CN119403834A 治疗神经系统疾病的方法 （中国抗体制药有限公司）

2024.12.19PCT/CN2023/0888632023.04.18WO2023/202553EN2023.10.26本文提供了用某些双特异性抗体或抗原结合片段促进清除β淀粉样蛋白(Aβ)斑块的方或抗原结合片段的一种特异性针对神经细胞表22.根据权利要求1所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗原结合片段与在神经免疫3.根据权利要求1和2所述的方法，其中4.一种在有需要的受试者中减轻神经炎症的方法，所述效量的权利要求1所述的双特异性抗体或抗原结合片段的步骤，其中所述双特异性抗体或抗原结合片段与在神经免疫系统细胞表面上表达的内化抗原结合(a)诱导表面受体/抗原6.根据权利要求1至5所述的方法，其中所述受试者患有临床或临床前阿尔茨海默病、8.一种在有需要的受试者中治疗神经炎症相关的疾39.根据权利要求7或8所述的方法，其中Aβ相关或215.根据权利要求14所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗CD22部分的VL和VH分别具有SEQIDNO:7和SEQIDNO:8的氨基酸序列。16.根据权利要求15所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗CD22结合部17.根据权利要求14所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗CD22部分的VL和VH分别具有SEQIDNO:9和SEQIDNO:10的氨基酸序列。18.根据权利要求17所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗CD22结合部19.根据权利要求14所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗CD22部分的VL和VH分别具有SEQIDNo:17和SEQIDNO:18的氨基酸序列。20.根据权利要求19所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗CD22结合部21.根据权利要求14所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗CD22部分的VL和VH分别具有SEQIDNo:19和SEQIDNO:20的氨基酸序列。22.根据权利要求19所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗CD22结合部23.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，424.根据权利要求23所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗CD33部分的VL和VH分别具有SEQIDNO:27和SEQIDNO:28的氨基酸序列。25.根据权利要求24所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗CD33结合部26.根据权利要求23所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗CD33部分的VL和VH分别具有SEQIDNO:35和SEQIDNO:36的氨基酸序列。27.根据权利要求26所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗CD33结合部28.根据权利要求23所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗CD33部分的VL和VH分别具有SEQIDNO:43和SEQIDNO:44的氨基酸序列。29.根据权利要求28所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗CD33结合部30.根据权利要求1至13中任一项所述的方法31.根据权利要求30所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗CD74部分的VL和VH分别具有SEQIDNO:51和SEQIDNO:52的氨基酸序列。32.根据权利要求31所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗CD74结合部33.根据权利要求30所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗CD74部分的VL和VH分别具有SEQIDNo:53和SEQIDNO:54的氨基酸序列。34.根据权利要求33所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗CD74结合部35.根据权利要求1至13中任一项所述536.根据权利要求35所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗Aβ部分的VL和VH分别具有SEQIDNO:61和SEQ37.根据权利要求36所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗Aβ结合部分38.根据权利要求35所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗Aβ部分的VL和VH分别具有SEQIDNO:70和SEQIDNO:71的氨39.根据权利要求38所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗Aβ结合部分40.根据权利要求35所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗Aβ部分的VL和VH分别具有SEQIDNO:78和SEQIDNO:79的氨41.根据权利要求40所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗Aβ结合部分42.根据权利要求35所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗Aβ部分的VL和VH分别具有SEQIDNO:86和SEQIDNO:87的氨43.根据权利要求42所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗Aβ结合部分44.根据权利要求35所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗Aβ部分的VL和VH分别具有SEQIDNO:94和SEQIDNO:95的氨45.根据权利要求44所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗体片段的抗Aβ结合部分46.根据权利要求1至45中任一项所述的方法，其中所述双47.根据权利要求46所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗原结合片段经静脉或皮48.根据权利要求1至47中任一项所述的方法，其中所述双50.根据权利要求1至47中任一项所述的方651.根据权利要求1至50中任一项所述的方52.根据权利要求1至51中任一项所述的方53.根据权利要求52所述的方法，其中所述双特异性抗体或抗原结合片段在至少三个54.根据权利要求1至53中任一项所述的方7[0002]本申请要求2022年4月21日提交的美国临时申请63/333,308号的优先权，其全部8[0009]在本文提供的方法的一些实施方式中，受试者患有临床或临床前阿尔茨海默病、上的表面受体或蛋白，在另一端特异性结合Aβ,其中靶向神经细胞的双特异性抗体或抗原结合片段的表面受体/抗原结合部分(a)诱导表面受体/抗原的内化；和/或(b)抑制小胶质在神经细胞上的表面受体或抗原，在另一端特异性结合Aβ,其中靶向神经细胞的双特异性抗体或抗原结合片段的表面受体/抗原结合部分(a)诱导表面受体/抗原的内化；和/或(b)浸润T细胞的抗原呈递；和/或(e)促进由少突胶质细胞或其他神经免疫细胞对受损髓鞘的病。9端特异性结合表达在神经细胞上的CD22的CLLNFSCYGYPIQ(SEQIDNO:122)和端特异性地结合表达在小胶质细胞上的人CD22的CLLNFSCYGYPIQ(SEQIDNO:122)和合片段的VL和VH分别具有SEQIDNO:7和SEQIDN原结合片段的VL和VH分别具有SEQIDNO:9和SEQIDNO:10的氨基酸序列。在一些实施方合片段的VL和VH分别具有SEQIDNO:17和SEQIDNO:18的氨基酸序列。在一些实施方式人源化抗体或抗原结合片段的VL和VH分别具有SEQIDNO:19和SEQIDNO:20的氨基酸序SEQIDNO:24、SEQIDNO:25和SEQIDNO:26的氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHSEQIDNO:32、SEQIDNO:33和SEQIDNO:34的氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHSEQIDNO:40、SEQIDNO:41和SEQIDNO:42的氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHSEQIDNO:48、SEQIDNO:49和SEQIDNO:50的氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VH或抗原结合片段的VL和VH分别具有SEQIDNO:61和SEQIDNO:62或SEQIDNO:63的氨基段的轻链和重链分别具有SEQIDNO:96和SEQIDNO:97的氨基酸序列。在一些实施方式段的轻链和重链分别具有SEQIDNO:96和SEQIDNO:98的氨基酸序列。在一些实施方式段的轻链和重链分别具有SEQIDNO:96和SEQIDNO:99的氨基酸序列。在一些实施方式段的轻链和重链分别具有SEQIDNO:96和SEQIDNO:100的氨基酸序列。在一些实施方式片段皮下施用。[0067]在本文公开的方法的一些实施方式中，双特异性抗体或抗原结合片段以1_50mg/(aducanumab)、多那尼单抗(donanemab)、甘特内鲁单抗(gantenerumab)、莱卡尼单抗Fab_veltuzumab)、74_(20)_(20)、2L_rpRNAse_西妥珠单抗_g4P(2L_rpRNAse_milatuzumab_g4P)、西妥珠单抗多柔比星缀合物(milatuz[0074]图1A和图1B提供了流式细胞术结合数据，其展示了CD22(图1A)和CD33以及CD74[0077]图4提供了ELISA数据，其展示了双特异性抗体SM03_Adu、SM06_Adu、SM03_BAN、[0078]图5提供了流式细胞术数据，其展示了CD22_Aβ双特异性抗体SM03_Adu与HMC_3细[0081]图8示出了双特异性抗体SM03_Adu和SM06_Adu对人PBMC中Aβ诱导的IL_1β释放的[0084]图11示出了两种不同版本的SM03_Adu与单独的抗Aβ单克隆抗体(阿杜卡奴单抗)[0085]阿尔茨海默病(AD)是一种进行性神经退行性疾病，其特征是含有淀粉样蛋白β(A终会损害他们以前独立进行的日常生活活动(ADL)的能力。AD的临床前阶段通常被认为是神经炎症、含有斑块的细胞外Aβ积聚和高磷酸化tau蛋白。Aβ斑块广泛存在于皮质和海马1_42直接与代谢谷氨酸受体5(mGluR5)、N_甲基_D_天冬氨酸(NMDA)受体以及如α_7烟碱乙受体介导的吞噬作用和非Fc受体介导的Aβ清除β聚集体结合通过Fcγ受体介导的吞噬作用引发清除，从而恢复AD患者神经元网络的钙平和核酸化学和杂交结合使用的术语和这些技术均为本领域众所周知肠基质细胞、肝窦和基质细胞以及中枢神经系统(C上表达(Gagneux等人,JournalofBiologicalChemistry(2003),278(48):4或不同细胞(反式结合)上的特定配体结合。CD22的顺式结合常见于相邻分子之间，其中1987.J.Immunol.138:98_103；Doody等人,1995.Science269:242_344；Lanoue等人,[0100]1MHLLGPWLLLLVLEYLAFSDSS[0101]61NPEYNKNTSKFDGTRLYESTKDGKVPSEQKRVQFLGDKNKNCTLSIHPVHLNDSGQLGLR121MESKTEKWMERIHLNVSERPFPPHIQLPPEIQES[0102]181VPMRQAAVTSTSLTIKSVFTRS[0103]241TPKLEIKVTPSDAIVREGDSVT[0104]301KDQSGKYCCQVSNDVGPGRSE[0105]361PTNYTWYHNGKEMQGRTEEKVHIPKILPWHAGTYSCVAENILGTGQRGPGAELDVQYPPK421KVTTVIQNPMPIREGDTVTLSCNYNSSNPSVTRYEWKPHGAWEEPSLGVLKIQNVGWDNT481TIACAACNSWCSWASPVALNVQYAPRDVRVRKIKPLSEIHSGNSVSLQCD[0106]541FFWEKNGRLLGKESQLNFDSISPEDAGSYSCWVNNSIGQTASKAWTLEVLYAPRRLRVSM601SPGDQVMEGKSATLTCESDANPPVSHYTWFDWNNQSLPYHSQKLRLEPVKVQHSGAYWCQ661GTNSVGKGRSPLSTLTVYYSPETIGRRVAVGLGSCLAILILAICGLK[0107]721LQENSSGQSFFVRNKKVRRAPLS[0108]781SEMQRPPPDCDDTVTYSALHKRQ[0110]CD33是一种I型跨膜唾液酸糖蛋白，也称为多唾液酸结合免疫球蛋白型凝集素胞、单核细胞、树突状细胞和小胶质细胞。人CD33优先与N_乙酰神经氨酸α(2_6)半乳糖随后，含ITAM受体启动的激活信号通路被下调。CD33已被确定为AD相关基因：SNPrs3865444C是AD风险等位基因，其可促进CD33在小胶质细胞中的表达并限制Aβ吞噬作用；而SNPrs3865444A是AD保护性等位基因，其可导致产生缺乏唾液酸结合域(D2)的截短包括其示例性氨基酸序列，其可在如UniProt(UniProtKB/Swiss_ProtID：P20138)和[0111]1MPLLLLLPLLWAGALAMDPNFWLQVQESVTVQEGLCVLVPCTFFHPIPYYDKNSPVHGYW61FREGAIISRDSPVATNKLDQEVQEETQGRFRLLGDPSRNNCSLSIVDA[0112]121ERGSTKYSYKSPQLSVHVTDL[0113]181SAAPTSLGPRTTHSSVLIITPR[0114]241GIFPGDGSGKQETRAGVVHGAI[0115]301PTTGSASPKHQKKSKLHGPTET[0117]人CD74是一种具有4种同种型的II型单跨跨膜蛋白。CD74被发现在淋巴和骨髓细性氨基酸序列，可在如UniProt(UniProtKB/Swiss_ProtID：P04233)和GENBANK(NCBI[0118]1MHRRRSRSCREDQKPVMDDQRD[0119]61LAGQATTAYFLYQQQGRLDKLT[0120]121GALPQGPMQNATKYGNMTEDHVM[0121]181FESWMHHWLLFEMSRHSLEQKPTDAPPKESLELEDPSSGLGVTKQDLGPVPM(Seq抗原(例如Aβ或其他自身抗原)可被浸润调节性过程将少量细胞外液(伴随可能存在的小颗粒)吞入细胞的过程，也被称为“胞饮(cell_[0125]目前治疗AD的抗Aβ抗体疗法主要依赖FcγR介导的吞噬作用来减少淀粉样蛋白的症会加剧对血管完整性的损伤。克瑞尼珠单抗是一种靶向所有形式Aβ的人源化IgG4抗体，由于与例如IgG1Fc相比，IgG4Fc区与小胶质细胞的FcγR的关联性降低，因此与较少的用。[0127]本文公开的靶向CD22和Aβ的双特异性抗体(例如SM03或SM06)除了通过CD22内化和Aβ的双特异性抗体通过破坏B细胞、小胶质细胞或少突胶质细胞表面CD22的顺式结合以[0129]本文公开的靶向CD74和Aβ的双特异性抗体(例如LL1_Aβ)可诱导CD74内化并阻断细胞对浸润T细胞的抗原呈递；和/或(e)促进由少突胶质细胞或其他神经免疫细胞对受损T细胞的抗原呈递；和/或(e)促进由少突胶质细胞或其他神经免疫细胞对受损髓鞘的髓鞘其他神经免疫细胞对浸润T细胞的抗原呈递；和/或(e)促进由少突胶质细胞或其他神经免[0132]在本文公开的CD22、CD33或CD74双特异性抗体的处理下，Aβ的内化速率可达到CD22、CD33或CD74，其中双特异性抗体或抗原结合片段为(a)诱导表面受体/抗原的内化；疫细胞对浸润T细胞的抗原呈递；和/或(e)促进由少突胶质细胞或其他神经免疫细胞对受其他神经免疫细胞对浸润T细胞的抗原呈递；和/或(e)促进由少突胶质细胞或其他神经免其抗原结合片段用于减少神经炎症的用途。在一些实施方式中，本文提供了特异性结合CD22、CD33或CD74的双特异性抗体或其抗原结合片段用于制备减少神经炎症的药物的用皮细胞或其他神经免疫细胞对浸润T细胞的抗原呈递；和/或(e)促进由少突胶质细胞或其可促进CD22和CD33的顺反转化。在一些实施方式中，本文所述方法中使用的抗CD22和抗领域的普通技术人员可以通过常规实验来确定。“预防有效量(prophylactically少一个抗原结合位点(其中抗原结合位点通常位于免疫球蛋白分子的可变区内)识别并特为HCVR或VH)和重链恒定区组成。每条轻链都由轻链可变区 价片段，其包含在铰链区通过二硫键连接的两个Fab片段)、Fd(由VH和CH1结构域组成的片是具有通过重组方式接合的VL和VH区的单个多肽链)、重链抗体(HCAb的单可变结构域(VHH)以及由抗体片段形成的双特异性或多特异性抗体。“双特异性 段的连接。例如，见Songsivilai&Lachmann,Clin.Exp.Immunol.79:315_321(1990)；Kostelny等人,J.Immunol.148,1547_1553(1992)；LabrijnAF等人,Bispecificantibodies:amechanisticreviewofthepipeline.NatRevDrugDiscov.18(8):585_608(2019)；NieS等人,B包括使用链霉亲和素核心区以制作四聚体scFv分子(Kipriyanov等人,(1995)Human签制作双价和生物素化scFv分子(Kipriyanov等人,(1994)Mol.Immunol.31:1047_在Fv框架区和/或在被取代的非人类残基内取代其他残基来进一步修饰，以完善和优化抗氨基末端部分包括约120_130个或更多个氨基酸的可变区(VH)和包括恒定区的羧基末端部基末端部分包括约100至约110个或更多个氨基酸的可变区和包括恒定区的羧基末端部分。酸位置编号是根据欧盟索引，如Kabat等人,(1991)Sequencesofproteinsof系统进行了定义。这些系统和/或定义已经经过多年的发展和完善，并且包括Kabat、(Kabat等人,J.Biol.Chem.252:6609_6616(1977)；Kabat,Adv.Prot.Chem.32:1_75框架的一部分，并因此能够适应不同构象的那些抗体序列和确定CDR。规范抗体可变结构域内CDR的位置已通过比较大量结构确定(Al_由于不同抗体中超变区内的残基数量不相同，因此在规范可变结构域编号方案(Al_Kabat1疫粘附素可以将CDR(一个或多个)作为较大的多肽链的一部分并入，可以将CDR(一个或多三级折叠形成的表位(也称为构象表位)通常会(例如抗原)的结合部分(例如抗体)可通过例如免疫测定、ELISA、生物层干涉测量法性的讨论，参见Paul编辑的1989年FundamentalImmunologySecondEdition第二版，性结合(specificallybinds)”是指多肽或分子以约10μM或更低或约1μM或更低的KD结合分(例如抗体)可以或可以不特异性结合第二靶标。因此，“特异性结合(specifically[0160]本领域已知有多种测量结合亲和力的方法，其中任何一种都可用于本公开的目干涉测量法(BLI)测量，例如使用Gator系统(ProbeLife)或Octet_96系统(Sartorius和Piscataway,新泽西州)进行表面等离子体共振(referenceprotein)”或“参照多肽(referencepolypeptide)”)相关的术语“变体取代。蛋白质或多肽的功能片段或功能变体保持参照蛋白质或多肽的基本结构和功能特sequenceencodinganaminoacidsequence)”包括所有彼此简并形式并且编码相同氨[0166]如本文中所使用的，在涉及两个或更多个多核苷酸或多肽时使用的术语“同一列比对的各种算法和软件是本领域众所周知的。这些算法和软件包括但不限于BLAST、指活性剂(例如抗体)产生半最大反应的浓度。也如本文中所使用的和本领域中理解的，[0174]在一些实施方式中，用于本文公开的方法中的是抗CD22抗体、抗CD33抗体或抗CD33或抗CD74抗体或抗原结合片段包括人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供的抗CD22、抗CD33或抗CD74抗体或抗原结合片段包括人类抗体或抗原结合片段。[0178]在一些实施方式中，通过使用重组DNA技术对单克隆抗体进行修饰以产生替代抗是，提及特定抗体的重链CDR或多个重链CDR和/或轻链CDR或多个轻链CDR包括本领域普通技术人员已知的所有CDR定义。可用于本文方法的抗CD22抗体或抗原结合片段包括SM03和功能特征的更多描述可参见例如Liang等人,(2006)结构和功能特征的更多描述可参见Leung等人(1994)ChimerizationofLL2,arapidlyinternalizingantibodyspecificforB_celllymphoma.Hybridoma13:469_476；SteinR,等人,(1993)Epitopespecificityoftheanti_(Bcelllymphoma)序列特征见下表。有关hLL2结构和功能特征的更多描述可参见例如Leung等人,(1995)Constructionandcharacterizationofahumanized,internalizingB_cell(CD22)_specific,leukemia/lymphomaantibody人,(1995)Treatmentofnon_Hodgkin'slymphomawithradiolabeledmurine,chimeric,orhumanizedLL2,ananti_CD22monoclonalantibody.CancerRes.55列特征见下表。有关吉妥珠单抗结构和功能特征的更多描述可参见例如BernsteinID(2000).Monoclonalantibodiestothemyeloidstemcells:therapeuticimplicationsofCMA_676,ahumanizedanti_CD33antibodycalicheamicinHuMy9_6结构和功能特点的更多描述可参见例如Lapusan等人,(2012)PhaseIstudiesofAVE9633,ananti_CD33antibody_maytansinoidconjugate,inadultpatientswith[0206]在一些实施方式中，可用于本文提供的方法的抗CD33抗体或抗原结合片段包括实施方式中，本文提供的抗CD33抗体或抗原结合片段包括表7的一个、两个和/或三个VLPhaseIIItrialofahumanizedanti_CD33antibody(HuM195)inpatientswith构和功能特征的更多描述可参见例如SteinR等人,(2007)CD74:anewcandidatetargetfortheimmunotherapyofB_cellneoplasms.ClinCancerRes.13(18Pt2):5556s_和功能特征的更多描述可参见例如SteinR等人(2007)CD74:anewcandidatetargetfortheimmunotherapyofB_cellneoplasms.ClinCancerRes.13(18Pt2):5556s_[0219]在一些实施方式中，可用于本文提供的方法的抗CD74抗体或抗原结合片段包括特征见下表。有关阿杜卡奴单抗结构和功能特征的更多描述可参见例如SevignyJ等人(2016)TheantibodyaducanumabreducesAβplaquesinAlzheimer's些实施方式中，本文提供的抗Aβ抗体或抗原结合片段包括表13的一个、两个和/或三个VL结构和功能特征的更多描述可参见例如TuckerS等人(2015)ThemurineversionofBAN2401(mAb158)selectivelyreducesamyloid_βprotofibrilsinbrainand[0231]在一些实施方式中，可用于本文提供的方法的抗Aβ抗体或抗原结合片段包括(2012)Gantenerumab:anovelhumananti_Aβantibodydemonstratessustainedcerebralamyloid_βbindingandelicitscell_mediatedremovalofhumanamyloid_些实施方式中，本文提供的抗Aβ抗体或抗原结合片段包括表17的一个、两个和/或三个VL特征见下表。关于克瑞尼珠单抗结构和功能特征的更多描述可参见例如BohrmannB等人(2012)Gantenerumab:anovelhumananti_Aβantibodydemonstratessustainedcerebralamyloid_βbindingandelicitscell_mediatedremovalofhumanamyloid_式中，本文提供的抗Aβ抗体或抗原结合片段包括表21的一个、两个和/或三个VLCDR和一(2)具有SEQIDNO:12氨基酸序列的NO:22氨基酸序列的轻链CDR(VLCDR2)；或(3)具有SEQIDNO:23氨基酸序列的轻链CDR3(1)具有SEQIDNO:21氨基酸序列的VLCDR1；(2)具有SEQIDNO:22氨基酸序列的VLNO:30氨基酸序列的轻链CDR2(VLCDR2)；或(3)具有SEQIDNO:31氨基酸序列的轻链CDR3(1)具有SEQIDNO:29氨基酸序列的VLCDR1；(2)具有SEQIDNO:30氨基酸序列的VLNO:38氨基酸序列的轻链CDR(VLCDR2)；或(3)具有SEQIDNO:39氨基酸序列的轻链CDR3(1)具有SEQIDNO:37氨基酸序列的VLCDR1；(2)具有SEQIDNO:38氨基酸序列的VLNO:46氨基酸序列的轻链CDR(VLCDR2)；或(3)具有SEQIDNO:47氨基酸序列的轻链CDR3(1)具有SEQIDNO:45氨基酸序列的VLCDR1；(2)具有SEQIDNO:46氨基酸序列的VLNO:56氨基酸序列的轻链CDR(VLCDR2)；或(3)具有SEQIDNO:57氨基酸序列的轻链CDR3NO:65氨基酸序列的轻链CDR(VLCDR2)；或(3)具有SEQIDNO:66氨基酸序列的轻链CDR3NO:73氨基酸序列的轻链CDR(VLCDR2)；或(3)具有SEQIDNO:74氨基酸序列的轻链CDR3NO:81氨基酸序列的轻链CDR(VLCDR2)；或(3)具有SEQIDNO:82氨基酸序列的轻链CDR3有SEQIDNO:80氨基酸序列的VLCDR1；(2)具有SEQIDNO:81氨基酸序列NO:89氨基酸序列的轻链CDR(VLCDR2)；或(3)具有SEQIDNO:90氨基酸序列的轻链CDR3括重链可变区(VH)，该重链可变区包括(1)具有SEQIDNO:4氨基酸序列的重链CDR1(VH括重链可变区(VH)，该重链可变区包括(1)具有SEQIDNO:14氨基酸序列的重链CDR1(VH体或其抗原结合片段，其包括VH，该VH包括(1)具有SEQ(2)具有SEQIDNO:15氨基酸序列的VHCDR2；和(3)具有SEQIDNO:16氨基酸序列的VH括重链可变区(VH)，该重链可变区包括(1)具有SEQIDNO:24氨基酸序列的重链CDR1(VH体或其抗原结合片段，其包括VH，该VH包括(1)具有SEQ(2)具有SEQIDNO:25氨基酸序列的VHCDR2；和(3)具有SEQIDNO:26氨基酸序列的VH括重链可变区(VH)，该重链可变区包括(1)具有SEQIDNO:32氨基酸序列的重链CDR1(VH体或其抗原结合片段，其包括VH，该VH包括(1)具有SEQ(2)具有SEQIDNO:33氨基酸序列的VHCDR2；和(3)具有SEQIDNO:34氨基酸序列的VH括重链可变区(VH)，该重链可变区包括(1)具有SEQIDNO:40氨基酸序列的重链CDR1(VH体或其抗原结合片段，其包括VH，该VH包括(1)具(2)具有SEQIDNO:41氨基酸序列的VHCDR2；和(3)具有SEQIDNO:42氨基酸序列的VH括重链可变区(VH)，该重链可变区包括(1)具有SEQIDNO:48氨基酸序列的重链CDR1(VH重链可变区(VH)，该重链可变区包括(1)具有SEQIDNO:58氨基酸序列的重链CDR1(VH重链可变区(VH)，该重链可变区包括(1)具有SEQIDNO:67氨基酸序列的重链CDR1(VH重链可变区(VH)，该重链可变区包括(1)具SEQIDNO:75氨基酸序列的重链CDR1(VH重链可变区(VH)，该重链可变区包括(1)具有SEQIDNO:83氨基酸序列的重链CDR1(VH重链可变区(VH)，该重链可变区包括(1)具有SEQIDNO:91氨基酸序列的重链CDR1(VH体或其抗原结合片段，其包括VH，该VH包括(1)具有SEQ(2)具有SEQIDNO:92氨基酸序列的VHCDR2；和(3)具有SEQIDNO:93氨基酸序列的VH(2)具有SEQIDNO:59氨基酸序列的VHCDR2；和(3)具有SEQIDNO:60氨基酸序列的VH[0283]本领域众所周知，VHCDR3和VLCDR3结构域在抗体与抗原的结合特异性/亲和力抗CD74双特异性抗体或其抗原结合片段可与相应的受体/抗原具有适当的结合/解离动力用与SM03VHCDR3有足够相似性的无关人类抗体的VHCDR3进行取代，其使用标准如中国有不超过一至五个保守相似残基的无关灵长类或人类抗体的相应抗体的VL和/或VHCDR3或人类抗体的相应抗体的VL和/或VHCDR3来取代相应抗体的VL和/或VHCD和VH分别具有SEQIDNO:9和NO:10的氨基酸序列。和VH分别具有SEQIDNO:19和NO:20的氨基酸序列。VL和VH分别具有SEQIDNO:53和NO:54的氨基酸序列和VH分别具有SEQIDNO:61和NO:63的氨基酸序列。具有GSAGSAAGSGEF的氨基酸序列(SEQIDNO:161)。在一些实施方式中，连接子具有KESGSVSSEQLAQFRSLD的氨基酸序列(SEQIDNO:162)。在一些实施方式中，连接子具有EGKSSGSGSESKS的氨基酸序列(SEQIDNO:163)。在一些实施方式中，连接子具有一些实施方式中，本文提供的抗CD22抗体或其抗原结合片段具有包括来自SM03的VH的VH供的抗CD22抗体或其抗原结合片段是SM03的变体。SM03变体的VL可以是SEQIDNO:7中最多有约5个氨基酸取代、添加和/或缺失的SM03的VL的变体。SM03变体的VH可以是SEQID一些实施方式中，本文提供的抗CD22抗体或其抗原结合片段具有包括来自SM06的VH的VH供的抗CD22抗体或其抗原结合片段是SM03的变体。SM06变体的VL可以是SEQIDNO:9中最多有约5个氨基酸取代、添加和/或缺失的SM06的VL的变体。SM06变体的VH可以是SEQID一些实施方式中，本文提供的抗CD22抗体或其抗原结合片段具有包括来自hLL2的VH的VH具有最多约5个氨基酸取代、添加和/或缺失的hLL2的VL的变体。hLL2变体的VH可以是SEQ加和/或缺失的吉妥珠单抗的VL的变体。吉妥珠单抗变体的VH可以是SEQIDNO:28中具有的VL。在一些实施方式中，本文提供的抗CD33抗体或其抗原结合片段具有来自HuMy9_6的实施方式中，本文提供的抗CD33抗体或其抗原结合片段具有包括来自HuMy9_6的VL的VL体的VL可以是在SEQIDNO:35中最多有约5个氨基酸的取代、添加和/或缺失的HuMy9_6的珠单抗的变体。林妥珠单抗变体的VL可以是在SEQIDNO:43中具有多达约5个氨基酸的取一些实施方式中，本文提供的抗CD74抗体或其抗原结合片段具有包括来自cLL1的VH的VH些实施方式中，本文提供的抗CD74抗体或其抗原结合片段具有包括来自hLL1的VH的VH多具有约5个氨基酸取代、添加和/或缺失的hLL1的VL的变体。hLL1变体的VH可以是在SEQ和/或缺失的阿杜卡奴单抗的VL的变体。阿杜卡奴单抗变体的VH可以是在SEQIDNO:62或[0320]在一些实施方式中，本文提供的抗Aβ抗体或其抗原结合片段是被指定为BAN2401的抗体。在一些实施方式中，本文提供的抗Aβ抗体或其抗原结合片段具有来自BAN2401的文提供的抗Aβ抗体或其抗原结合片段可以同时具有来自BAN2401的VL和VH。在一些实施方本文提供的抗Aβ抗体或其抗原结合片段是BAN2401的变体。BAN2401变体的VL可以是在SEQ体的VH可以是在SEQIDNO:71中具有多达约5个氨基酸的取代、添加和/或缺失的BAN2401添加和/或缺失的甘特内鲁单抗的VL的变体。甘特内鲁单抗变体的VH可以是在SEQIDNO:珠单抗的变体。克瑞尼珠单抗变体的VL可以是在SEQIDNO:86中具有多达约5个氨基酸的VH。本文提供的抗Aβ抗体或其抗原结合片段可以具有包括VLCDR1、2和3的VL和包括VH其抗原结合片段是AD38的变体。AD38变体的VL可以是在SEQIDNO:86中最多有约5个氨基一些实施方式中，本文提供的抗CD22抗体或其抗原结合片段具有包括来自SM06的VH的VH供的抗CD22抗体或其抗原结合片段是SM06的变体。SM06变体的VL可以是SEQIDNO:9中最一些实施方式中，本文提供的抗CD74抗体或其抗原结合片段具有包括来自hLL1的VH的VH施方式中，抗CD22、抗CD33或抗CD74双特异性抗体或抗原结合片段的变体包括各自的抗施方式中，抗CD22、抗CD33或抗CD74双特异性抗体或抗原结合片段的变体包括各自的抗CD33或抗CD74双特异性抗体或抗原结合片段包括人IgE抗体的至少一个恒定区。在一些实体或抗原结合片段包括人IgM抗体的至少一个恒定区。在一些实施方式中，本文所述的抗CD22、抗CD33或抗CD74双特异性抗体或抗原结合片段包括人IgG1抗体的至少一个恒定区。饰的抗体包括插入铰链区和经修饰的CH2和/或CH3结构域之间的肽间式中，本文提供的抗体或抗原结合片段的Fc区被修饰，以增强其穿过血脑屏障(BBB)的能基酸取代。在一些实施方式中，IgG1重链恒定区包括选自根据欧盟编号K214R、L234A、一个或多个氨基酸取代。在一些实施方式中，IgG1重链恒定区包括选自根据欧盟编号[0333]在一些实施方式中，变体可包括在抗体或多肽的氨基和/或羧基末端处添加氨基载脂蛋白相连的治疗性抗体可在动物模型中增强B抗体或抗原结合片段可以与结合TEME50A的第二抗体或抗原结合片段融合。在一些实施方括这样的氨基酸取代，其中将具有某些物理和/或化学特性的一种氨基酸更换为具有相同保守氨基酸取代不干扰或抑制变体的一个或多个生物抗体或抗原结合片段的变体结合，CD33与抗CD33双特异性抗体或抗原结合片段的变体结或多个保守氨基酸取代和/或一个或多个非保守氨基酸取代可增强变体的生物活性，从而CD33或抗CD74双特异抗体或抗原结合片段与它们相应抗原结合的解离常数(KD)为约100nMD在50_500nM的范围内。8M_19M_19M_1910M_1910M_11011M_1101011M_111s_1或更小，由SPR(例如BIAcore)测定。在一些实施方式中，本文公开的方法中使用的抗双特异性抗体或抗原结合片段与它们相应的人类抗原解离的kd约为0.5RUs_1或更小。在性抗体或抗原结合片段与其相应的人类抗原解离的kd范围为0.001_0.5RUs_1、0.001__1_1_1_1_1双特异性抗体或抗原结合片段与它们相应的人类抗原结合的ka为约1.0×105RUS_1或更67RUS_177RUS_178RUS_18_[0350]本文公开的方法中使用的抗CD22、抗CD33和/或抗CD74抗体可与它们相应抗原的Zhao等人，(2014)PLOSONE9(5):e96697；美国专利US9371396B2号；和中国专利CD22的结构域2结合，特别是与包含序列161CLLNFSCYGYPIQ173(SEQIDNO:17)和J等人，(2017)MolecularbasisofhumanCD22functionandtherapeutic性抗体或抗原结合片段能以约1_10×109M_1范围内的KA结合相应抗原的线性或构象表位。抗体或抗原结合片段与相应抗原的线性或构象表位结合，其KA在约1x106_1x107M_1、5x1011M_1A在约1x106_1x107M_1的范围内。在一些实施方式中，KA在约1x106_1x107M_1的A在约5x108_5x109M_1的范围内。在一些实施方式中，KA在约1x109_1x1010M_1按例如EdHarlow和DavidLane,ColdSpringHarbProtoc；2006；doi:l0.H0l/HarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,USA1999中所的是与cLL1或hLL1竞争与人CD74结合的双特异性抗体或抗原结合片段。在一些实施方式淋巴瘤细胞系拉莫斯(Ramos)细胞上的原生CD22结合；或放射性标记的I125_吉妥珠单抗、或抗CD74抗体或抗原结合片段竞争与它们的相应抗原结合，其中放射性标记结合；或放射性标记的I125_cLL1或I125_hLL1与人骨髓性白血病细胞系THP_1上的原生CD33结合；或放射性标记的I125_cLL1或I125_THP_1上的原生CD33结合；或放射性标记的I125_cLL1或I125_hL原结合片段竞争与它们相应的抗原结合，其中放射性标记的I125_SM03、I125_SM06或I125_I125_cLL1或I125_hLL1与小胶质细胞(例如HMC_3细胞)或/和少突胶质细胞系(例如HOG或林妥珠单抗；或放射性标记的I125_LL1或I125_hLL1与小胶质细胞CD74)的内化率约为30％。在一些实施方式中，10minCD74)的内化率约为40％。在一些实施方式中，10minCD74)的内化率约为50％。在一些实施方式中，10minCD74)的内化率约为60％。在一些实施方式中，10min抗原结合片段在接触后10min内可诱导相应表面抗原(例如CD22、CD33或CD74)的约20％至表面抗原(例如CD22、CD33或CD74)内化。在一些在15min内被内化。在一些实施方式中，50％的相应表面抗原(例[0359]在一些实施方式中，本发明提供的也表现出针对Aβ蛋白的结合特异性的抗CD2抗CD33或抗CD74双特异性抗体或抗原结合片段可以诱导Aβ以约0.2pg/s、约0.5pg/s、约CD33或抗CD74双特异性抗体或抗原结合片段可以衍生化或与另一种功能分子(例如另一种使用的抗体和抗原结合片段包括本文所述的双特异性抗体的衍生化和以其他方式修饰的价缔合或引入适用于位点特异性缀合的人工氨基酸/官能团)与一个或多个其他分子实体沃尔瑟姆(Waltham)的ThermoScienti(maytansinoids)(例如DM1和DM4)和tub(FITC)、罗丹明、异硫氰酸四甲基罗丹明(TR112111[0366]本文公开了使用治疗有效量的本文公开的抗CD22(例如人CD22)、抗CD33(例如人CD33)或抗CD74(例如人CD74)双特异性抗体或抗原结合片段，或它们的变体或等价物促进线性或构象表位结合；(2)促进被双特异性抗体的抗Aβ部分捕获的细胞外Aβ的清除和被捕(1)与在细胞表面表达各自抗原的细胞上促进抗原内化的表位结合，所述细[0369]在一些实施方式中，如本文所公开的特异性结合各自抗原例如CD22(例如人连续构象表位、诱导快速内化的抗体或其抗原结合片段可以通过筛选重组组合抗体文库选抗体展示文库的方法和试剂的例子可以在例如Ladner等人的美国专利5,223,409号；Fuchs等人，(1991)Biotechnology9:1369_1372；Hay等人，(1992)HumAntibod抗CD33或抗CD74双特异性抗体或抗原结合片段被选择为以0.1RUs_1或更低的kd或0.01RU率常数的鼠抗体、重组抗体或人类抗体，使用PCT公开WO93/06213号中描述的表位印记方法首次使用对人类CD22具有高亲和力和低脱落率常数的亲本鼠抗体或嵌合抗CD22、抗方法中使用的抗体库优选地是按照PCT公开WO92/01047号，McCafferty等人，Nature(1990)348:552_554和Griffiths等人，(1993)EMBOJ12:725_734中所述的方法制备和筛原的胞外结构域与鼠或人免疫球蛋白Fc部分融合的重组融合蛋白以通过使用分别与VHCDR3或VLCDR3互补的PCR引物扩增VH和VL区域来实现，这些引物在相应抗原的细胞外结构域与鼠或人免疫球蛋白的Fc部分融合的重组融合人类免疫球蛋白分子的一个或多个CDR和来自人类的框架区。抗体的人源化方法在本领域中是众所周知的，包括CDR移植(参见，例如Jones等人，Nature,321:522_525(1986)；Riechmann等人，Nature,332残基被啮齿动物抗体中类似位点的残基取代。产生人源化抗体的方法还包括胶合或重铺(参见，例如欧洲专利EP592,106号和EP519,596号；Padlan,1991,Molecular专利申请公开US2005/004266构域序列库进行筛选。与啮齿类动物最接近的人类序列被接受为人源化抗体的人类框架组轻链或重链的所有人类抗体的共识序列。相同的框架可用于几种不同的人源化抗体化抗体的制备可以通过使用亲本序列和人源化序列的三维模型分析亲本序列和各种概念开的或本领域已知的其他抗体形式(例如与促进小胶质细胞中快速内化的线性或构象表位结合；(2)促进被双特异性抗体的抗Aβ部[0382]本文所述的抗CD22、抗CD33或抗CD74抗体或抗原结合片段可通过例如标准ELISA释抗体(例如抗原免疫小鼠的血浆稀释液)并孵育。洗[0383]如上所述的ELISA测定可用于筛选抗体，并且，从而筛选产生与本文公开的抗从每个杂交瘤中选择一个保留了亲本细胞反应性(通过EL[0385]本领域已知多种方法和测定可确定抗体和抗原结合片段的结构和功能特性。例测生物素化MAb结合情况。使用未标记的单克隆抗体和生物素化的单克隆抗体的竞争研究的方法包括本领域已知的标准测定法，例如使用例如Gator系统(ProbeLife)或Octet_96系统(SartoriusAG)的生物层干涉测量法(BLI)，或使用BIACORETM2000SPR仪器(Biacore[0389]在一些实施方式中，本文还提供了利用本文所述方法鉴定或生产的抗CD22、抗[0392]抗体产生的方法在本领域是众所周知的。参见，例如Harlow等人，Antibodies:ALaboratoryManual,(ColdSpringHarborLaboratoryPress,2nded.1988)；Hammerling等人，在:MonoclonalAntibodiesandT_CellHybridomas563,681载体引入宿主细胞，如Sambrook,Fritsch和Maniais(eds),MolecularCloning:ALaboratoryManual,第二版,ColdSpringHarbor,N.Y.,(1989),Ausubel等人(eds.)CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingAssociates,(1989)和DNA可通过使用聚合酶链式反应(PCR)扩增和修饰鼠抗体轻链和重链可变序列的杂交瘤获基酸序列进行寡合成获得。编码的DNA序列可进一步优化，以利于哺乳动物表达所得的抗本，其方法已在中国专利01144894码VL或VH的DNA片段与编码另一种蛋白质(如抗体恒定区或柔性接头)的另一个DNA片段进或VH的DNA片段通过柔性接头可操作地连接到编码另一种蛋白质的另一个DNA片段，如抗[0399]通过将VH编码DNA与编码重链恒定区(CH1、CH2和CH3)的另一个DNA分子可操作地CD32或抗CD74抗体CH3结构域的C末端见，例如Kabat,E.A.,等人(1991)SEQUENCESOFPROTEINSOFIMMUNOLOGICALINTEREST,第五版,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91_3242)，并且包含这些区域的DNA片段可通过标准PCR扩增获得。重链恒定区可以是IgG1、DNA可以进一步可操作地连接到Fab片段的CH1恒定区以产生双特异性领域是已知的(参见，例如Kabat,E.A.,等人(1991)SEQUENCESOFPROTEINSOFIMMUNOLOGICALINTEREST,第五版,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIH[0401]为了制备scFv基因，将VH和VL编码DNA片段与编码柔性接头(如编码氨基酸序列(Gly4_Ser)3)的另一个片段可操作地连接，使得VH和VL序列可作为连续的单链蛋白表达，等人，(1988)Proc.Natl.码部分或全长轻链和重链的DNA插入表达载体，使基因与转录和翻译控制序列可操作地连抗CD33或抗CD74抗体的VH和VL序列转化为全长抗体基因的一种方法是将它们分别插入已免疫球蛋白重链(IgH)增强子的启动子和/或增强子(Gillies等人，(1983)Cell33:717_[0404]除了抗体链基因和调控序列外，本文提供的重组表达载体还可携带额外的序列，潮霉素或甲氨蝶呤的抗性。优选的可选择标记基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(用于甲氨蝶呤选择/扩增的dhfr_宿主细胞)、谷氨酸合成酶(GS)基因和neo基因(用于G418选[0406]用于表达本文所述方法中使用的重组抗体的优选哺乳动物宿主细胞包括SP2/0骨[0408]在可用于本文所公开方法的抗体或其抗原结合片段的重组表达系统的一些实施可操作地连接的抗体重链和轻链基因和DHFR基因的重组表达载体可用于转染是dhfr_的在。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物包含1_1000mg/ml的本文提供的可溶性抗剂、螯合剂、稳定剂和表面活性剂是本领域技术人员众所周知的。可参考Remington:The受的载体包括无菌水溶液或分散剂以及无菌粉末，用于即刻制备无菌可注射溶液或分散无菌过滤的溶液中获得活性成分粉末和任何额外所法已获得专利，或为本领域技术人员所熟知。参见，例如SUSTAINEDANDCONTROLLEDRELEASEDRUGDELIVERYSYSTEMS,J.R.Robinson,ed.,MarcelDekker,Inc.,NewYork,转运到特定细胞或器官，从而增强靶向药物递送(参见，例如V.V.Ranade(1989)国专利5,416,016)甘露糖苷(Umezawa等人，(1988)Biochem.Bio