CN119403804A 纳米材料递送载体及其使用方法 （康涅狄格大学）

2024.11.28PCT/US2023/0651932023.03.31WO2023/192975EN2023.10.05一种自组装纳米材料包括Janus基纳米管，其中所述Janus基纳米管包括至少一种由式I至述了包括所述Janus基纳米管的组合物，包括共价或非共价附着于自组装纳米材料的生物活性2342.根据权利要求1所述的自组装纳米材料，其中所3.根据权利要求1所述的自组装纳米材料，其中4.根据权利要求1所述的自组装纳米材料，其中所述Janu5Val_Cit的连接子或含Val_Ala的连8.根据权利要求1_7中任一项所述的自组装纳米材料，其中R4为包裹材料并选自聚合10.根据权利要求1_8中任一项所述的自组装纳米材料，其中所述T为靶向分子并选自组装纳米材料进一步包括共价或非共价附着于自组装纳米材料12.根据权利要求10所述的自组装纳米材料，其中所述生物活性分子非共价附着于所14.根据权利要求1_12中任一项所述的自组装纳米材料，其中所述生物活性分子包括15.根据权利要求1_13中任一项所述的自组装纳米材料，其中所述生物活性分子包括于所述自组装纳米材料总重量的0.1wt％至99.9wt18.根据权利要求1_16中任一项所述的自组装纳米材料，其中所述自组装纳米材料的620.根据权利要求18所述的组合物，其中所述ECM分子包括羟基磷灰石、纤连蛋白、21.一种可注射的药物组合物，包括如权利要求1_19中任一项所述的自组装纳米材料7[0006]根据37C.F.R.1.52(e)(5)，电子文件名为:UCT0291PCT_Sequence_Listing_的阳离子脂质含量倾向于产生促炎症表型。这些限制使得其获得用于治疗应用的高效RNA89[0020]本发明还公开了包含上述自组装纳米材料和药学上可接受的载体的可注射组合JBNP_miRNA的大小和宽度的TEM图像分析；图3C显示了Arg_JBNP_miR140的zeta电位分析；了通过Arg_JBNP或Lipo递送Cy5.5_eGFP_mRNA的荧光图像；图3I显示了通过Arg_JBNP递送BSA_AF488的荧光图像；图3J显示了Cas9eGFP的时间依赖性递送；图3K显示了Arg_JBNP_ArgJBNT/GlyJBNT/AspJBNT的UV_Vis光谱图；图6B为显示了计算总/共组装的ArgJBNT、GlyJBNT和AspJBNT的UV_Vis光谱图；图6C为ArgJBNT/AspJBNT/GlyJBNT/共组装(混合)、ArgJBNT(Arg)、GlyJBNT(Gly)、和AspJBNT(Asp)的尺寸对比图；图6D为显示了ArgJBNT/[0030]图8A显示了使用LysJBNP_阿霉素(LysJBNP_DOX)的细胞凋亡试验的结果。图8B显显微图像。图8L显示了JBNP_DOX_siRNA至球体的时间依赖性递送。图8M显示了使用对照、JBNP_DOX和JBNP_DOX_siRNA处理的细胞凋亡染色的代表性图像。图8N为检测对照、JBNP_[0031]图9A显示了ArgJBNP_siRNA的生物分布。图9B显示了与生理盐水相比，ArgJBNP_了对ArgJBNP和LysJBNP进行pKa分析的数据。图9K显示了ArgJBNT、RNA和ArgJBNP_RNA的UV_VIS分析。图9L为显示了不同浓度的ArgJBNP、脂质纳米粒(LNP)、聚乙烯亚胺纳米粒(PEI)和单壁碳纳米管(SWNT)的细胞活力数据的图。图9M显示了参考治疗的凝胶阻滞试验时间稳定性的zeta电位数据。图9T显示了ArgJBNP和LipofectamineTM2000(Waltham，MA，USA)对Cas9mRNA的时间依赖性递送。图9U显示了通过ArgJBNP或LipofectamineTM2000蛋白(RFP)在表达RFP的人脐静脉内皮细胞(RFP_HUV性数据。图9W显示了将Cas9_eGFPmRNA或gRNA_ATTO550递送至C28/I2细胞进行动力学研吲哚(DAPI)染色的肝脏切片的荧光图像。图10E显示了Ai14小鼠活体切片的苏木精和伊红定器官的IVIsSpectrum体内成像数据的分布图。图11C为用于蛋白冠分析的十二烷基硫酸性。图11F显示了使用ArgJBNp_mRNA治疗后IgG和IgM的相对变化。图11G显示了进行ArgJBNp_mRNA注射后的BALB/cJ小鼠全血细胞计数(CBC)得出的白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)和血小板(PLT)的相对变化。图11H显[0034]图12A显示了ArgJBNp_RNA的UV_VIS分析。图12B显示了Rab5和Rab7的免疫细胞化[0035]图13A显示了PEG对细胞活力的影响。图13B显示了PEG_JBNP_siRNA与JBNP_siRNA和ArgJBNP_siRNA相比的生物分布。图13C显示了肝脏中ArgJBNP、LysJBNP和PEG_JBNP的IVIsSpectrum体内成像数据的量化。[0036]图14A显示了WYRGRL_PEG_JBNP_mRNA的联合PEG效应和软骨靶向能力。图14B为接受WYRGRL_PEG_JBNP_mRNA后的膝关节的代表性番红_O_染色切片。图14C为接受WYRGRL_PEG_JBNP_mRNA后的膝关节的代表性[0037]本发明公开了包含Janus纳米管的自组装纳米材料，其由具有单环系统的单元组 就是说，在上下文允许的情况下，这些词语旨在表达可能包括没有具体叙述的其它元素或[0041]本发明对数值范围的叙述仅仅旨在作为单独提及落在该范围内的每个单独数值在本领域普通技术人员考虑到所述测量和与特定量的测量相关的误差(即测量系统的限实施方式”等，是指与实施方式相关的所述特定元素包含在本发明所述的至少一个实施方或特性可选地与未列举的类似或等效组分或特性一起的任何组合。上或细胞上(视情况而定)。根据本发明设想了将组合物导入宿主或细胞的任何和所有方包括其中两个或三个取代基与氨基氮一起形成杂[0058]药学上可接受的盐的示例包括但不限于：碱性残基(例如胺)2)n氨基酸或氨基酸类似物包括但不限于以下的基4(4甲基苯基)丁酸；(R)3氨基4(4硝基苯基)丁酸；(R)3氨基4(4吡啶4二氟苯基)丁酸；(S)3氨基4(3苯并噻吩基)丁酸；(S)3Lys(Me)2OH3)OH(Me)2OH.HCl[0084]氨基酸类似物包括脯氨酸的类似物。脯氨酸的氨基酸类似物的示例包括但不限离本发明基本范围的情况下，可以做出许多修改以使特定情况或材料适应本发明的教导。[0117]本发明的自组装纳米材料包括Janus基纳米管(JBNT)。JBNT由基于单环体系的结是H或CH31L是键或连接基团；T是生物活性分子或靶脑屏障(BBB)穿透的靶向分子，例如转铁蛋白、OX26、CAQK(SEQIDNO:23)和乳铁蛋白；VLTTGLPALISWIKRKRQQ(SEQIDNO:35)、NNSK子，例如WGA；(xi)肠靶向蛋白，例如UEA_1；(xii)膜二肽酶靶向分子，例如GFE和CGFECVRQCPERC(SEQIDNO:42)；(xiii)内质网(ER)靶向分子，Tyr)_Lys_Phe_NH2、(1,7_双_4MSVLTPLLLRGLTGSARRLPVPRAKIHWLC(SEQIDNO:49)、GKRK(SEQIDNO:50)和D[KLAKLAK]2(SEQIDNO:51)；(xvii)核靶向分子，例如KKKRKV(SEQIDNO:52)、K57)、GALA(SEQIDNO:58)、WEAALAEALAEALAEHLAEALAEALEALAA(SEQIDNO:59)、Pas、FFLIPKG(SEQIDNO:60)、THRPPMWSPWVWP(SEQIDNO:61)、Angiopep2、YTIWMPENPRPGTPCDIFTNSRGKRASNG(SEQIDIL_13p、TAMRAVDKLLLHLKKLFREGQFNRNFESIIICRDRT(SEQIDNO:69)、CGEMGWVRC(SEQIDPro_Lys_Lys_Lys_Arg_Lys_Val(SEQIDNO:72)、Ala_Ala_Phe_Glu_Asp_Leu_Arg_Val_Leu_Ser(SEQIDNO:73)、和Lys_Arg_Pro_Ala_Ala_Thr_Lys_Lys_Arg_Gly_Qln_Arg_Lys_铁蛋白受体靶向肽，例如THRPPMWSPVWP(SEQIDNO:76)；(xx)滑膜靶向肽，例如仿生膜的包裹材料。包裹材料可以帮助保护自组装纳米材料免受细胞和/或器官从体内的[0133]在本发明所述的任何方面或实施方式中，自组装纳米材料可以包括单一类型的[0136]在本发明所述的任何方面或实施方式中，Janus基纳米管包括至少一种由式IX至室结构的两个或多个自组装纳米材料群。例如，在本发明所述的任何方面或实施方式中，[0148]在本发明所述的任何方面或实施方式中，JBNT与ECM分子的重量比为1000:1至1:和miR140(WYRGRL_JBNP_miR140)的靶向分子。在本发明所述的任何方面或实施方式中，[0151]在本发明所述的任何方面或实施方式中，JBNP或JBNT包括靶向sgIL_1R的CRISPRTCTCCTCCTCTTCCTGTTCCATTCAGAGACGATCTGCCGACCCTCTGGGAGAAAATCCAGCAAGATGCAAGCCTTCAGAATCTGGGATGTTAACCAGAAGACCTTCTATCTGAGGAACAACCAACTAGTTGCTGGATACTTGCAAGGACCAAATGTCAATTTAGAAGAAAAGATAGATGTGGTACCCATTGAGCCTCATGCTCTGTTCTTGGGAATCCATGGAGGGAAGATGTGCCTGTCCTGTGTCAAGTCTGGTGATGAGACCAGACTCCAGCTGGAGGCAGTTAACATCACTGACCTGAGCGAGAACAGAAAGCAGGACAAGCGCTTCGCCTTCATCCGCTCAGACAGTGGCCCCACCACCAGTTTTGAGTCTGCCGCCTGCCCCGGTTGGTTCCTCTGCACAGCGATGGAAGCTGACCAGCCCGTCAGCCTCACCAATATGCCTGACGAAGGCGTCATGGTCACCAAATTCTACTTCCAGGAGGACGAGTAG[0153]在本发明所述的任何方面或实施方式中，JBNP或JBNT包括IL_1RA肽mRNA(JBNP_AGATGCAGGCCTTTAGAATCTGGGACGTTAATCAGAAAACCTTCTACCTCAGAAACAACCAGCTGGTCGCCGGCTACCTGCAGGGCCCCAACGTGAATCTGGAAGAGAAGATCGACGTGGTGCCAATCGAGCCTCACGCCCTGTTTCTGGGCATCCACGGCGGAAAAATGTGCCTGTCTTGTGTGAAGTCCGGAGATGAGACAAGACTGCAACTGGAAGCCGTGAACATTACAGACCTGAGCGAGAACCGGAAGCAGGACAAGCGGTTCGCCTTCATCAGAAGCGACAGCGGCCCTACAACCAGCTTCGAGAGCGCCGCTTGCCCCGGCTGGTTCCTGTGCACCGCCATGGAAGCTGATCAGCCTGTGTCCCTGACCAACATGCCTGATGAAGGCGTGATGGTGACCAAGTTCTACTTCCAGGAGGACGAGATGTGA[0154]在本发明所述的任何方面或实施方式中，JBNT或JBNP包括赖氨酸或精氨酸侧[0156]在本发明所述的任何方面或实施方式中，JBNT或JBNP包括软骨靶向分子，例如[0159]在本发明所述的任何方面或实施方式中，JBNP包括CRISPR(例如，Cas9mRNA和gRNA)和肿瘤靶向片段。在本发明所述的任何方面或实施方式中，包括CRISPR(例如，Cas9mRNA和gRNA)和肿瘤靶向片段的JBNP被用于递送和编辑基于精氨酸的JBNT被用于通过网格蛋白介导的内吞作用促进JBNP的[0165]在本发明所述的任何方面或实施方式中，JBNP包括Cas9mRNA_eGFP和gRNA_述的任何方面或实施方式中，自组装纳米材料可以以无菌可注射水性或含油悬浮液的形[0177]化合物ArgJBNT的合成。将化合物A3(156mg)加入至94％TFA/甲基苯基硫醚下搅拌15min后，向溶液中加入固体NaBH(OAc)3(49mg)。然后所得浆液在室温下搅拌24小[0185]化合物GlyJBNT的合成。将化合物A5(1下搅拌15min后，向溶液中加入固体NaBH(OAc)3(49mg)。然后所得浆液在室温下搅拌24小[0193]化合物AspJBNT的合成。将化合物A7(110mg)加[0201]化合物HisJBNT的合成。将化合物A7[0208]化合物PEGLysJBNT的合成。将在NaHCO3水溶液中的合成的LysJBNT(1mg)的溶液[[0215]化合物LPLysJBNT的合成。将在NaHCO3水溶液中的之前合成的LysJBNT(1mg)的溶[0222]化合物SPLysJBNT的合成。将在NaHCO3水溶液中的之前合成的LysJBNT(1mg)的溶[0227]多功能JBNT。将多功能JBNT以适当的摩尔比在室温下结合24h以促进JBNT的自组[0229]通过将Arg_JBNT(1mg/ml)和siRNA_AF488(5uM)在无核酸酶的水中以4:1的体积比[0233]Lys_JBNP递送。将组装好的Lys_JBNP(30μg/ml)转染C28/I2细胞，然后在37℃和鬼笔环肽(30min)和DAPI染色(10min)。转染进细胞24h或48h后，通过流式细胞术定量AlexaFluor区AlexaFluor区组装好的Lys_JBNP(30μg/ml)递送GAPDHsiRNA(On_TARGETplusHumanGAPDHsiRNA，[0234]内体逃逸研究。对于内体逃逸研究，在用4％甲醛固定之前，向细胞中加入JBNT(i)LysJBNTii)RLDPTSYLRTFWC肽_PEGLysJBNTiii)LysJBNPiv)RLDPTSYLRTFWC肽_素D(CytD)处理的细胞通过细胞内荧光降低作为证明miR140(Arg_JBNP_miR140)、Cas9mRNA(Arg_JBNP_C的Arg_JBNP的TEM图像。图3B中的结果是基于TEM图像数据的分析，并显示了Arg_JBNP_miRNA的平均大小和宽度。图3C和3E分别是Arg_JBNP_miR140和Arg_JBNP_Cas9mRNA的zeta[0242]图3G为显示细胞摄取siRNA_AF488的流式细胞术分析图。图3H为通过Arg_JBNP或[0243]将包含编码Cas9上游GFP序列的mRNA(见图3K)加入到Arg_JBNP中，以生成Arg_3L中显示了通过流式细胞术检测的Arg_JBNP_eGFP_Cas9mRNA细胞摄取。图5A显示了TEM中的PEGLysJBNT的纳米管结构。图5B和C显示了不同比例(0、内体逃逸效应与JBNT结合。这可以通过结合具有优异质子海绵效应能力的组氨酸_JBNT来[0248]骨关节炎(OA)的严重程度通过MANKIN评分进行评估，然后在手术后1个月通过关节内注射至内侧半月板手术失稳(DMM)模型(3个月大的雄性)小鼠施用治疗(生理盐水，CCTCCGCAGTCACCTAATCACTCTCCTCCTCTTCCTGTTCCATTCAGAGACGATCTGCCGACCCTCTGGGAGAAAATCCAGCAAGATGCAAGCCTTCAGAATCTGGGATGTTAACCAGAAGACCTTCTATCTGAGGAACAACCAACTAGTTGCTGGATACTTGCAAGGACCAAATGTCAATTTAGAAGAAAAGATAGATGTGGTACCCATTGAGCCTCATGCTCTGTTCTTGGGAATCCATGGAGGGAAGATGTGCCTGTCCTGTGTCAAGTCTGGTGATGAGACCAGACTCCAGCTGGAGGCAGTTAACATCACTGACCTGAGCGAGAACAGAAAGCAGGACAAGCGCTTCGCCTTCATCCGCTCAGACAGTGGCCCCACCACCAGTTTTGAGTCTGCCGCCTGCCCCGGTTGGTTCCTCTGCACAGCGATGGAAGCTGACCAGCCCGTCAGCCTCACCAATATGCCTGACGAAGGCGTCATGGTCACCAAATTCTACTTCCAGGAGGACGAGTA[0249]实施例11：检测软骨靶向JBNP_IL_1RA肽mRNA抑制膝关节骨关节炎相关炎症的能力[0250]OA的严重程度通过MANKIN评分进行评估，然后在手术后1个月通过关节内注射至为：ATGCGGCCTAGCGGCAGAAAGTCTAGCAAGATGCAGGCCTTTAGAATCTGGGACGTTAATCAGAAAACCTTCTACCTCAGAAACAACCAGCTGGTCGCCGGCTACCTGCAGGGCCCCAACGTGAATCTGGAAGAGAAGATCGACGTGGTGCCAATCGAGCCTCACGCCCTGTTTCTGGGCATCCACGGCGGAAAAATGTGCCTGTCTTGTGTGAAGTCCGGAGATGAGACAAGACTGCAACTGGAAGCCGTGAACATTACAGACCTGAGCGAGAACCGGAAGCAGGACAAGCGGTTCGCCTTCATCAGAAGCGACAGCGGCCCTACAACCAGCTTCGAGAGCGCCGCTTGCCCCGGCTGGTTCCTGTGCACCGCCATGGAAGCTGATCAGCCTGTGTCCCTGACCAACATGCCTGATGAAGGCGTGATGGTGACCAAGTTCTACTTCCAGGAG官[0252]本发明所述的自组装纳米材料的蛋白冠和包括它的组合物可通过氨基酸残基的[0254]将软骨靶向肽WYRGRL(SEQIDNO:47)用siRNA报告物连接至JBNP，将组装好的WYRGRL_JBNP与siRNA染料转染到人软骨细胞C28/I2细胞中。进行荧光激活细胞分选术[0255]实施例14：检测使用软骨靶向ArgJBNP递送miR140以延缓或预防骨关节炎进展的估，然后在手术后1个月通过关节内注射至内侧半月板手术失稳(DMM)模型小鼠施用治疗的JBNP_CRISPR)。组织切片的DAPI染色、H&E染色和番红_O染色通过荧光显微镜检测OA进估，然后在手术后1个月通过关节内注射至内侧半月板手术失稳(DMM)模型(3个月大的雄估，然后在手术后1个月通过关节内注射至内侧半月板手术失稳(DMM)模型(3个月大的雄示例为：ATGGAAATCTGCAGAGGCCTCCGCAGTCACCTAATCACTCTCCTCCTCTTCCTGTTCCATTCAGAGACGATCTGCCGACCCTCTGGGAGAAAATCCAGCAAGATGCAAGCCTTCAGAATCTGGGATGTTAACCAGAAGACCTTCTATCTGAGGAACAACCAACTAGTTGCTGGATACTTGCAAGGACCAAATGTCAATTTAGAAGAAAAGATAGATGTGGTACCCATTGAGCCTCATGCTCTGTTCTTGGGAATCCATGGAGGGAAGATGTGCCTGTCCTGTGTCAAGTCTGGTGATGAGACCAGACTCCAGCTGGAGGCAGTTAACATCACTGACCTGAGCGAGAACAGAAAGCAGGACAAGCGCTTCGCCTTCATCCGCTCAGACAGTGGCCCCACCACCAGTTTTGAGTCTGCCGCCTGCCCCGGTTGGTTCCTCTGCACAGCGATGGAAGCTGACCAGCCCGTCAGCCTCACCAATATGCCTGACGAAGGCGTCATGGTCACCAAATTCTACTTCCAGGAG估，然后在手术后1个月通过关节内注射至内侧半月板手术失稳(DMM)模型(3个月大)小鼠1RA肽的mRNA序列的示例性非限制性示例为：ATGCGGCCTAGCGGCAGAAAGTCTAGCAAGATGCAGGCCTTTAGAATCTGGGACGTTAATCAGAAAACCTTCTACCTCAGAAACAACCAGCTGGTCGCCGGCTACCTGCAGGGCCCCAACGTGAATCTGGAAGAGAAGATCGACGTGGTGCCAATCGAGCCTCACGCCCTGTTTCTGGGCATCCACGGCGGAAAAATGTGCCTGTCTTGTGTGAAGTCCGGAGATGAGACAAGACTGCAACTGGAAGCCGTGAACATTACAGACCTGAGCGAGAACCGGAAGCAGGACAAGCGGTTCGCCTTCATCAGAAGCGACAGCGGCCCTACAACCAGCTTCGAGAGCGCCGCTTGCCCCGGCTGGTTCCTGTGCACCGCCATGGAAGCTGATCAGCCTGTGTCCCTGACCAACATGCCTGATGAAGGCGTGATGGTGACCAAGTTCTACTTCCAGGAGGACGAGATGTGA官[0266]本发明所述的自组装纳米材料的蛋白冠和包括它的组合物可通过氨基酸残基的[0268]将软骨靶向肽WYRGRL(SEQIDNO:47)用mRNA报告物连接至JBNP，将组装好的IVIS8[0270]向BALB/cJ小鼠静脉注射ArgJBNP_mcherrymRNA。通过成像监测ArgJBNP_IVIS8IVIS8[0272]向BALB/cJ小鼠静脉注射肾靶向_JBNP_mRNACy5。通过成像监测肾靶向_IVIS8IVIS8[0274]向BALB/cJ小鼠静脉注射脑靶向_JBNP_mRNACy5。通过成像监测脑靶向_IVIS8IVIS8[0276]向BALB/cJ小鼠静脉注射肺靶向_JBNP_mRNACy5。通过成像监测肺靶向_IVIS8IVIS8[0278]向BALB/cJ小鼠静脉注射脾靶向_JBNP_mRNACy5。通过成像监测脾靶向_IVIS8IVIS8[0280]向BALB/cJ小鼠静脉注射骨靶向_JBNP_mRNACy5。通过成像监测骨靶向_IVIS8IVIS8IVIS8IVIS8IVIS8IVIS8[0286]向BALB/cJ小鼠静脉注射胰靶向_JBNP_mRNACy5。通过成像监测胰靶向_IVIS8[0288]向BALB/cJ小鼠静脉注射肠靶向_JBNP_mRNACy5。通过IVIS8成像监测肠靶向_[0290]向异种移植模型静脉注射肿瘤靶向_JBNP_mRNACy5。通过IVIS8成像监测肿瘤靶时间。由Cas9mRNA(0.25mg/kg)和sgLOXp组成的ArgJBNP_CRISPR通过尾静脉注射或眶后注射静脉注射2_7天。通过IVIS8成像监测/检测串联二聚体Tomato(tdTomato)阳性信号(图[0294]将由Cas9mRNA和sgRB1组成的组装好的JBNP_CRISPR静脉注射到BALB/cJ小鼠7_28JBNP_CRISPR可以靶向淋巴结并编辑淋巴结细胞的DNA。具有肺靶向分子或片段的JBNP_[0298]具有肿瘤靶向分子或片段的JBNP_CRISPR可以靶向实体肿瘤并编辑肿瘤细胞的[0300]通过每5天尾静脉注射JBNP剂量(每种治疗的优化剂量)20天来检测急性毒性。对[0308]检测包含本发明不同类型JBNT的JBNP的内体逃逸。通过用LysoTracker被检测的JBNP接触的细胞进行染色来检测内体。使用ImageJ软件按照共定位阈值和(Sigma)测定包括JBNP在内的各种载体的细胞活力。共孵育24小时后，用酶标仪测定吸光[0312]将C28/I2细胞接种于24孔板(5000个细胞/孔)并孵育过夜。将共组装的JBNP_向研究也如图7B和图7C所示。软骨靶向WYRGRL_ArgJBNP增加了递送siRNA在膝关节中的保[0315]图8A_8G显示了小分子药物(阿霉素)可以通过JBNP递送。图8A和8B显示了检测单层转染细胞的凋亡标志物。图8C和8D显示了当用JBNP_DOX处理时对球体形成的抑制作用。递送。图8K和8L是通过JBNP递送DOX和siRNA_AF488的荧光图像。图8M具有用凋亡标志物[0316]图9A显示了通过ArgJBNP递送的siRNA在BALB/Cj小鼠中的生物分布。图9B和9C显配方的优化。图9G和9H为用于优化ArgJBNP_mRNA配方的响应面法(RSM)。图9I为ArgJBNP_mRNA的摄取机制分析。图9J为对ArgJBNP_mRNA的pKA分析的6_(对甲苯基)_2_萘_6_磺酸(TNS)测定。图9K为UV_VIS分析。图9L显示了ArgJBNP的细胞活力测定结果。图9M显示了ArgJBNP_mRNA_gRNA凝胶阻滞试验。图9N和9O显示了流式细胞术分析，与LysJBNP_mRNA和LipofectamineTM2000_mRNA相比，检测了ArgJBNP_mRNA的递送效率。图9P_9S显示了ArgJBNP_mRNA在室温下2周的优异稳定性。图9T和9U显示了Cas9mRNA和gRNA在C28/I2细胞中的时间依赖性递送。图9V显示了通过流式细胞术分析的RFP_HUVEC细胞的时间依赖性基因编辑。图9W为Cas9eGFPmRNA和gRNA通过ArgJBNP递送的动力学研究。图9X为gRNA和和11D显示了ArgJBNP_mRNA的蛋白冠分析。图11C通过SDS_PAGE显示了蛋白冠。图11D为ArgJBNP_mRNA蛋白冠的LC/MS/M[0318]此外，图11E_11H检测了ArgJBNP_mRNA的免疫原性。图11E显示了重复注射[0321]示例性图14A_14C显示了WYRGRL_PEG_JBNP_mRNA_cy5的联合的PEG效应和靶向能