(200μg/mL):(CAS:2971-90-6,98%)

精确至于棕色容量瓶中用甲醇超声溶解定容混匀以下保

10mg(0.01mg)50mL,(5.2.2),,。-18℃

存有效期为个月或购买有证标准溶液

,6。。

528标准中间溶液准确移取标准储备溶液于棕色容量瓶中用

..(10μg/mL):(5.2.7)0.5mL10mL,

甲醇稀释定容混匀以下保存有效期个月

(5.2.2)、,。-18℃,3。

529标准系列溶液准确移取适量标准中间溶液用甲醇稀释定容混匀配制成质量浓度分

..:(5.2.8),、,,

别为的标准系列溶液临用

5ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL,

现配

。

5210碱性氧化铝固相萃取柱或性能相当者

..:5g/20mL,。

5211微孔滤膜有机系

..:0.22μm,。

53仪器设备

.

531液相色谱串联质谱仪配电喷雾离子源

..-:。

532分析天平精度为和

..:0.01g0.01mg。

533涡旋混合器

..。

534往复式振荡器

..。

535离心机转速不低于

..:5000r/min。

536氮吹仪可控温

..:50℃±2℃。

537超声波清洗器

..。

54样品

.

按制备样品至少粉碎使其全部通过孔径的试验筛混合均匀装入

GB/T20195,200g,0.425mm,,

密闭容器中避光保存备用选取与待测样品类型相同均匀一致且在氯羟吡啶保留时间处仪器响应

,。,,

值小于方法定量限的饲料样品作为空白样品

30%,。

55试验步骤

.

551提取

..

平行做两份试验称取试样添加剂预混合饲料和混合型饲料添加剂精确至

。2g(0.5g)(0.01g),

置于离心管中准确加入V氨水甲醇溶液涡旋振荡提取

50mL,25mL(1)(5.2.5),1min,200r/min

离心待净化

20min,5000r/min5min,。

4

GB/T22262—2025

552净化

..

碱性氧化铝固相萃取柱预先用甲醇活化准确移取V待净化溶液

(5.2.10)10mL(5.2.2),1mL(2)

于固相萃取柱中用甲醇淋洗弃去流出液用甲醇洗脱收

(5.5.1)(5.2.10),2mL(5.2.2),,10mL(5.2.2),

集洗脱液于刻度管中于氮气吹至约用水定容至V混匀过

10mL,50℃5mL~7mL,10mL(3),,

微孔滤膜待测

0.22μm,。

553基质匹配标准系列溶液的制备

..

称取空白试样按照和处理得到空白试样溶液准确移取标准系列溶液于

,5.5.15.5.2。0.1mL(5.2.9)

氮气吹至近干准确加入基质空白试样溶液涡旋混匀配制成质量浓度分别为

50℃,1mL,。0.5ng/mL、

基质匹配标准系列溶液

2ng/mL、5ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL。

554测定

..

5541液相色谱参考条件

...

液相色谱参考条件如下

:

色谱柱柱柱长内径粒径或性能相当者

a):C18,100mm,2.1mm,2.7μm,;

柱温

b):40℃;

流速

c):0.3mL/min;

进样量

d):5μL;

流动相相为甲酸铵溶液相为甲醇梯度洗脱程序见表

e):A(5.2.6);B(5.2.2),1。

表1梯度洗脱程序

时间相体积分数相体积分数

/minA()/%B()/%

0.09010

1.59010

3.02080

5.02080

5.19010

8.09010

5542质谱参考条件

...

质谱参考条件如下

:

电离方式电喷雾电离正离子模式+

a):,(ESI);

检测方式多反应监测

b):(MRM);

毛细管电压

c):4.5kV;

离子源温度

d):400℃;

脱溶剂温度

e):300℃;

干燥气流量氮气

f):600L/h;

氯羟吡啶定性离子对定量离子对和碰撞能量见表

g)、2。

5

GB/T22262—2025

表2氯羟吡啶定性离子对定量离子对和碰撞能量

、

定性离子对定量离子对碰撞能量

待测物名称

mzmz

//eV

氯羟吡啶192.0>101.127

192.0>101.1

192.0>87.132

5543基质匹配标准系列溶液和试样溶液的测定

...

在仪器的最佳条件下分别取基质匹配标准系列溶液和试样溶液上机测定氯羟吡啶

,(5.5.3)(5.5.2)。

标准溶液定量离子色谱图见附录中图

BB.1。

5544定性

...

在相同试验条件下试样溶液与基质匹配标准系列溶液中氯羟吡啶的保留时间相对偏差应在

,±2.5%

之内根据表选择的定性离子对比较试样谱图中氯羟吡啶定性离子对的相对离子丰度与质量浓度接

。2,

近的基质匹配标准系列溶液中对应的定性离子对的相对离子丰度若偏差不超过表规定的范围则可判

,3,

定为样品中存在氯羟吡啶

。

表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度

/%>50>20~50>10~20≤10

最大允许偏差

/%±20±25±30±50

5545定量

...

以基质匹配标准系列溶液中氯羟吡啶的质量浓度为横坐标色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线标

、,,

准曲线的相关系数应不低于试样溶液与标准溶液中氯羟吡啶的质量浓度均应在仪器检测的线性范

0.99。

围内如超出线性范围应减少称样量后重新测定单点校准定量时试样溶液中氯羟吡啶的浓度与标准

,,。,

溶液浓度相差不超过

30%。

56试验数据处理

.

试样中氯羟吡啶含量以质量分数w计数值以毫克每千克表示多点校准按公式计算

,(mg/kg)。(3),

单点校准按公式计算

(4):

ρ×V×V×

w=131000

m×V××…………(3)

210001000

式中

:

ρ从标准曲线得到的试样溶液中氯羟吡啶质量浓度单位为纳克每毫升

———,(ng/mL);

V试样提取溶液的总体积单位为毫升

1———,(mL);

V试样定容体积单位为毫升

3———,(mL);

换算系数

1000———;

m试样的质量单位为克

———,(g);

V净化时分取待净化溶液的体积单位为毫升

2———,(mL)。

A×V×V×ρ×

w=