基因测序样本处理技师考试试卷及答案

基因测序样本处理技师考试试卷及答案一、填空题（共10题，每题1分）1.基因测序样本处理中，常用的核酸提取方法包括磁珠法和________。2.RNA提取过程中需抑制________酶的活性，防止RNA降解。3.核酸浓度的常用单位是________。4.文库构建中，接头的作用是使DNA片段能与测序平台的________结合。5.PCR反应的三个基本步骤是变性、退火和________。6.测定核酸纯度常用的仪器是________。7.长期保存DNA样本的温度通常为________℃。8.反转录酶的作用是将RNA转化为________。9.测序文库的插入片段大小一般在________bp范围内（写出典型范围即可）。10.样本采集后，若不能立即处理，应置于________℃冰箱暂存。二、单项选择题（共10题，每题2分）1.以下哪种样本不适合进行基因测序？（）A.新鲜血液样本B.严重降解的组织样本C.唾液样本D.冷冻保存的细胞样本2.核酸提取中，裂解液的主要作用是（）A.纯化核酸B.破碎细胞释放核酸C.抑制酶活性D.调节pH值3.与Nanodrop相比，Qubit测定核酸浓度的优势是（）A.速度更快B.更准确反映有效核酸浓度C.无需试剂D.可测纯度4.文库构建中PCR扩增的主要目的是（）A.片段化DNAB.修复末端C.增加文库产量D.连接接头5.RNA样本短期保存的适宜温度是（）A.4℃B.25℃C.-20℃D.-80℃6.磁珠法提取核酸的优点不包括（）A.操作简单B.污染少C.成本低D.适合自动化7.DNA样本的A260/A280比值理想范围是（）A.1.2-1.4B.1.6-1.8C.1.8-2.0D.2.0-2.28.测序前，DNA样本的浓度一般要求不低于（）A.1ng/μLB.10ng/μLC.50ng/μLD.100ng/μL9.文库构建中接头连接需要用到的酶是（）A.DNA聚合酶B.连接酶C.反转录酶D.限制性内切酶10.防止样本交叉污染的措施不包括（）A.使用一次性枪头B.工作台分区C.共用移液器D.样本标记清晰三、多项选择题（共10题，每题2分）1.影响核酸提取质量的因素有（）A.样本新鲜度B.裂解时间C.离心速度D.试剂纯度2.常用的RNA提取试剂有（）A.TRIzolB.RNAisoPlusC.RNeasyKitD.TE缓冲液3.文库构建的主要步骤包括（）A.DNA片段化B.末端修复C.接头连接D.PCR扩增4.核酸质量控制的指标包括（）A.浓度B.纯度C.完整性D.片段大小5.防止样本交叉污染的方法有（）A.使用无菌耗材B.操作前消毒工作台C.移液器定期校准D.样本分开存放6.DNA样本的保存方式包括（）A.TE缓冲液B.-20℃冷冻C.-80℃冷冻D.室温保存7.样本处理中常见的问题有（）A.核酸降解B.浓度不足C.交叉污染D.片段大小不均8.反转录反应的必需试剂包括（）A.RNA模板B.反转录酶C.引物D.dNTPs9.磁珠法分离核酸的原理涉及（）A.磁性吸附B.盐浓度调节C.有机溶剂沉淀D.离心分离10.样本采集时的注意事项有（）A.避免溶血B.及时标记C.低温运输D.反复冻融四、判断题（共10题，每题2分）1.RNA提取时无需佩戴手套。（）2.Qubit比Nanodrop更准确测定核酸浓度。（）3.文库构建中接头连接后不需要纯化。（）4.样本可以在4℃冰箱长期保存。（）5.DNA样本的A260/A280比值为1.8时纯度较好。（）6.血液样本采集后应立即提取核酸。（）7.磁珠法不能用于RNA提取。（）8.PCR循环次数越多，文库产量越高且质量越好。（）9.测序样本的片段大小越均匀，测序质量越好。（）10.处理不同样本时可以共用移液器枪头。（）五、简答题（共4题，每题5分）1.简述核酸提取的基本步骤。2.简述文库构建的主要流程。3.说明样本质量控制的重要性及常用方法。4.简述防止基因测序样本处理中交叉污染的措施。六、讨论题（共2题，每题5分）1.讨论影响基因测序样本质量的关键因素及应对措施。2.比较磁珠法与酚氯仿法提取核酸的优缺点。答案部分一、填空题答案1.酚氯仿法2.RNase（核糖核酸酶）3.ng/μL4.测序芯片（或flowcell）5.延伸6.Nanodrop7.-808.cDNA（互补DNA）9.200-50010.4二、单项选择题答案1.B2.B3.B4.C5.A6.C7.B8.B9.B10.C三、多项选择题答案1.ABCD2.ABC3.ABCD4.ABCD5.ABD6.ABC7.ABCD8.ABCD9.AB10.ABC四、判断题答案1.×2.√3.×4.×5.√6.√7.×8.×9.√10.×五、简答题答案1.核酸提取基本步骤：①样本裂解：通过物理或化学方法破碎细胞释放核酸；②分离纯化：利用试剂或磁珠分离核酸与杂质；③洗脱：用缓冲液洗脱得到纯净核酸。过程需避免核酸降解，保持低温和防止RNase污染。2.文库构建流程：①DNA片段化：打断基因组DNA为合适大小；②末端修复：平末端化并加磷酸基团；③加A尾：3’端加A便于接头连接；④接头连接：连接测序接头；⑤PCR扩增：增加文库产量；⑥纯化：去除杂质得到高质量文库。3.质控重要性：保证测序数据准确，避免无效测序。常用方法：Qubit测浓度、Nanodrop测纯度（A260/A280）、电泳或Bioanalyzer检测完整性和片段大小。4.防交叉污染措施：使用一次性耗材；工作台分区操作；操作前后消毒；样本标记清晰；佩戴手套口罩；定期检测环境污染。六、讨论题答案1.关键因素及应对：①样本采集：溶血降解DNA，需避免摇晃及时分离；②保存：高温或反复冻融降解核酸，应低温保存；③提取：试剂差或操作不当影响纯度，选可